专利名称:基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷化合物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医学检验领域，具体涉及一种新的化合物基于茜素染料的a -D-N-乙酰神经氨酸苷及其盐，其制备方法，以及其在制备细菌性阴道病检测试剂盒上的应用。
背景技术：
细菌性阴道病(Bacterial Vaginosis，简称BV)是由于细菌过度生长所致阴道微生态的非正常改变，从而导致的一类多微生物病。以前曾命名为非特异性阴道炎、加特纳菌性阴道炎、厌氧菌性阴道炎、嗜血杆菌性阴道炎、棒状杆菌阴道 炎等。直到1984年，在瑞典国际会议上才正式命名为“细菌性阴道病”。BV是最常见的妇产科疾病之一，通过对患有BV的妇女的阴道分泌物进行培养后发现，BV患者阴道中分离到的菌种大约是健康妇女阴道中分离到菌种的两倍，其中普沃氏菌属、叶啉单胞菌属、消化链球菌属、动弯杆菌属、阴道加特纳菌属、和不产H2O2的乳杆菌，都与BV有密切关系；而在健康妇女阴道中大量增养出的是产H2O2的乳杆菌，由此可推断产H2O2的乳杆菌可以抑制BV相关细菌的活性。
细菌性阴道病是妇产科最常见的疾病之一，感染率在15% 50%，且易复发。患BV的妇女中有50%的人易早产或分娩低体重儿，她们所生下的孩子也很可能会因此带有各种后遗症。越来越多的证据表明，BV是导致组织性绒毛膜炎、羊水感染、剖腹产术后子宫内膜炎及其他妊娠不良和妊娠并发症的危险因素。另外在妇科中，BV主要与输卵管炎、盆腔炎、宫外孕、不孕症、泌尿系感染、术后感染及妇科肿瘤有关。因此，细菌性阴道病的检测就显得尤为重要。
1984年Amsel提出诊断BV的标准，即符合以下4项指标中的3项可诊断为BV : (I)阴道pH>4.5;(2)阴道分泌物增多，变稀如奶状，有异味；(3)胺试验(Whiff)阳性，即在阴道分泌物中加入10% KOH产生鱼腥味；(4)阴道涂片中可见线索细胞。这四项诊断指标，后来被称为BV诊断“金标准”。然而要在实际中准确实施并非易事。首先，一些与感染无关的因素如近期性交、阴道灌洗、行经或是存在大量子宫颈粘液等同样可以导致阴道PH值升高，或使分泌产生异味；胺试验中对气味的鉴别因人而异；而对于作BV诊断最佳标志的线索细胞的识别则受到显微设备的质量、样本的采集以及操作者的经验等诸多因素的共同影响，主观性强，因而很难对判定结果进行统计和比较。80年代后期，人们发现了 BV与阴道中特有的微生物有关，并依此研究出一系列新的BV诊断技术和方法，包括阴道分泌物培养、革兰染色方法和脱落细胞巴氏染色法。但这些方法敏感度均不甚理想，在实际临床应用中依赖于操作者的经验以及熟练程度。
随着对BV发病机制的不断深入了解，产生了以检测BV患者阴道分泌物中所特有的微生物的代谢产物为基础的生化诊断方法。这些方法具有优于上述各方法的特性，客观且适于批量操作，最常见的是阴道分泌物中致病菌的酶活性检测。大量研究都已证实，阴道分泌物中唾液酸酶含量及活性高低与细菌性阴道病之间存在较好的正相关性，BV患者的阴道分泌物中有产生唾液酸酶的细菌存在，非BV患者的阴道分泌物中则几乎不显示异常的唾液酸酶活性。2000年,美国FDA批准了 Gryphus Diagnostics公司的BVBlue试剂盒,该试剂盒采用唾液酸酶(也称为神经氨酸酶)专利底物，特异性检测BV患者阴道分泌物中唾液酸酶活性。US6512100公开了 BVBlue试剂盒专利显色底物，其显色基团需在碱性溶液中才能发生颜色改变。该专利还公开了一种基于吲哚基团的神经氨酸苷，其中5-溴-4-氯-3-吲哚显色基团已广泛应用在多种临床病原菌的显色培养方面，如专利US6051391、US6068988、US6416970等就公开了这方面的临床应用。国内公开号CN200510053328、CN200610056827、CN200910037435、CN201010100450、CN201010285203、CN201020511784、CN201110174158 等都采用了 5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸苷作为显色底物来检测唾液酸酶活性，同时基本都采用重氮盐与显色基团反应，以加快反应速度和提高反应灵敏度。上述唾液酸酶底物，都是国外专利产品，合成难度较大，价格昂贵。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种新的化合物基于茜素染料的a -D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐。
