小鼠抗兔CD5单克隆抗体及其应用的制作方法

本发明涉及生物，尤其是涉及一种小鼠抗兔cd5单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、流式细胞分选具有可以通过不同荧光标记进行高通量细胞分选的特点，能够在短时间对几十万到几千万的细胞群进行分选，通过b细胞表面膜结合免疫球蛋白和特异性荧光标记抗原筛选得到的靶b细胞，进行分离及体外单细胞rna提取和扩增，得到重组抗体序列信息，可以大大提高从免疫动物中得到特定抗原抗体序列的速度。因此，基于流式细胞分选进行单个b细胞分离的抗体开发方案能够提高抗体开发效率。

2、目前，单个b细胞体外培养、通过微流控技术进行单个b细胞筛选是常用的两种单个b细胞分选方案，这两种方式都不需要通过筛选t细胞，获得抗原结合阳性的b细胞。因此，开发基于流式细胞分选进行兔单个b细胞分离的抗体开发方案需要使用相应的兔t细胞分选标志物抗体，从而保证获得的b细胞纯度。其次，目前也有报道的小鼠抗兔cd5单克隆抗体，但基本掌握在国外公司(如bd，bio-rad等)，因此基于小鼠杂交瘤技术开发自主的抗兔cd5抗体需求迫切。

3、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的第一目的在于提供一种小鼠抗兔cd5单克隆抗体。

2、本发明的第二目的在于提供上述小鼠抗兔cd5单克隆抗体在cd5+t细胞群分选中的应用。

3、本发明的第三目的在于提供一种cd5+t细胞群的标记物。

4、本发明的第四目的在于提供一种杂交瘤细胞。

5、本发明的第五目的在于提供一种小鼠抗兔cd5单克隆抗体的制备方法。

6、第一方面，本发明提供了一种小鼠抗兔cd5单克隆抗体，所述小鼠抗兔cd5单克隆抗体的可变区包括：具有如seq id no.1所示氨基酸序列的互补决定区cdr1-vh、具有如seqid no.2所示氨基酸序列的互补决定区cdr2-vh、具有如seq id no.3所示氨基酸序列的互补决定区cdr3-vh、具有如seq id no.4所示氨基酸序列的互补决定区cdr1-vl、具有如seqid no.5所示氨基酸序列的互补决定区cdr2-vl和具有如seq id no.6所示氨基酸序列的互补决定区cdr3-vl。

7、作为进一步技术方案，所述可变区包括具有如seq id no.7所示氨基酸序列的重链可变区vh。

8、作为进一步技术方案，所述可变区包括具有如seq id no.8所示氨基酸序列的轻链可变区vl。

9、第二方面，本发明提供了上述小鼠抗兔cd5单克隆抗体在cd5+t细胞群分选中的应用。

10、作为进一步技术方案，所述cd5+t细胞群包括兔外周血淋巴细胞中的cd5+t细胞群。

11、第三方面，本发明提供了一种cd5+t细胞群的标记物，所述标记物包括上述小鼠抗兔cd5单克隆抗体和荧光染料；

12、所述小鼠抗兔cd5单克隆抗体与荧光染料偶联。

13、作为进一步技术方案，所述荧光染料包括ifluor488或ifluor594。

14、第四方面，本发明提供了一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞表达上述小鼠抗兔cd5单克隆抗体。

15、作为进一步技术方案，所述杂交瘤细胞由小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合得到；

16、所述小鼠脾细胞表达所述小鼠抗兔cd5单克隆抗体。

17、第五方面，本发明提供了上述小鼠抗兔cd5单克隆抗体的制备方法，包括：在小鼠腹腔内培养上述杂交瘤细胞，然后分离得到所述小鼠抗兔cd5单克隆抗体。

18、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

19、本发明提供了一种小鼠抗兔cd5单克隆抗体，经发明人研究发现，该单克隆抗体特异性强，灵敏度高，能够特异性识别cd5+t细胞群，进而用于cd5+t细胞群的分选。

技术特征：

1.一种小鼠抗兔cd5单克隆抗体，其特征在于，所述小鼠抗兔cd5单克隆抗体的可变区包括：具有如seq id no.1所示氨基酸序列的互补决定区cdr1-vh、具有如seq id no.2所示氨基酸序列的互补决定区cdr2-vh、具有如seq id no.3所示氨基酸序列的互补决定区cdr3-vh、具有如seq id no.4所示氨基酸序列的互补决定区cdr1-vl、具有如seq id no.5所示氨基酸序列的互补决定区cdr2-vl和具有如seq id no.6所示氨基酸序列的互补决定区cdr3-vl。

2.根据权利要求1所述的小鼠抗兔cd5单克隆抗体，其特征在于，所述可变区包括具有如seq id no.7所示氨基酸序列的重链可变区vh。

3.根据权利要求1所述的小鼠抗兔cd5单克隆抗体，其特征在于，所述可变区包括具有如seq id no.8所示氨基酸序列的轻链可变区vl。

4.权利要求1-3任一项所述的小鼠抗兔cd5单克隆抗体在cd5+t细胞群分选中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述cd5+t细胞群包括兔外周血淋巴细胞中的cd5+t细胞群。

6.一种cd5+t细胞群的标记物，其特征在于，所述标记物包括权利要求1-3任一项所述的小鼠抗兔cd5单克隆抗体和荧光染料；

7.根据权利要求6所述的标记物，其特征在于，所述荧光染料包括ifluor488或ifluor594。

8.一种杂交瘤细胞，其特征在于，所述杂交瘤细胞表达权利要求1-3任一项所述的小鼠抗兔cd5单克隆抗体。

9.根据权利要求8所述的杂交瘤细胞，其特征在于，所述杂交瘤细胞由小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合得到；

10.权利要求1-3任一项所述小鼠抗兔cd5单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括：在小鼠腹腔内培养权利要求8或9所述的杂交瘤细胞，然后分离得到所述小鼠抗兔cd5单克隆抗体。

技术总结
本发明提供了一种小鼠抗兔CD5单克隆抗体及其应用，涉及生物技术领域。本发明提供的小鼠抗兔CD5单克隆抗体，所述小鼠抗兔CD5单克隆抗体的可变区包括：具有特定氨基酸序列的互补决定区CDR1‑VH、CDR2‑VH、CDR3‑VH、CDR1‑VL、CDR2‑VL和CDR3‑VL。经发明人研究发现，该单克隆抗体特异性强、灵敏度高，能够特异性识别CD5+T细胞群，进而用于CD5+T细胞群的分选。

技术研发人员：高关刚,房郁坤,宋秀丽
受保护的技术使用者：杭州华安生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15