本发明涉及生物医药领域，具体而言，本发明涉及一种双特异性抗体，其包含特异性结合第一抗原的第一抗原结合结构域和特异性结合第二抗原的第二抗原结合结构域，所述第一抗原为cd79b，所述第二抗原非cd79b。本发明还涉及编码该双特异性抗体的核酸分子、载体及宿主细胞，所述双特异性抗体的衍生物，以及它们用于疾病治疗的用途。
背景技术：
：：0、技术背景1、cd79是一种异源二聚体分子，由cd79a和cd79b组成，几乎只在b细胞和b细胞肿瘤上表达。cd79作为b细胞抗原受体(bcr)的信号传导成分，与用于抗原识别的细胞表面免疫球蛋白(sig)一起构成bcr复合物，在b细胞成熟和活化中起关键作用。cd79a和cd79b都含有单个细胞外ig结构域、跨膜结构域和细胞内信号转导结构域，它们在抗原结合后启动bcr信号传导，最终导致b细胞活化、抗原呈递、细胞因子产生以及细胞增殖和分化。在b细胞个体发生过程中，cd79a和cd79b的表达先于免疫球蛋白(ig)重链基因重排和cd20的表达，并且在b细胞分化的晚期(浆细胞)阶段比cd20晚消失。因此，靶向cd79a和cd79b的抗体可用于鉴别诊断b细胞肿瘤与t细胞肿瘤或髓样肿瘤，或l&h淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤与经典霍奇金淋巴瘤。此外，抗cd79a和抗cd79b抗体是诊断前体b-急性淋巴细胞白血病(pre-b-all)的有效标志物，因为这些肿瘤对其他b细胞标志物(如cd20和cd45ra)呈阴性。2、抗原与cd79结合后被迅速诱导内吞并递送至主要组织相容性复合物ii类(mhcii)区室(即溶酶体区室，用于b细胞的ii类抗原呈递)。因为药物直接输送到靶细胞进入溶酶体区室，增强细胞毒性活性，并且它允许使用在mhcii区室中切割的更稳定的连接体，这种独特的细胞内运输使cd79成为靶向递送细胞毒性剂的潜在靶点。此外，cd79还被认为是抗体的一个治疗靶点，因为它在成熟的b细胞和绝大多数b细胞非霍奇金淋巴瘤(b-cell non-hodgkin's lymphoma，b-nhls)中生理上特异性表达，包括弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl)(90-100％)、急性b淋巴细胞白血病(b-all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、b细胞前淋巴细胞白血病(pll)、伴绒毛淋巴细胞的脾淋巴瘤(slvl)、毛细胞白血病(hcl)、滤泡性淋巴瘤(fl)和套细胞淋巴瘤(mcl)。3、cd3受体复合物是一种蛋白质复合物，由四条链组成。在哺乳动物中，复合物包含一条cd3y(γ)链、一条cd35(δ)链和两条cd3e(ε)链。这些链与t细胞受体(tcr)和所谓的ζ(ζ)链结合，形成t细胞受体cd3复合物，并在t淋巴细胞中产生激活信号。cd3y(γ)、cd35(δ)和cd3e(ε)链是包含单个细胞外免疫球蛋白结构域的免疫球蛋白超家族的高度相关的细胞表面蛋白。cd3分子的细胞内尾部含有一个单一保守基序，称为免疫受体酪氨酸激活基序，简称itam，这对tcr的信号传导能力至关重要。4、近年来，特异性识别肿瘤相关抗原和t细胞抗原cd3的双特异性抗体(bsabs)已显示出在治疗癌症方面的效力。通过将肿瘤细胞和t细胞结合在一起，它们可以触发t细胞的活化和增殖，从而释放颗粒酶和穿孔素等细胞毒性分子，诱导肿瘤细胞裂解。与单特异性抗体相比，t细胞受体特异性的双特异性抗体具有更高的治疗潜力。技术实现思路1、本发明人经过深入的研究，构建了能够同时靶向cd79b和cd3的双特异性抗体，其在治疗与cd79b有关的疾病(例如b细胞淋巴瘤)的基础上，进一步介导t细胞对肿瘤细胞的杀伤。由此提供了以下发明。2、双特异性抗体3、在一个方面，本发明提供了一种双特异性抗体，其包含特异性结合第一抗原的第一抗原结合结构域和特异性结合第二抗原的第二抗原结合结构域，所述第一抗原为cd79b，所述第二抗原非cd79b；4、所述第一抗原结合结构域包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中，5、所述vh包含如seq id no:3所示的cdr1、如seq id no:4所示的cdr2、以及如seqid no:5所示的cdr3；并且6、所述vl包含如seq id no:6所示的cdr1、如seq id no:7所示的cdr2、以及如seqid no:8所示的cdr3；7、优选地，所述cdr由kabat编号系统定义。8、在某些实施方案中，所述第一抗原结合结构域包含如seq id no:9或其变体所示的vh，以及如seq id no:10或其变体所示的vl；9、其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，或与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个、3个、4个或5个氨基酸置换、缺失或添加)；优选地，所述置换是保守置换。