用于检测前列腺癌的引物对、引物探针组合、试剂盒及应用的制作方法

本申请属于分子生物学检测领域，更具体地，涉及用于检测前列腺癌的引物对、引物探针组合、试剂盒及应用。

背景技术：

1、前列腺癌(prostatic cancer，pca)是男性生殖系最常见的恶性肿瘤，其发病率随年龄的增加而增长且不同地区的发明率存在明显差异，其中欧美地区前列腺癌发病率较高。近年来由于人口老龄化，中国前列腺癌的发病率有所增加。

2、前列腺癌多发生于后叶，早期并无症状，即使有不适，也不足以引起病人重视，因此给早期诊断带来了困难。一旦临床上出现了明显症状，往往已属于病变晚期，预后不良。因此，早期发现前列腺癌显得十分重要。

3、前列腺癌筛查方法包括：直肠指检(dre)、前列腺特异性抗原(psa)的检测、经直肠超声(trus)和多参数磁共振检查(mp-mri)等检测方法的联合诊断。目前临床上非侵入性检测前列腺癌的技术是前列腺特异性抗原(psa)的检测，但psa筛查前列腺癌的灵敏度和特异性较低，仅为57.43％和45.82％，无法区分前列腺癌和非癌，从而导致过度诊断，进行不必要的穿刺活检等。因此，亟待开发有效的前列腺癌早筛检测技术，实现无痛无创、经济便捷、精准高效筛查前列腺癌。

技术实现思路

1、针对现有技术的缺陷，本申请的目的在于提供了一种用于检测前列腺癌的引物对、引物探针组合、试剂盒及应用，旨在解决现有技术对前列腺癌检测易出现假阳性和假阴性结果、检测准确度低等的技术问题。

2、为实现上述目的，本申请提供了用于检测前列腺癌的引物对，其为用于检测样本中前列腺癌甲基化标志物的甲基化水平的引物对；上述前列腺癌甲基化标志物选自gdap1l1基因cpg岛上的靶区域。

3、优选地，以grch38.p14为参考基因组，上述gdap1l1基因cpg岛上的靶区域选自chr20:44246939-44247339正链的全长或部分区域。

4、优选地，上述引物对包括用于检测chr20:44246939-44247339正链的全长或部分区域的甲基化水平的甲基化引物对。

5、进一步优选地，上述甲基化引物对为seq id no.4～5所示的甲基化引物对。

6、优选地，上述引物对还包括用于检测chr20:44246939-44247339正链的全长或部分区域的甲基化水平的非甲基化引物对。

7、进一步优选地，上述非甲基化引物对为seq id no.6～7所示的非甲基化引物对。

8、本申请还提供了用于检测前列腺癌的引物探针组合，其包括上述引物对，还包括检测探针。

9、进一步优选地，上述引物探针组合包括seq id no.4～5所示的甲基化引物对和seq id no.10所示的检测探针。

10、本申请还提供了用于检测前列腺癌的试剂盒，其包括上述引物对或上述引物探针组合。

11、优选地，上述试剂盒还包括内参基因的检测引物对及检测探针、dna提取试剂、dna纯化试剂、甲基化转化试剂、扩增试剂、阳性对照品和阴性对照品中的一种或多种。

12、优选地，上述检测探针的5'端包含有荧光报告基团，3'端包含有荧光淬灭基团。

13、本申请还提供了上述引物对或上述引物探针组合或上述试剂盒在制备前列腺癌诊断产品中的应用。

14、优选地，上述前列腺癌诊断产品包括甲基化检测试剂盒、芯片和测序文库中的一种或多种。

15、总体而言，通过本申请所构思的以上技术方案与现有技术相比，主要具备以下的技术优点：

16、(1)本申请提供的用于检测前列腺癌的引物对、引物探针组合、试剂盒，通过检测样本中gdap1l1基因cpg岛上的靶区域的甲基化水平，可以有效区分前列腺癌患者、泌尿系统良性疾病受试者和健康受试者，提供了能够用于前列腺癌检测的甲基化标志物，在实现无创检测的同时，提高前列腺癌检测的灵敏度和特异性，降低假阳性和假阴性结果的检出，避免过度诊疗。

17、(2)优选实施例中，本申请提供的用于检测前列腺癌的试剂盒通过检测尿液样本中chr20:44246939-44247339正链的甲基化水平，检测前列腺癌的灵敏度达84.1％，检测泌尿系统良性疾病受试者的特异性达93％，检测健康受试者的特异性达93.5％，检测准确度高。

技术特征：

1.用于检测前列腺癌的引物对，其特征在于，所述引物对为用于检测样本中前列腺癌甲基化标志物的甲基化水平的引物对；所述前列腺癌甲基化标志物选自gdap1l1基因cpg岛上的靶区域。

2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，以grch38.p14为参考基因组，所述gdap1l1基因cpg岛上的靶区域选自chr20:44246939-44247339正链的全长或部分区域。

3.根据权利要求1或2所述的引物对，其特征在于，所述引物对包括用于检测chr20:44246939-44247339正链的全长或部分区域的甲基化水平的甲基化引物对；

4.根据权利要求3所述的引物对，其特征在于，所述引物对还包括用于检测chr20:44246939-44247339正链的全长或部分区域的甲基化水平的非甲基化引物对；

5.用于检测前列腺癌的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括权利要求1至3任一项所述的引物对，还包括检测探针；

6.用于检测前列腺癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求4所述的引物对或权利要求5所述的引物探针组合。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内参基因的检测引物对及检测探针、dna提取试剂、dna纯化试剂、甲基化转化试剂、扩增试剂、阳性对照品和阴性对照品中的一种或多种。

8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述检测探针的5'端包含有荧光报告基团，3'端包含有荧光淬灭基团。

9.权利要求1至4任一项所述的引物对或权利要求5所述的引物探针组合或权利要求6至8任一项所述的试剂盒在制备前列腺癌诊断产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述前列腺癌诊断产品包括甲基化检测试剂盒、芯片和测序文库中的一种或多种。

技术总结
本申请属于分子生物学检测领域，更具体地，涉及用于检测前列腺癌的引物对、引物探针组合、试剂盒及应用。本申请提供的试剂盒通过检测样本中GDAP1L1基因CpG岛上的靶区域的甲基化水平，可以有效区分前列腺癌患者、泌尿系统良性疾病受试者和健康受试者，提供了能够用于前列腺癌检测的甲基化标志物，在实现无创检测的同时，提高前列腺癌检测的灵敏度和特异性，降低假阳性和假阴性结果的检出，避免过度诊疗。

技术研发人员：蔡迪,廖旦旦,周谛晗,郭洪
受保护的技术使用者：武汉艾米森生命科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/16