针对抗CD79B抗体的抗独特型抗体的制作方法

本发明涉及抗独特型抗体及其抗原结合部分，该抗独特型抗体及其抗原结合部分特异性结合含有cd9b441的蛋白质，例如抗体或其抗原结合部分。还提供了用于检测和量化表达包括cd9b441的嵌合抗原受体的细胞的方法。

背景技术：

1、在理解基因组材料的递送和向靶基因组中的整合方面的最新进展在改变各种疾病的护理标准方面具有巨大潜力。t细胞疗法利用了分离的t细胞，这些t细胞已经被基因修饰以增强它们对特定肿瘤相关抗原的特异性。基因修饰可以涉及嵌合抗原受体(car)或外源性t细胞受体的表达，以将新的抗原特异性提供到t细胞上。表达嵌合抗原受体的t细胞(car-t细胞)可以诱导肿瘤免疫反应性。

2、感兴趣的一个特定car靶是cd79b。为了检测抗原或病原体，b细胞在细胞表面上具有b细胞受体(bcr)，该b细胞受体是由跨膜免疫球蛋白分子(mig)以及二硫键连接的cd79a(igα)和cd79b(igβ)的异二聚体组成的多组分受体。cd79b在多种多样的b细胞淋巴瘤中高度表达。已经证实其表达对大多数弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)肿瘤模型的癌细胞活力至关重要。因此，通过抗原损失发展对cd79b靶向剂的抗性可能是不太可能的，从而使其成为开发新型免疫治疗方法的有吸引力的靶标。在临床上，泊洛妥珠单抗(polatuzumab)(polivytm)，一种靶向cd79b的抗体-药物缀合物(adc)分子，最近已被批准用于治疗复发性/难治性(r/r)dlbcl(参见例如polson等人，blood,110:616-623(2007))。泊洛妥珠单抗治疗在与标准护理治疗(苯达莫司汀(bendamustine)和利妥昔单抗(rituximab))组合时引起完全应答(cr)和应答持续(dor)率的增加，从而验证cd79b是有价值的临床靶标(参见例如palanca-wessels等人，the lancet oncology,16(6):704-715(2015))。因此，需要开发靶向cd79b的car-t疗法。还需要针对此类car的抗独特型抗体，以便检测、纯化或选择表达该car的蛋白质和细胞。

技术实现思路

1、本公开提供了抗独特型抗体及其抗原结合部分，该抗独特型抗体及其抗原结合部分特异性结合含有cd9b441的蛋白质，例如抗体或其抗原结合部分。本公开还提供了编码抗独特型抗体及其抗原结合部分的核酸、产生抗独特型抗体及其抗原结合部分的方法、使用抗独特型抗体及其抗原结合部分来检测cd9b441的方法以及包括抗独特型抗体及其抗原结合部分的试剂盒。

2、在一个方面，本公开提供了抗独特型抗体或其抗原结合部分，该抗独特型抗体或其抗原结合部分特异性结合抗cd79b抗体，诸如包含cd9b441的靶抗体。在一些实施方案中，靶抗体或其抗原结合部分包含含有seq id no:29的氨基酸序列的轻链可变(vl)结构域和含有seq id no:30的氨基酸序列的重链可变(vh)结构域。

3、在其他实施方案中，抗独特型抗体或抗原结合部分用于在生物样品中检测cd9b441，包括：(a)提供生物样品；(b)使该生物样品与抗独特型抗体或抗原结合部分接触；以及(c)检测该抗独特型抗体或抗原结合部分。

4、在另一方面，本公开提供了特异性结合cd9b441的抗独特型抗体或其抗原结合部分，其中该抗独特型抗体或抗原结合部分包含轻链可变(vl)结构域的互补决定区，该互补决定区包含具有seq id no:5的氨基酸序列的lcdr1、具有seq id no:6的氨基酸序列的lcdr2、具有seq id no:7的氨基酸序列的lcdr3；并且还包含重链可变(vh)结构域的互补决定区，该互补决定区包含选自由以下组成的组的具有氨基酸序列的hcdr1-3：具有seq idno:17的氨基酸序列的hcdr1、具有seq id no:19的氨基酸序列的hcdr2、具有seq id no:21的氨基酸序列的hcdr3；以及具有seq id no:18的氨基酸序列的hcdr1、具有seq id no:20的氨基酸序列的hcdr2和具有seq id no:22的氨基酸序列的hcdr3。

5、在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含具有与seq id no:8有至少90％序列同一性的氨基酸序列的vl结构域和具有与seq id no:23有至少90％序列同一性的氨基酸序列的vh结构域。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含具有与seq id no:9有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链和具有与seq id no:25有至少90％同一性的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含vl结构域，该vh结构域具有与seq id no:8有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含vh结构域，该vh结构域具有与seq id no:23有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。