10、在某些实施方案中，所述第一抗原结合结构域包含如seq id no:9所示的vh，以及如seq id no:10所示的vl。11、在某些实施方案中，所述第二抗原选自cd3、cd19、cd20、cd32b、cd137、ctla-4或bcma。12、在某些实施方案中，所述第二抗原是cd3。13、在某些实施方案中，所述第二抗原结合结构域包括重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，其中，14、所述vh包含如seq id no:13所示的cdr1、如seq id no:14所示的cdr2、以及如seqid no:15所示的cdr3；并且所述vl包含如seq id no:16所示的cdr1、如seq id no:17所示的cdr2、以及如seq id no:18所示的cdr3；15、所述vh包含如seq id no:22所示的cdr1、如seq id no:23所示的cdr2、以及如seqid no:24所示的cdr3；并且所述vl包含如seq id no:25所示的cdr1、如seq id no:26所示的cdr2、以及如seq id no:27所示的cdr3；或者16、所述vh包含如seq id no:51所示的cdr1、如seq id no:52所示的cdr2、以及如seqid no:53所示的cdr3；并且所述vl包含如seq id no:54所示的cdr1、如seq id no:55所示的cdr2、以及如seq id no:56所示的cdr3；17、优选地，所述cdr由kabat编号系统定义。18、在某些实施方案中，所述第二抗原结合结构域包含如seq id no:19或其变体所示的vh，以及如seq id no:20或其变体所示的vl；19、所述第二抗原结合结构域包含如seq id no:28或其变体所示的vh，以及如seq idno:29或其变体所示的vl；或者20、所述第二抗原结合结构域包含如seq id no:57或其变体所示的vh，以及如seq idno:58或其变体所示的vl；21、其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，或与其相比具有一个或几个氨基酸置换、缺失或添加(例如，1个、2个、3个、4个或5个氨基酸置换、缺失或添加)；优选地，所述置换是保守置换。22、在某些实施方案中，所述第二抗原结合结构域包含如seq id no:19所示的vh，以及如seq id no:20所示的vl。23、在某些实施方案中，所述第二抗原结合结构域包含如seq id no:28所示的vh，以及如seq id no:29所示的vl。24、在某些实施方案中，所述第二抗原结合结构域包含如seq id no:57所示的vh，以及如seq id no:58所示的vl。25、在某些实施方案中，所述第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域选自fab、fab’、(fab’)2、fv、二硫键连接的fv、scfv和单域抗体(sdab)；26、可选地，所述第一抗原结合结构域或第二抗原结合结构域是兔源的、鼠源的、全人源的或嵌合的。27、在某些实施方案中，所述第一抗原结合结构域是fab。28、在某些实施方案中，所述第二抗原结合结构域是scfv，所述第二抗原结合结构域的vh直接或通过肽接头连接至所述第二抗原结合结构域的vl的n端或c端。29、在某些实施方案中，所述肽接头为(gms)n，m、n独立地为不小于0的整数，例如独立地为1、2、3或4。30、在某些实施方案中，所述肽接头为gs。31、在某些实施方案中，所述双特异性抗体进一步包含免疫球蛋白fc段。32、在某些实施方案中，所述免疫球蛋白fc段直接或通过肽接头连接至所述第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域的n端和/或c端。33、在某些实施方案中，所述免疫球蛋白fc段是人igg(例如igg1、igg2、igg3或igg4)的fc段。34、在某些实施方案中，所述肽接头为(gms)n，m、n独立地为不小于0的整数，例如独立地为1、2、3或4。35、在某些实施方案中，所述肽接头为gs。36、在某些实施方案中，所述免疫球蛋白fc段包含knob或hole突变。37、在某些实施方案中，所述第一抗原结合结构域连接的免疫球蛋白fc段包含knob突变，所述第二抗原结合结构域连接的免疫球蛋白fc段包含hole突变。38、在某些实施方案中，所述第一抗原结合结构域连接的免疫球蛋白fc段包含hole突变，所述第二抗原结合结构域连接的免疫球蛋白fc段包含knob突变。39、在某些实施方案中，所述双特异性抗体是knob-into-hole形式的双特异性抗体，其包含：40、(1)肽链i-a，其从n端到c端依次包含所述第一抗原结合结构域的vl和轻链恒定区(cl)；在某些实施方案中，所述cl为人免疫球蛋白κ或λ轻链；41、(2)肽链i-b，其从n端到c端依次包含所述第一抗原结合结构域的vh和重链恒定区(ch)；在某些实施方案中，所述ch为人免疫球蛋白igg，如igg1、igg2、igg3或igg4；42、(3)肽链i-c，其从n端到c端依次包含所述第二抗原结合结构域的vl、肽接头、所述第二抗原结合结构域的vh、肽接头和fc段；优选地，所述肽接头为(gms)n，m、n独立地为不小于0的整数，例如独立地为1、2、3或4；在某些实施方案中，所述fc段是人igg(例如igg1、igg2、igg3或igg4)的fc段。