一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基及诱导方法与流程

本发明属于细胞培养，具体涉及一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基及诱导方法。

背景技术：

1、间充质干细胞（mscs）被发现具有很好的神经分化潜能，被应用于神经再生组织工程和治疗神经类疾病中，如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病和肌萎缩性侧索硬化症等。mscs在体外分化为神经元或者神经元有助于提高干细胞疗法的疗效。高效、低廉、稳定和快速的神经分化方案有助于提高mscs的分化效率，促进其临床前和临床应用。

2、但是市场上存在产品价格高昂，添加多种昂贵的因子促进细胞分化，成本高、且诱导成神经元周期长、花费操作人员的时间久，需要频繁的定期操作进行，耗费较大的人力物力。其次，市场上诱导产品添加物种类繁杂，成分不确定，批次差异明显。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基，该培养基含有细胞所需的营养因子和人源促生长小分子，无异源蛋白，可以提供维持细胞生长和增殖的良好环境。通过添加乙酸芳樟酯，异鼠李素，茵陈黄酮，可以显著提高间充质干细胞的贴壁，促进细胞增殖速率，维持细胞表面表型，并维持细胞多项分化潜能，能够较好保护干细胞。此外，本发明添加的成分明确，效果稳定，无批次间差异，适合标准化的工艺生产。

2、本发明通过以下技术方案实现：

3、一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基，包括：

4、将重组人纤连蛋白，人表皮生长因子egf，人碱性成纤维生长因子bfgf，荜澄茄素，龙胆酮，曲克芦丁和山奈酚混于dmem高糖基础培养基中。

5、一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基的制备方法，如下步骤：

6、将重组人纤连蛋白，人表皮生长因子egf，人碱性成纤维生长因子bfgf，荜澄茄素，龙胆酮，曲克芦丁和山奈酚的浓缩液依次按照1：1000的比例加入dmem高糖基础培养基中混匀，然后用滤膜过滤除菌，完成。

7、作为优选地，所述重组人纤连蛋白的浓度为1-20 mg/l，人表皮生长因子egf的浓度为1-40μg/l，人碱性成纤维生长因子bfgf的浓度为1-40μg/l，荜澄茄素的浓度为10-50μmol/l，龙胆酮的浓度为10-100μmol/l，曲克芦丁的浓度为1-20μmol/l和山奈酚的浓度为5-50μmol/l。

8、作为优选地，所述重组人纤连蛋白的浓度为5-15 mg/l，人表皮生长因子egf的浓度为10-30μg/l，人碱性成纤维生长因子bfgf的浓度为10-30μg/l，荜澄茄素的浓度为20-45μmol/l，龙胆酮的浓度为30-80μmol/l，曲克芦丁的浓度为5-15μmol/l和山奈酚的浓度为15-40μmol/l。

9、作为优选地，所述重组人纤连蛋白的浓度为10 mg/l，人表皮生长因子egf的浓度为20μg/l，人碱性成纤维生长因子bfgf的浓度为20μg/l，荜澄茄素的浓度为40μmol/l，龙胆酮的浓度为50μmol/l，曲克芦丁的浓度为10μmol/l和山奈酚的浓度为30μmol/l。

10、作为优选地，所述dmem高糖基础培养基保存于0-8℃，浓缩液保存于-20℃以下。

11、一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基在促进间充质干细胞分化为神经元的培养基中的应用。

12、一种促进间充质干细胞分化为神经元的诱导方法，包括如下步骤：

13、s1、间充质干细胞经过细胞复苏培养或者传代培养后，接种后添加普通dmem完全培养基继续培养；

14、s2、待细胞长满后，更换为如权利要求1所述的促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基继续培养；

15、s3、每2-3天换一次液，培养2-4周后，即可观察细胞形态并传代后染色观察神经分化情况。

16、与现有技术相比，本发明至少具有如下技术效果：

17、本发明提供了一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基，该培养基含有细胞所需的营养因子和人源促生长小分子，无异源蛋白，可以提供维持细胞生长和增殖的良好环境。通过添加乙酸芳樟酯，异鼠李素，茵陈黄酮，本发明可以显著提高间充质干细胞的贴壁，促进细胞增殖速率，维持细胞表面表型，并维持细胞多项分化潜能，能够较好保护干细胞。此外，本发明添加的成分明确，效果稳定，无批次间差异，适合标准化的工艺生产。

技术特征：

1.一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基的制备方法，其特征在于，如下步骤：

3. 根据权利要求2所述的一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基的制备方法，其特征在于，所述重组人纤连蛋白的浓度为1-20 mg/l，人表皮生长因子egf的浓度为1-40 μg/l，人碱性成纤维生长因子bfgf的浓度为1-40 μg/l，荜澄茄素的浓度为10-50 μmol/l，龙胆酮的浓度为10-100 μmol/l，曲克芦丁的浓度为1-20 μmol/l和山奈酚的浓度为5-50 μmol/l。

4. 根据权利要求3所述的一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基的制备方法，其特征在于，所述重组人纤连蛋白的浓度为5-15 mg/l，人表皮生长因子egf的浓度为10-30 μg/l，人碱性成纤维生长因子bfgf的浓度为10-30 μg/l，荜澄茄素的浓度为20-45 μmol/l，龙胆酮的浓度为30-80 μmol/l，曲克芦丁的浓度为5-15 μmol/l和山奈酚的浓度为15-40 μmol/l。

5. 根据权利要求4所述的一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基的制备方法，其特征在于，所述重组人纤连蛋白的浓度为10 mg/l，人表皮生长因子egf的浓度为20 μg/l，人碱性成纤维生长因子bfgf的浓度为20 μg/l，荜澄茄素的浓度为40 μmol/l，龙胆酮的浓度为50 μmol/l，曲克芦丁的浓度为10 μmol/l和山奈酚的浓度为30 μmol/l。

6.根据权利要求4所述的一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基的制备方法，其特征在于，所述dmem高糖基础培养基保存于0-8℃，浓缩液保存于-20℃以下。

7.一种如权利要求1所述的促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基在促进间充质干细胞分化为神经元的培养基中的应用。

8.一种促进间充质干细胞分化为神经元的诱导方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本发明公开了一种促进间充质干细胞分化为神经元的无血清诱导培养基及诱导方法，属于细胞培养技术领域。该培养基含有细胞所需的营养因子和人源促生长小分子，无异源蛋白，可以提供维持细胞生长和增殖的良好环境。通过添加乙酸芳樟酯，异鼠李素，茵陈黄酮，本发明可以显著提高间充质干细胞的贴壁，促进细胞增殖速率，维持细胞表面表型，并维持细胞多项分化潜能，能够较好保护干细胞。此外，本发明添加的成分明确，效果稳定，无批次间差异，适合标准化的工艺生产。

技术研发人员：李雪阳,雷建慧,赵雅宁,刘彦彦
受保护的技术使用者：北京葆来生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15