一种广谱识别人源诺如病毒的可溶性单链抗体及制备方法

文档序号:35869326发布日期:2023-10-28 00:33阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种可溶性单链抗体j5d,其特征在于,所述可溶性单链抗体的氨基酸序列如seq idno.3所示。

2.如权利要求7所述的可溶性单链抗体j5d的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤1还包括以下步骤:

4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2还包括提取所述重组原核表达质粒pmal-c5x-j5d,化学法转化origami2感受态细胞,阳性克隆保存备用。

5.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤3还包括以下步骤:取含所述重组原核表达质粒pmal-c5x-j5d的origami2大肠杆菌菌液在含氨苄青霉素的lb固体培养基上划线,培养;挑单克隆于含氨苄青霉素的lb液体培养基中,振荡培养;扩大培养,当od600为0.6左右时,取3ml未诱导菌液,离心后弃第一上清,将第一沉淀于-20℃保存;向剩余菌液中加入iptg诱导,振荡培养,取菌液,离心后弃第二上清,将第二沉淀于-20℃保存;剩余诱导后的菌液离心,弃上清,收集菌体,加入lysis buffer重悬,使用超声波细胞粉碎机破碎菌体释放蛋白,分别收集可能含有可溶性蛋白的上清和可能含有不溶性蛋白的沉淀;所述第一沉淀为未诱导菌体、所述第二沉淀为诱导后菌体、所述可能含有可溶性蛋白的上清为诱导菌体破碎后上清、所述可能含有不溶性蛋白的沉淀为诱导菌体破碎后沉淀,将所述未诱导菌体、所述诱导后菌体、所述诱导菌体破碎后上清、所述诱导菌体破碎后沉淀利用sds-page鉴定j5d蛋白是否成功诱导表达,以及是否为可溶性表达。

6.一种重组原核表达质粒pmal-c5x-j5d,其特征在于,所述重组原核表达质粒氨基酸序列如seq id no.4所示。

7.如权利要求6所述的重组原核表达质粒pmal-c5x-j5d的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

8.如权利要求7所述的构建方法,其特征在于,所述步骤1)中所述上游引物含nde i限制性内切酶酶切位点,所述下游引物含hind iii限制性内切酶酶切位点和his标签编码序列。

9.如权利要求7所述的构建方法,其特征在于,所述步骤1)中所述上游引物为5h-fndei,所述5h-f ndei的核苷酸序列如seq id no.5所示,所述下游引物为5k-rhindiii,所述5k-r hindiii的核苷酸序列如seq id no.6所示。

10.如权利要求1所述的可溶性单链抗体j5d在广谱识别不同基因型人源诺如病毒的试剂中的应用。


技术总结
本发明公开了一种广谱识别人源诺如病毒的可溶性单链抗体及制备方法,涉及生物技术领域,可溶性单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示;其制备方法包括:获得广谱识别hNoV的可溶性单链抗体J5D核苷酸序列;构建重组原核表达质粒pMAL‑c5X‑J5D;J5D的原核表达和纯化。重组原核表达质粒pMAL‑c5X‑J5D氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。可溶性单链抗体J5D在广谱识别人源诺如病毒的试剂中的应用。本发明提供一种简单易行的可广谱识别不同基因型hNoV的scFv制备方法。成功制备了可广谱性识别不同基因型hNoV的scFv,特异性强、稳定性高,操作简单。

技术研发人员:王大鹏,王凤青
受保护的技术使用者:上海交通大学
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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