43、在某些实施方案中，所述肽链i-b的fc段的ch3结构域包含hole突变，所述肽链i-c的fc段的ch3结构域包含knob突变以促进异源二聚化。44、在某些实施方案中，所述肽链i-b的fc段的ch3结构域包含突变t366s、l368a、y407v，所述肽链i-c的fc段的ch3结构域包含突变t366w。45、在某些实施方案中，所述肽链i-b的fc段的ch3结构域包含突变h435r、y436f以去除蛋白a(protein a)结合位点。46、在某些实施方案中，所述肽链i-b的fc段的ch1结构域包含突变n159s以消除脱氨反应。47、在某些实施方案中，所述肽链i-b和i-c的fc段的ch2结构域包含突变n297g以降低adcc效应功能。48、在某些实施方案中，所述肽链i-a包含如seq id no:12所示的序列，所述肽链i-b包含如seq id no:11所示的序列，所述肽链i-c包含如seq id nos:21、30和59中任一项所示的序列。49、抗体的制备50、本发明的抗体可以本领域已知的各种方法来制备，例如通过基因工程重组技术来获得。例如，通过化学合成或pcr扩增获得编码本发明抗体的dna分子，将所得dna分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞。然后，在特定条件下培养转染后的宿主细胞，并表达本发明的抗体。本发明的抗原结合片段可以通过水解完整的抗体分子获得。51、另一方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其编码本发明的双特异性抗体。52、另一方面，本发明提供了一种载体(例如克隆载体或表达载体)，其包含本发明的分离的核酸分子。在某些实施方案中，本发明的载体是，例如质粒，粘粒，噬菌体等。53、另一方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包含如上所述的分离的核酸分子或载体。此类宿主细胞包括但不限于，原核细胞例如大肠杆菌细胞，以及真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。54、另一方面，提供了制备本发明的双特异性抗体的方法，其包括如下步骤：55、在允许蛋白表达的条件下，培养如上所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述双特异性抗体。56、缀合物57、另一方面，本发明还提供了缀合物，其包含本发明的双特异性抗体以及偶联部分。58、在某些实施方案中，本发明的双特异性抗体任选地通过接头与所述偶联部分缀合。59、在某些实施方案中，所述偶联部分选自蛋白标签(protein tag)。这类蛋白标签是本领域熟知的，其实例包括但不限于his、flag、gst、mbp、ha、myc、gfp或生物素，并且本领域技术人员已知如何根据期望目的选择合适的蛋白标签(例如，纯化标签、检测标签或示踪标签)。在某些示例性实施方案中，本发明的双特异性抗体的c端连接有纯化标签。60、在某些实施方案中，所述偶联部分选自可检测的标记，例如酶(例如辣根过氧化物酶)、放射性核素、荧光染料、发光物质(如化学发光物质)或生物素。本发明所述的可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。这类标记是本领域熟知的，其实例包括但不限于，酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶，等)、放射性核素(例如，3h、125i、35s、14c或32p)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(fitc)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(tritc)、藻红蛋白(pe)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如cy7、alexa 750))、发光物质(例如化学发光物质，如吖啶酯类化合物)、磁珠(例如，)、检测热标记物如胶体金或有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶，等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如，链霉亲和素)的生物素。在某些实施方案中，此类标记能够适用于免疫学检测(例如，酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。在某些实施方案中，可通过不同长度的接头(linker)将如上所述的可检测的标记连接至本发明的双特异性抗体，以降低潜在的位阻。