6、在某些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含seq id no:8的vl结构域和seq id no:23的vh结构域。在某些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含含有seq id no:9的氨基酸序列的轻链，并且还包含含有seq id no:25的氨基酸序列的重链。

7、在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含具有与seq id no:8有至少90％序列同一性的氨基酸序列的vl结构域和具有与seq id no:24有至少90％序列同一性的氨基酸序列的vh结构域。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含具有与seq id no:9有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链和具有与seq id no:26有至少90％同一性的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含vl结构域，该vh结构域具有与seq id no:8有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含vh结构域，该vh结构域具有与seq id no:24有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。

8、在某些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含seq id no:8的vl结构域和seq id no:24的vh结构域。在某些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分包含含有seq id no:9的氨基酸序列的轻链，并且还包含含有seq id no:26的氨基酸序列的重链。

9、在一些实施方案中，抗原结合部分选自fab、f(ab')2或scfv。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，该嵌合抗体包含鼠igg2a框架。在一些其他实施方案中，抗体是完全人抗体。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分对cd9b441有特异性，其中cd9b441处于嵌合抗原受体(car)的细胞外部分的抗原结合结构域内。在一些实施方案中，cd9b441是scfv，并且抗独特型抗体或抗原结合部分特异性结合car的scfv中的表位。在一些实施方案中，cd9b441特异性结合cd79b。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分不与其他cd79b抗体或其他cd79b结合car交叉反应。在一些实施方案中，car具有选自由seq id no:31-32组成的组的氨基酸序列。

10、在一些实施方案中，本公开提供了核酸，该核酸编码抗独特型抗体或抗原结合部分的重链、轻链或两者。

11、在另一方面，本公开提供了核酸，该核酸编码特异性结合cd9b441的抗独特型抗体或其抗原结合部分的重链、轻链或两者，其中所述核酸包含：seq id no:10的核苷酸序列；seq id no:27的核苷酸序列；或两者。在一些实施方案中，本公开提供了核酸，该核酸编码特异性结合cd9b441的抗独特型抗体或其抗原结合部分的重链、轻链或两者，其中所述核酸包含：seq id no:10的核苷酸序列；seq id no:28的核苷酸序列；或两者。在另一方面，本公开提供了包含核酸序列的载体。例如，该载体可以是自我复制的核酸结构，或被整合到其所引入的宿主细胞的基因组中。在一些实施方案中，载体是表达载体。在另一方面，本公开提供了包含载体的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞为哺乳动物细胞。

12、在另一方面，本公开提供了一种产生特异性结合cd9b441的抗独特型抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：在允许所述抗体或抗原结合部分进行表达的条件下培养宿主细胞，其中宿主细胞包含对抗体或抗原结合部分的重链和轻链进行编码的核苷酸序列；以及从培养物中分离所述抗体或抗原结合部分。在一些实施方案中，宿主细胞编码包含核酸的载体，该核酸编码抗独特型抗体或其抗原结合部分。

13、在另一方面，本公开提供了一种用于在生物样品中检测cd9b441的方法，该方法包括：(a)提供生物样品；(b)使该生物样品与抗独特型抗体或抗原结合部分接触；以及(c)检测该抗独特型抗体或抗原结合部分。

14、在另一方面，本公开提供了一种用于在生物样品中检测包含cd9b441的嵌合抗原受体(car)的表达的方法，该方法包括：(a)提供生物样品；(b)使该生物样品与抗独特型抗体或抗原结合部分接触；以及(c)检测该抗独特型抗体或抗原结合部分，从而检测car的表达。

15、在一些实施方案中，该抗体包含可检测标签。在一些实施方案中，该方法还包括在检测抗独特型抗体或抗原结合部分之前，使抗独特型抗体或抗原结合部分与可检测标签接触。在一些实施方案中，生物样品为血液、血清或尿液。

16、在一些方面，本公开提供了一种用于在生物样品中检测cd9b441的试剂盒，该试剂盒包括：(a)抗独特型抗体或抗原结合部分；和(b)用于检测抗独特型抗体或抗原结合部分的使用说明。

17、在其他方面，本公开提供了一种从样品中纯化cd9b441的方法，该方法包括：(a)提供包含cd9b441的生物样品；(b)使该生物样品与抗独特型抗体或抗原结合部分接触；以及(c)捕获抗独特型抗体或抗原结合部分，从而纯化cd9b441。

18、在其他方面，本公开提供了一种从细胞群中选择car-t细胞的方法，该方法包括：(a)提供包含car-t细胞的生物样品；(b)使该生物样品与抗独特型抗体或抗原结合部分接触；以及(c)捕获抗独特型抗体或抗原结合部分，从而选择car-t细胞。在一些实施方案中，抗独特型抗体或其抗原结合部分对cd9b441有特异性。

19、本公开涵盖前述方面和实施方案中任一者的所有组合，以及与详细描述和实施例中阐述的实施方案中的任一者的组合。