一种基于多西环素诱导介导型CRISPR基因敲入技术的药物筛选方法与流程

文档序号:35575674发布日期:2023-09-24 15:07阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:

2. 根据权利要求1所述基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤2中,所述三质粒系统中,所述plvx-ef1a-ires-puro-rtta3质粒的用量为10.65 μg,所述pspax2质粒的用量为8.598 μg,所述pmd2.g质粒的用量为2.591 μg。

3. 根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤2中,所述jetprime转染试剂缓冲液的用量为1 ml,所述jetprime转染试剂的用量为三质粒系统中的质粒用量总和的2-3倍。

4. 根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤2中,所述静置的条件为室温下静置10-15 min。

5.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤3中,所述预处理是指用胰酶消化293ft细胞并重悬,所述293ft细胞的接种量为10×106。

6.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤3中,所述转染试剂均匀打入所述无抗培养皿的底部。

7.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤3中,转染的操作包括以下步骤:

8.根据权利要求7所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,所述聚凝胺的浓度为6-8μg/ml。

9.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,步骤6中,所述共转的操作包括如下步骤:

10.根据权利要求1所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,所述步骤7中,所述靶蛋白特异性的抑制剂为nvp-dky709抑制剂。

11.根据权利要求10所述的基于多西环素诱导介导型crispr基因敲入技术的药物筛选方法,其特征在于,所述步骤7中,所述多西环素诱导的操作包括如下步骤:


技术总结
本发明公开一种基于多西环素诱导介导型CRISPR基因敲入技术的药物筛选方法,构建了多西环素诱导介导的CRISPR基因敲入细胞模型,在基因组层面上进行编辑,通过增加多西环素诱导介导的方式,有效避免了长期引入外源基因而导致的可能发生的细胞突变等情况,增加了药物筛选体系的稳定性;还通过引入GFP荧光蛋白检测体系,实现了对基因敲入模型的有效性实现指征,从而克服基因编辑技术潜在的脱靶效应,利于靶点药物的筛选,进一步助力于新药的研发。

技术研发人员:王瑞峰,项键,徐能蔚,甘雨苗,谷庆阳
受保护的技术使用者:苏州药明康德新药开发有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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