61、在某些实施方案中，所述偶联部分选自治疗剂，例如抗肿瘤药物。62、在某些实施方案中，所述偶联部分选自另外的生物活性多肽。63、药物组合物64、另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其含有本发明所述的双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、或缀合物，以及一种或多种药学上可接受的辅料。65、在某些实施方案中，所述药物组合物还可以包含另外的抗肿瘤药物。66、在某些实施方案中，在所述药物组合物中，本发明的双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、或缀合物与所述另外的抗肿瘤药物可以作为分离的组分或作为混合的组分提供。因此，本发明的双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、或缀合物与所述另外的抗肿瘤药物可以同时、分开或相继施用。67、在某些实施方案中，所述一种或多种药学上可接受的辅料可以包含无菌可注射液体(如水性或非水性悬浮液或溶液)。在某些示例性实施方案中，此类无菌可注射液体选自注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。68、本发明的药物组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明所述的双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、或缀合物。“预防有效量”是指，足以预防，阻止，或延迟疾病的发生的量。“治疗有效量”是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。治疗有效量可根据如下因素发生变化：待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。69、治疗应用70、另一方面，本发明提供了在受试者中预防和/或治疗与cd79b有关和/或与cd3有关的疾病的方法，其包括向有此需要的受试者施用本发明的双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物或本发明的药物组合物。本发明还涉及所述双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物或药物组合物用于制备药物的用途，所述药物用于在受试者中预防和/或治疗与cd79b有关和/或与cd3有关的疾病。71、在某些实施方案中，所述与cd79b有关的疾病以cd79b表达升高和/或过度的cd79b活性为特征。72、在某些实施方案中，所述与cd3有关的疾病以cd3表达升高和/或过度的cd3活性为特征。73、在某些实施方案中，所述与cd79b有关的疾病是b细胞淋巴瘤相关疾病，例如弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、急性b淋巴细胞白血病(b-all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、b细胞前淋巴细胞白血病(pll)、伴绒毛淋巴细胞的脾淋巴瘤(slvl)，毛细胞白血病(hcl)、滤泡性淋巴瘤(fl)和套细胞淋巴瘤(mcl)。74、在某些实施方案中，所述与cd3有关的疾病是炎性疾病或自身免疫性疾病。75、在某些实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如人。76、在某些实施方案中，所述双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物或药物组合物单独使用，或与另外的抗肿瘤药物联合使用。77、本发明的双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物或本发明的药物组合物可以配制成医学领域已知的任何剂型，例如，片剂、丸剂、混悬剂、乳剂、溶液、凝胶剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、锭剂、栓剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、吸入剂、喷雾剂等。优选剂型取决于预期的给药方式和治疗用途。78、一种优选的剂型是注射剂。此类注射剂可以是无菌注射溶液。例如，可通过下述方法来制备无菌注射溶液：在适当的溶剂中掺入必需剂量的本发明的抗体或其抗原结合片段，以及任选地，同时掺入其他期望的成分(包括但不限于，ph调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，等渗剂、防腐剂、稀释剂，或其任何组合)，随后过滤除菌。此外，可以将无菌注射溶液制备为无菌冻干粉剂(例如，通过真空干燥或冷冻干燥)以便于储存和使用。