本发明的另一个目的在于提供基于茜素染料的a -D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种细菌性阴道病检测试剂盒。
本发明的另一个目的在于提供一种细菌性阴道病的检测方法。
本发明所采用的技术方案是
基于茜素染料的a -D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐，其具有如式(VDI)所示的通式
权利要求
1.基于茜素染料的a-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐，其具有如式(VDI)所示的通式
2.根据权利要求
I所述的基于茜素染料的a-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐，其特征在于，R1、R2和R3独立选自H、C1,烷基或卤素。
3.根据权利要求
I所述的基于茜素染料的a-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐，其结构式如式(IX)或式(X)所示
4.一种基于茜素染料的a-D-N-乙酰神经氨酸苷的制备方法，包括如下步骤 使N-乙酰神经氨酸与氯化试剂反应得到酰氯，再与无水甲醇进行酯化反应，得到式I表示的化合物
5.基于茜素染料的a -D-N-乙酰神经氨酸苷钠盐的制备方法，由权利要求
4式VI表示的化合物与NaOH反应,得到式VH表示的化合物
6.一种细菌性阴道病检测试剂盒，包括反应液，该反应液包括权利要求
I 3任一项所述的基于茜素染料的a-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐、金属阳离子和乙酸钾缓冲液。
7.根据权利要求
6所述的细菌性阴道病检测试剂盒，其特征在于，反应液中基于茜素染料的a -D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐的浓度为I 20mg/ml，金属阳离子的浓度为0. I Smmol /I,,乙酸钟浓度为0. I 0. 5mol/L, pH值为5. 5 6. 5。
8.根据权利要求
6或7所述的细菌性阴道病检测试剂盒，其特征在于，所述金属阳离子包括 Fe2+、Al3+、Mn2+、Sn2+、Cu2+ 中的任一种。
9.根据权利要求
6所述的细菌性阴道病检测试剂盒，其特征在于，还包括阴性对照和阳性对照，所述阴性对照品为不含唾液酸酶的磷酸盐缓冲液；阳性对照品为含唾液酸酶的磷酸盐缓冲液。
10.利用权利要求
6所述的试剂盒检测细菌性阴道病的方法，包括如下步骤 1)将取好样的拭子浸泡入反应液中，37°C反应5-15分钟； 2)反应结束，观察样品拭子的颜色变化，颜色不变者为阴性，颜色变化者为阳性。
专利摘要
本发明公开了一种基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷化合物及其制备方法与应用。基于茜素染料的α-D-N-乙酰神经氨酸苷或其盐的通式如(Ⅷ)所示，其中，R1、R2和R3独立选自H、C1-18烷基、OR5、C1-6烷基-OR5、NO2、CN或卤素；R4为C1-6烷基-OR5或COOR5；R5为H、烷基酯或金属离子。该化合物可作为唾液酸酶的显色底物，在唾液酸酶作用下，分解出茜素染料，与金属离子络合而显色。基于该化合物的检测试剂盒及检测方法操作简单、快速、灵敏，且特异性好，可广泛应用于各级医疗检验场所，尤其是基层医疗机构，对细菌性阴道病的预防、诊治和康复有极为重要的意义。
文档编号C12Q1/34GKCN102796151SQ201210263118
公开日2012年11月28日 申请日期2012年7月27日
发明者林华青 申请人:珠海迪尔生物工程有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan