一种2’-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法与流程

文档序号:37472106发布日期:2024-03-28 18:54阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于,所述制备方法为:

2.依据权利要求1所述2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于, pnp粗酶液采用expnp粗酶液、bhpnp粗酶液或者ahdeod粗酶液。

3.依据权利要求1所述2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于,所述ectp粗酶液的制备过程包括如下步骤:

4.依据权利要求2所述2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于,所述ahdeod粗酶液的制备过程包括如下步骤:

5.依据权利要求4所述2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于,所述expnp粗酶液和bhpnp粗酶液的制备过程与ahdeod粗酶液的制备过程一致。

6.依据权利要求3所述2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于,所述ectp基因片段的氨基酸序列如序列表seq id no.1所示。

7.依据权利要求5所述2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于,所述ahdeod基因片段的氨基酸序列如序列表seq id no.2所示,所述expnp基因片段的氨基酸序列如序列表seq id no.3所示,所述bhpnp基因片段的氨基酸序列如序列表seq id no.4所示。

8.依据权利要求3或4所述2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于,进行连接过夜时,温度设为16℃。

9.依据权利要求3或4所述2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于,振荡培养时,培养条件设为37℃、220rpm;

10.依据权利要求1所述2'-脱氧-2-氟腺苷的双酶催化制备方法,其特征在于,进行催化反应时,反应条件设为50℃,220rpm,10小时。


技术总结
本发明属于2’‑脱氧‑2‑氟腺苷的酶催化技术领域,提供了一种2'‑脱氧‑2‑氟腺苷的双酶催化制备方法,将EcTP粗酶液、PNP粗酶液、2'‑F‑dUR和腺嘌呤A混合成混合液,再将混合液进行催化反应,得产物,产物即2'‑脱氧‑2‑氟腺苷,2'‑F‑dAR。该制备方法不需要纯化酶,直接用分别表达嘌呤核苷磷酸化酶和胸腺嘧啶核苷磷酸化酶的细胞破碎液,在一个反应器内一步反应即可制备2'‑F‑dAR,不涉及中间步骤和反应,极大地简化了工艺流程,降低了生产成本,且设备利用率高。

技术研发人员:胡美荣,李帅,刘巧,杨蓉,钱瑾
受保护的技术使用者:上海合润远生物技术有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/3/27
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