此类无菌冻干粉剂可在使用前分散于合适的载体中，例如注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化钠溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性剂的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲溶液)、ringer氏溶液及其任意组合。79、本发明的双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、缀合物或本发明的药物组合物可以通过本领域已知的任何合适的方法来施用，包括但不限于，口服、口腔、舌下、眼球、局部、肠胃外、直肠、叶鞘内、内胞浆网槽内、腹股沟、膀胱内、局部(如，粉剂、药膏或滴剂)，或鼻腔途径。但是，对于许多治疗用途而言，优选的给药途径/方式是胃肠外给药(例如静脉注射或推注，皮下注射，腹膜内注射，肌内注射)。技术人员应理解，给药途径和/或方式将根据预期目的而发生变化。在某些实施方案中，本发明的双特异性抗体、分离的核酸分子、载体、宿主细胞、或缀合物或本发明的药物组合物通过静脉注射或推注给予。80、检测应用81、另一方面，本发明提供了检测cd79b和/或cd3在样品中的存在或其含量的方法，其包括使用本发明的双特异性抗体或缀合物。82、在某些实施方案中，所述方法是免疫学检测，例如免疫印迹法、酶免疫测定法(例如elisa)、化学发光免疫分析法、荧光免疫分析法或放射免疫测定法。83、在某些实施方案中，用于所述方法的缀合物包含本发明的双特异性抗体以及可检测的标记。84、在某些实施方案中，用于所述方法的双特异性抗体带有可检测的标记。85、在某些实施方案中，用于所述方法的双特异性抗体不带有可检测的标记。因此，所述方法还可以包括使用带有可检测的标记的其他试剂(如第二抗体)来检测本发明的双特异性抗体。86、在某些实施方案中，所述方法包括以下步骤：87、(1)将所述样品与本发明的双特异性抗体或缀合物接触；88、(2)检测所述双特异性抗体或缀合物与抗原之间复合物的形成或检测所述复合物的量。89、所述复合物的形成表明存在抗原或表达抗原的细胞；90、其中，所述抗原选自cd79b或cd3。91、所述方法可以用于诊断目的，或者非诊断目的(例如，所述样品是细胞样品，而非来自患者的样品)。92、在某些实施方案中，所述方法用于诊断受试者是否患有与cd79b有关和/或与cd3有关的疾病。在此类实施方案中，所述方法还可以包括：将所述cd79b和/或cd3在来自所述受试者的样品中的量与参考值进行比较的步骤。所述参考值可以是cd79b和/或cd3在来自已知不具有与cd79b有关和/或与cd3有关的疾病的受试者(例如健康对照)的样品中的水平(也称作“阴性参考值”)。例如，如果cd79b和/或cd3在来自所述受试者的样品中的量相对于阴性参考值升高时，则指示所述受试者患有与cd79b有关和/或与cd3有关的疾病。93、在某些实施方案中，所述与cd79b有关的疾病以cd79b表达升高和/或过度的cd79b活性为特征。在某些实施方案中，所述与cd79b有关的疾病是b细胞淋巴瘤相关疾病，例如弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、急性b淋巴细胞白血病(b-all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、b细胞前淋巴细胞白血病(pll)、伴绒毛淋巴细胞的脾淋巴瘤(slvl)，毛细胞白血病(hcl)、滤泡性淋巴瘤(fl)和套细胞淋巴瘤(mcl)。94、在某些实施方案中，所述与cd3有关的疾病以cd3表达升高和/或过度的cd3活性为特征。在某些实施方案中，所述与cd3有关的疾病是炎性疾病或自身免疫性疾病。95、在某些实施方案中，所述样品可以选自尿液、血液、血清、血浆、唾液、腹水、循环细胞、循环肿瘤细胞、非组织缔合的细胞(即游离细胞)、组织(例如手术切除的肿瘤组织、活体组织切片或细针抽吸组织)、组织学制备物等。96、在某些实施方案中，所述cd79b是人cd79b。97、在某些实施方案中，所述cd3是人cd3。98、另一方面，提供了本发明的双特异性抗体或缀合物在制备检测试剂中的用途，所述检测试剂用于检测cd79b和/或cd3在样品中的存在或其水平或者用于诊断受试者是否患有与cd79b有关和/或与cd3有关的疾病。99、在某些实施方案中，用于制备检测试剂的缀合物包含本发明的双特异性抗体以及可检测的标记。100、在某些实施方案中，用于制备检测试剂的双特异性抗体带有可检测的标记。101、在某些实施方案中，用于制备检测试剂的双特异性抗体不带有可检测的标记。在此类实施方案中，所述检测试剂可以进一步包含能够检测本发明的双特异性抗体的其他试剂(如第二抗体)。102、术语定义103、在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子生物学、生物化学、核酸化学、免疫学等操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。104、当本文使用术语“例如”、“如”、“诸如”、“包括”、“包含”或其变体时，这些术语将不被认为是限制性术语，而将被解释为表示“但不限于”或“不限于”。105、除非本文另外指明或根据上下文明显矛盾，否则术语“一个”和“一种”以及“该”和类似指称物在描述本发明的上下文中(尤其在以下权利要求的上下文中)应被解释成覆盖单数和复数。106、如本文中所使用的，术语“cd79b”是指组成cd79的一种单股膜蛋白，包含一个细胞外结构域、一个跨膜结构域和一个胞内结构域。细胞外结构域与igα链的细胞外结构域相互作用，形成b细胞受体复合物的外部结构。胞内结构域参与信号传导通路，调控b细胞的生物学功能。cd79b的序列是本领域技术人员公知的(参见，例如ncbiprotein数据库登录号：aah32651)。107、如本文中所使用的，术语“cd3”是指一种蛋白质复合物，由四条链组成。在哺乳动物中，复合物包含一条cd3y(γ)链、一条cd35(δ)链和两条cd3e(ε)链。这些链与t细胞受体(tcr)和所谓的ζ(ζ)链结合，形成t细胞受体cd3复合物，并在t淋巴细胞中产生激活信号。cd3的序列是本领域技术人员公知的(参见，例如ncbiprotein数据库登录号：np_000724)。108、如本文中所使用的，术语“抗体”在其最广泛意义上是指特异性结合抗原决定簇的分子，可以包括各种抗体结构，只要它们表现出所需的抗原结合活性。典型地，抗体可以是由两对多肽链(每对具有一条轻链(lc)和一条重链(hc))组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ(kappa)和λ(lambda)轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为igm、igd、igg、iga和ige。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“j”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“d”区。各重链由重链可变区(vh)和重链恒定区(ch)组成。重链恒定区由3个结构域(ch1、ch2和ch3)组成。各轻链由轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)组成。轻链恒定区由一个结构域cl组成。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应子功能，如可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(c1q)的结合。vh和vl区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(cdr))，其间散布有较保守的称为构架区(fr)的区域。各vh和vl由按下列顺序：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4从氨基末端至羧基末端排列的3个cdr和4个fr组成。各重链/轻链对的可变区(vh和vl)分别形成抗原结合部位。氨基酸在各区域或结构域的分配可遵循kabat,sequences of proteins ofimmunological interest(national institutes of health,bethesda,md.(1987and1991))，或chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901-917；chothia等(1989)nature 342:878-883的定义。109、如本文中所使用的，术语“双特异性抗体”是指对两种不同抗原(或表位)具有结合特异性的抗体。双特异性抗体包含对不同抗原(或表位)具有结合特异性的两种抗原结合结构域，从而能够结合两个不同的结合位点和/或靶分子。110、如本文中所使用的，术语“fab片段”是指组成完整抗体的两个相同的抗原结合片段，每个fab片段包含重链可变结构域、轻链可变结构域、轻链恒定结构域和重链的第一恒定结构域(ch1)。111、如本文中所使用的，术语“单链可变片段(scfv)”是抗体的重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)的融合蛋白，与10个至约25个氨基酸的短接头肽连接。vh通过短肽连接于vl的n端或c端。scfv不包含恒定区，但保留了原始抗体的特异性。112、如本文中所使用的，术语“互补决定区”或“cdr”是指抗体可变区中负责抗原结合的氨基酸残基。在重链和轻链的可变区中各含有三个cdr，命名为cdr1、cdr2和cdr3。这些cdr的精确边界可根据本领域已知的各种编号系统进行定义，例如可按照kabat编号系统(kabat et al.,sequences of proteins of immunological interest,5th ed.publichealth service,national institutes of health,bethesda,md.,1991)、chothia编号系统(chothia&lesk(1987)j.mol.biol.196:901-917；chothia等人(1989)nature 342:878-883)或imgt编号系统(lefranc et al.,dev.comparat.immunol.27:55-77,2003)中的定义。