1.一种基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:
2. 根据权利要求1所述基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤2中,所述三质粒系统中,所述plvx-ef1a-ires-puro-rtta3质粒的用量为10.65 μg,所述pspax2质粒的用量为8.598 μg,所述pmd2.g质粒的用量为2.591 μg。
3. 根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤2中,所述jetprime转染试剂缓冲液的用量为1 ml,所述jetprime转染试剂的用量为三质粒系统中的质粒用量总和的2-3倍。
4. 根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤2中,所述静置的条件为室温下静置10-15 min。
5.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤3中,所述预处理是指用胰酶消化293ft细胞并重悬,所述293ft细胞的接种量为10×106。
6.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤3中,所述转染试剂均匀打入所述无抗培养皿的底部。
7.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤3中,转染的操作包括以下步骤:
8.根据权利要求7所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,所述聚凝胺的浓度为6-8μg/ml。
9.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤6中,所述共转的操作包括如下步骤:
10.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,所述步骤7中,所述靶蛋白特异性的抑制剂为nvp-dky709抑制剂。
11.根据权利要求10所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,所述步骤7中,所述多西环素诱导的操作包括如下步骤: