一种转录调控序列及其应用

本发明涉及微生物，具体是一种转录调控序列及其应用。

背景技术：

1、赤藓糖醇(c4h10o4，mw＝122.12g/mol)是一种白色、无臭、不吸湿、热稳定的结晶性粉末，熔点为121.5℃，22℃下在水中的溶解度为610mg/ml。赤藓糖醇具有无热量、不增糖、抗氧化、保护内皮等优势，因此常被用作许多产品的原料使用，如被用作食品涂料、烘焙食品、发酵牛奶、糖果和巧克力等产品的原料来使用。

2、生产赤藓糖醇的菌种有真菌和细菌等，目前用于生产赤藓糖醇的菌株主要是解脂耶氏酵母(yarrowia lipolytica)。鉴于赤藓糖醇重要的应用价值和巨大的需求市场，寻求发酵性能优良的赤藓糖醇生产菌株仍是所有研究开发工作的基础。

3、现有的筛选赤藓糖醇生产菌株的方法主要是先对待筛选菌株进行培养得到发酵液，然后通过高效液相色谱(hplc)法测定发酵液中赤藓糖醇的含量，但该方法包括复杂的样品处理步骤，检测周期也比较长，不能够对赤藓糖醇发酵液进行快速检测，难以实现赤藓糖醇生产菌株的高通量筛选。专利公布号为“cn110734927a”(申请号：201911081728.0)的发明专利申请中公开了一种重组大肠杆菌及其在筛选赤藓糖醇生产菌株中的应用，通过将重组大肠杆菌接种至待筛选菌株的发酵上清液中进行共培养，若待筛选菌株可生产赤藓糖醇，所获得的共培养液中便可检测到标记基因的表达，通过标记基因的表达量即可筛选出赤藓糖醇生产能力较高的菌株。

4、但是，当本实验室对上述专利中的技术方案进行验证时发现，该专利所构建的重组大肠杆菌在筛选赤藓糖醇生产菌株时的背景荧光强度较高，这将会导致样品信号不清晰、细节丢失等情况，从而对赤藓糖醇生产菌株的筛选结果造成干扰。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种转录调控序列及其应用，将包含该转录调控序列的重组大肠杆菌用于筛选赤藓糖醇生产菌株，能够有效降低背景荧光强度、增强响应信号，从而提高赤藓糖醇生产菌株的筛选效率。

2、本发明技术方案如下：

3、一种转录调控序列，其核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、所述转录调控序列是对专利公布号为“cn110734927a”中所公开的编码转录调控因子的基因序列进行突变获得，突变前的核苷酸序列如seq id no.5所示。

5、一种重组质粒，包含所述转录调控序列。

6、优选的，所述重组质粒是以pet-22b(+)质粒为表达载体。

7、优选的，所述重组质粒还包含编码阻遏蛋白的基因序列和编码荧光蛋白的标记基因序列。

8、进一步优选的，所述编码阻遏蛋白的基因序列如seq id no.2所示。

9、进一步优选的，所述编码荧光蛋白的标记基因序列如seq id no.3所示。

10、进一步优选的，所述重组质粒的核苷酸序列如seq id no.4所示。

11、一种重组大肠杆菌，包含所述重组质粒。

12、优选的，所述重组大肠杆菌以大肠杆菌bl21(de3)为表达宿主。

13、所述转录调控序列或重组质粒或重组大肠杆菌在筛选赤藓糖醇生产菌株中的应用。

14、一种筛选赤藓糖醇生产菌株的方法，是将所述重组大肠杆菌接种至待筛选菌株的发酵上清液中进行共培养，得到共培养液，根据共培养液的荧光强度即可确认待筛选菌株的赤藓糖醇生产能力。

15、有益效果：

16、本发明提供了一种转录调控序列及其在筛选赤藓糖醇生产菌株中的应用，该转录调控序列是对现有技术中所公开的转录调控序列进行突变获得，相比于现有技术，采用突变后的转录调控序列所制备的重组大肠杆菌能够在筛选赤藓糖醇生产菌株的过程中有效降低背景荧光强度，且荧光响应信号是现有技术的6.5倍，显著提高了赤藓糖醇生产菌株的筛选效率。

技术特征：

1.一种转录调控序列，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.一种重组质粒，其特征在于，包含权利要求1所述的转录调控序列。

3.如权利要求2所述的重组质粒，其特征在于，还包含编码阻遏蛋白的基因序列和编码荧光蛋白的标记基因序列。

4.如权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述编码阻遏蛋白的基因序列如seq idno.2所示。

5.如权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述编码荧光蛋白的标记基因序列如seq id no.3所示。

6.如权利要求2所述的重组质粒，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.4所示。

7.一种重组大肠杆菌，其特征在于，包含权利要求2所述的重组质粒。

8.如权利要求7所述的重组大肠杆菌，其特征在于，以大肠杆菌bl21(de3)为表达宿主。

9.权利要求1所述转录调控序列或权利要求2～6任一项所述重组质粒或权利要求7～8任一项所述重组大肠杆菌在筛选赤藓糖醇生产菌株中的应用。

10.一种筛选赤藓糖醇生产菌株的方法，其特征在于，是将权利要求7～8任一项所述重组大肠杆菌接种至待筛选菌株的发酵上清液中进行共培养，得到共培养液，根据共培养液的荧光强度即可确认待筛选菌株的赤藓糖醇生产能力。

技术总结
本发明提供了一种转录调控序列及其应用，属于微生物技术领域，该转录调控序列是对现有技术中所公开的转录调控序列进行突变获得，相比于现有技术，采用突变后的转录调控序列所制备的重组大肠杆菌能够在筛选赤藓糖醇生产菌株的过程中有效降低背景荧光强度，且荧光响应信号是现有技术的6.5倍，显著提高了赤藓糖醇生产菌株的筛选效率。

技术研发人员：汪俊卿,刘慧,冯哲,董金凯,高晟,刘月涵,孙悦,范翰,苏静,李丕武,王瑞明,王婷
受保护的技术使用者：齐鲁工业大学（山东省科学院）
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24