对于给定的抗体，本领域技术人员将容易地鉴别各编号系统所定义的cdr。并且，不同编号系统之间的对应关系是本领域技术人员熟知的(例如，可参见lefranc et al.,dev.comparat.immunol.27:55-77,2003)。113、如本文中所使用的，术语“构架区”或“fr”残基是指，抗体可变区中除了如上定义的cdr残基以外的那些氨基酸残基。114、如本文中所使用的，术语“knob-into-hole”是一种双特异性抗体的开发技术，该技术涉及在第一多肽中引入“knob”(突起)并在第二多肽中引入相应的“hole”(孔)，使得所述“knob”可以定位在所述“hole”中，以便促进异源二聚体的形成并阻碍同源二聚体的形成。“knob”是通过用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)取代来自第一多肽的小氨基酸侧链而构建的。具有与“knob”相同或相似大小的补偿“hole”是通过用较小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)取代大氨基酸侧链而在第二多肽的界面中创建的。“knob”和“hole”可以通过改变编码多肽的核酸来制备，例如通过位点特异性诱变或通过肽合成。115、如本文中所使用的，术语“特异性结合”是指，两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。特异性结合相互作用的强度或亲和力可以该相互作用的平衡解离常数(kd)表示。在本发明中，术语“kd”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数，其用于描述抗体与抗原之间的结合亲和力。平衡解离常数越小，抗体-抗原结合越紧密，抗体与抗原之间的亲和力越高。116、两分子间的特异性结合性质可使用本领域公知的方法进行测定。一种方法涉及测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速度。“结合速率常数”(ka或kon)和“解离速率常数”(kdis或koff)两者都可通过浓度及缔合和解离的实际速率而计算得出(参见malmqvist m,nature,1993,361:186-187)。kdis/kon的比率等于解离常数kd(参见davies等人,annual rev biochem,1990；59:439-473)。可用任何有效的方法测量kd、kon和kdis值。在某些实施方案中，可以使用表面等离子体共振术(spr)在biacore中来测量解离常数。除此以外还可用生物发光干涉测量法或kinexa来测量解离常数。117、如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1来源的人工染色体(pac)；噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。118、如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如s2果蝇细胞或sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，cho细胞，cos细胞，nso细胞，hela细胞，bhk细胞，hek 293细胞或人细胞等的动物细胞。宿主细胞可以包括单个细胞或细胞群体。119、如本文中所使用的，术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如，两个dna分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据)，那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目×100的函数。例如，如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60％的同一性。例如，dna序列ctgact和caggtt共有50％的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常，在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计算机程序例如align程序(dnastar,inc.)方便地进行的needleman等人(1970)j.mol.biol.48：443-453的方法来实现。还可使用已整合入align程序(版本2.0)的e.meyers和w.miller(comput.applbiosci.，4:11-17(1988))的算法，使用pam120权重残基表(weight residue table)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。