一种特异性识别CLEC12A受体的全人源单克隆抗体

本发明属于生物医药，涉及一种抗clec12a受体的单克隆抗体及其制备方法。具体而言本发明公开了一种能够特异识别clec12a受体的单克隆抗体。

背景技术：

1、clec12a(c-type lectin domain family 12 member a),又称为cll-1、micl、dcal-2、klrl-1和cd371。clec12a主要表达在髓系细胞上，包括巨噬细胞、粒细胞和dc细胞系等[1]。clec12a胞内存在免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-basedinhibition motif，itim),胞外具有c型凝集素样结构域(c-type lectin like domain，ctld)。clec12a在急性髓系白血病中扮演着重要的角色，大量研究表明，clec12a选择性地高表达在急性髓系白血病细胞表面，而在正常的造血细胞表面几乎检测不到表达。因此，clec12a成为检测急性髓系白血病细胞的分子标志物和靶向治疗急性髓系白血病的新型免疫治疗靶点。此外，clec12a还是骨髓增生异常综合征癌症干细胞的标志物。现阶段急性髓系白血病治疗方法最主要的是化学药物疗法，但治疗效果不理想，易复发，副作用大。目前利用生物技术治疗急性髓系白血病较为火热，如利用靶向clec12a抗体治疗或设计clec12acar-t细胞疗法治疗急性髓系白血病，这些治疗方法现在正处于研究中或临床实验中。本专利通过筛选出靶向clec12a的抗体，为急性髓系白血病提供新的有效治疗性抗体[2,3,4,5]。

2、参考文献：

3、1.han y m,zhang m h,li n,et al.klrl1,a novel killer cell lectinlikereceptor,inhibits natural killer cell cytotoxicity[j].blood,2004,104(9):2858-2866.

4、2.marshalla s j,willment j a,pyz e,et al.human micl(clec12a)isdifferentially glycosylated and is down-regulated following cellularactivation[j].european journal of immunology,2006,36(8):2159-2169.

5、3.marshall a s j,willment j a,lin h h,et al.identification andcharacterization of a novel human myeloid inhibitory c-type lectin-likereceptor(micl)that is predominantly expressed on granulocytes and monocytes[j].journal of biological chemistry,2004,279(15):14792-14802.

6、4.bakker a b,van den oudenrijn s,bakker a q,et al.c-type lectin-likemolecule-1:a novel myeloid cell surface marker associated with acute myeloidleukemia[j].cancer res,2004,64(22):8443-50.

7、5.leong s r,sukumaran s,hristopoulos m,et al.an anti-cd3/anti-cll-1bispecific antibody for the treatment of acute myeloid leukemia[j].blood,2017,129(5):609-618.

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种能特异性识别clec12a的单克隆抗体或抗体片段及其制备方法，该抗体或抗体片段可以识别结合clec12a。

2、为了达到上述目的，本发明提供了一种特异性识别clec12a的全人源单克隆抗体，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构为scfv-fc，scfv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为seq id no：2，其轻链可变区的氨基酸序列为seq id no：1，fc指的是恒定区。特异性识别clec12a的全人源抗体的序列为seq id no：3。

3、所述的重链可变区氨基酸序列包括seq id no：2或与seq id no：2中的氨基酸至少有80％同源性的氨基酸序列。

4、所述的轻链可变区氨基酸序列包括seq id no：1或与seq id no：1中的氨基酸至少有80％同源性的氨基酸序列。

5、所述的基因工程抗体包含fab片段，f(ab’)2片段，f(ab)’片段，fv片段和scfv片段中的一种，上述各片段中两种以上的组合，或上述各片段中的至少一种与其它蛋白或肽链形成的衍生物。

6、所述的基因工程抗体的重链cdr1区序列为tyamn，重链cdr2区序列为sisgsgdhtnyadsvkg，重链cdr3区序列为ygsycstntcyrhfks，轻链cdr1区序列为rasqgirndlg，轻链cdr2区序列为aasslqs，轻链cdr3区序列为lqnnsyprt。

7、所述的基因工程抗体的重链和轻链的cdr1,cdr2,cdr3序列内一个或少数几个氨基酸突变的序列。少数几个氨基酸突变一般指抗体cdr区3个以内的氨基酸随机突变。

8、本发明提供的单克隆抗体是一种单链抗体，通过筛选全人源单链抗体噬菌体库得到，命名为anti-clec12a-fc，经过检测该单链抗体对clec12a选择性结合。单独使用该抗体的免疫印迹即可特异性检测出人源clec12a胞外片段。

技术特征：

1.一种特异性识别并结合clec12a受体的全人源单抗，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构为scfv-fc，scfv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为seq id no：2，其轻链可变区的氨基酸序列为seq id no：1，fc指的是恒定区。

2.如权利要求1所述的特异性结合clec12a受体的全人源单抗，其特征在于，其序列为seq id no：3。

3.一种特异性识别clec12a的基因工程抗体，其特征在于，所述的基因工程抗体的重链cdr1区序列为tyamn，重链cdr2区序列为sisgsgdhtnyadsvkg，重链cdr3区序列为ygsycstntcyrhfks，轻链cdr1区序列为rasqgirndlg，轻链cdr2区序列为aasslqs，轻链cdr3区序列为lqnnsyprt。。

4.如权利要求3所述的特异性识别clec12a的基因工程抗体，其特征在于，所述的基因工程抗体包含fab片段，f(ab’)2片段，f(ab)’片段，fv片段和scfv片段中的一种，上述各片段中两种以上的组合，或上述各片段中的至少一种与其它蛋白或肽链形成的衍生物。

5.权利要求1-2中任一项所述的特异性结合clec12a受体的全人源单抗或权利要求3-4中任一项所述的基因工程抗体在制备用于检测与clec12a相关的免疫印迹试剂中的应用。

6.一种用于检测与clec12a相关的免疫印迹试剂，其包含权利要求1-2中任一项所述的特异性结合clec12a受体的全人源单抗或权利要求3-4中任一项所述的基因工程抗体作为活性成份。

技术总结
本发明提供了一种特异性识别并结合CLEC12A的全人源抗体，其特征在于，其为重组免疫球蛋白，结构形式为scFv‑Fc，scFv指的是单链抗体，包括重链可变区和轻链可变区，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：3，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，Fc指的是恒定区。特异性识别CLEC12A的全人源抗体的序列为SEQ ID NO：4。该抗体能够特异性地识别并结合人CLEC12A受体，并且能够作为CLEC12A受体的检测诊断及治疗性抗体。

技术研发人员：汤化,钱磊
受保护的技术使用者：南京大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15