一种调节巨噬细胞极化的方法

文档序号:37511708发布日期:2024-04-01 14:18阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种调节巨噬细胞极化的方法,其特征在于:它采用磁珠的细胞分选方案进行细胞分离,制备单细胞悬液后,用抗cd11b粒子标记肿瘤或瘤周组织的阳性细胞,标记后,使用bdimagtm磁性细胞分选仪分离细胞,收集阴性(cd11b-)和阳性(cd11b+)部分进行分析。

2.根据权利要求1所述一种调节巨噬细胞极化的方法,其特征在于:它包含骨髓来源的巨噬细胞的获得、动物模型的建立、免疫印迹实验、免疫荧光染色、免疫组织化学与实时定量pcr分析。

3.根据权利要求2所述一种调节巨噬细胞极化的方法,其特征在于:骨髓来源的巨噬细胞的获取;

4.根据权利要求2所述一种调节巨噬细胞极化的方法,其特征在于:建立动物模型;其中,动物为tbk1fl/fl小鼠与lysm-cre小鼠,通过tbk1fl/fl小鼠与lysm-cre小鼠杂交,获得tbk1fl/fllysm-cre(以下命名为tbk1-mko)和tbk1fl/fl野生型(wt)小鼠;通过pcr基因型鉴定确定基因型,选择6-8周龄小鼠用于研究,饲养条件为受控条件(光照/黑暗循环12h,相对湿度60%±10%,温度22±1℃)。

5.根据权利要求2所述一种调节巨噬细胞极化的方法,其特征在于:gbm的动物模型;

6.根据权利要求2所述一种调节巨噬细胞极化的方法,其特征在于:免疫印迹;

7.根据权利要求2所述一种调节巨噬细胞极化的方法,其特征在于:免疫荧光染色;荷瘤小鼠于第3周麻醉,经4%多聚甲醛灌注,切除肿瘤组织,并在4%多聚甲醛中后固定,使用震荡切片机切割为25μm的切片。用马血清封闭30min后,0.3%triton x-100pbs在室温下打孔30min后,加入一抗,在4℃下孵育过夜,切片用荧光二抗孵育1h,并用hoechst33342在37℃的避光容器中进行核染色15min。使用荧光共聚焦显微镜获得图像。

8.根据权利要求2所述一种调节巨噬细胞极化的方法,其特征在于:免疫组织化学;

9.根据权利要求2所述一种调节巨噬细胞极化的方法,其特征在于:实时定量pcr;提取细胞总rna后,利用逆转录系统合成cdna,用sybr green在m3005p仪器上进行测定,所有样品在95℃反应体系中处理10min,然后在95℃、60℃、72℃分别扩增10s、20s、20s,循环40次,通过δct方法将靶基因的ct水平归一化为gapdh的水平,计算相对基因表达水平,使用δδct方法将数据进一步归一化到实验对照样本(2-δδct)。


技术总结
本发明公开了一种调节巨噬细胞极化的方法,它采用磁珠的细胞分选方案进行细胞分离,制备单细胞悬液后,用抗CD11b粒子标记肿瘤或瘤周组织的阳性细胞,标记后,使用BD IMag<supgt;TM</supgt;磁性细胞分选仪分离细胞,收集阴性(CD11b‑)和阳性(CD11b+)部分进行分析,它包含骨髓来源的巨噬细胞的获得、动物模型的建立、免疫印迹实验、免疫荧光染色、免疫组织化学与实时定量PCR分析。有益效果:条件性敲除髓系细胞中的TBK1后,使在M‑CSF刺激下的巨噬细胞向M1型极化,TBK1抑制剂氨来呫诺使M‑CSF诱导的BMDMs向促炎M1表型极化,敲除IRF5后,逆转了抑制TBK1对M‑CSF相关巨噬细胞极化作用的影响。

技术研发人员:刘亚坤,李媛媛,李娟娟,刘畅,郭默然,段伟松,李春岩
受保护的技术使用者:河北医科大学第二医院
技术研发日:
技术公布日:2024/3/31
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