此外，可使用已整合入gcg软件包(可在www.gcg.com上获得)的gap程序中的needleman和wunsch(j moibiol.48:444-453(1970))算法，使用blossum 62矩阵或pam250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gap weight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。120、如本文中所使用的，术语“保守置换”意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白/多肽的预期性质的氨基酸置换。例如，可通过本领域内已知的标准技术例如定点诱变和pcr介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的置换，例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似(例如具有相似大小、形状、电荷、化学性质，包括形成共价键或氢键的能力等)的残基进行的置换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基酸残基。鉴定氨基酸保守置换的方法在本领域内是熟知的(参见，例如，brummell等人，biochem.32:1180-1187(1993)；kobayashi等人protein eng.12(10):879-884(1999)；和burks等人proc.natlacad.set usa 94:412-417(1997)，其通过引用并入本文)。121、本文涉及的二十个常规氨基酸的编写遵循常规用法。参见例如，immunology-asynthesis(2nd edition,e.s.golub and d.r.gren,eds.,sinauer associates,sunderland,mass.(1991))，其以引用的方式并入本文中。在本发明中，术语“多肽”和“蛋白质”具有相同的含义且可互换使用。并且在本发明中，氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如，丙氨酸可用a或ala表示。122、如本文中所使用的，术语“药学上可接受的辅料”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的辅料，其是本领域公知的(参见例如remington'spharmaceutical sciences.edited by gennaro ar,19th ed.pennsylvania:mackpublishing company,1995)，并且包括但不限于：ph调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，稀释剂，维持渗透压的试剂，延迟吸收的试剂，防腐剂。例如，ph调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液。表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如tween-80。离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。维持渗透压的试剂包括但不限于糖、nacl及其类似物。延迟吸收的试剂包括但不限于单硬脂酸盐和明胶。稀释剂包括但不限于水，水性缓冲液(如缓冲盐水)，醇和多元醇(如甘油)等。123、如本文中所使用的，术语“预防”是指，为了阻止或延迟疾病或病症或症状(例如，与cd79b和/或cd3有关的疾病)在受试者体内的发生而实施的方法。如本文中所使用的，术语“治疗”是指，为了获得有益或所需临床结果而实施的方法。为了本发明的目的，有益或所需的临床结果包括但不限于，减轻症状、缩小疾病的范围、稳定(即，不再恶化)疾病的状态，延迟或减缓疾病的发展、改善或减轻疾病的状态、和缓解症状(无论部分或全部)，无论是可检测或是不可检测的。此外，“治疗”还可以指，与期望的存活期相比(如果未接受治疗)，延长存活期。124、如本文中使用的，术语“受试者”是指哺乳动物，例如灵长类哺乳动物，例如人。在某些实施方式中，所述受试者(例如人)患有与cd79b有关的疾病。在某些实施方式中，所述受试者(例如人)患有与cd3有关的疾病。125、本发明中，如果没有特别说明，所述“第一”(例如第一抗原或第一抗原结合结构域)和“第二”(例如第二抗原或第二抗原结合结构域)主要是为了指代上的区分，并不具有典型的次序上的含义。126、发明的有益效果127、本发明提供了能够同时靶向cd79b和cd3的双特异性抗体，其在治疗与cd79b有关的疾病(例如b细胞淋巴瘤)的基础上，进一步介导t细胞对肿瘤细胞的杀伤，与单特异性抗体相比，具有更高的治疗潜力。128、下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得可实施。当前第1页12当前第1页12