细胞密度依赖性生长抑制检测装置及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种细胞增殖调控检测装置及应用，尤其涉及一种细胞密度依赖性生长抑制检测装置及应用。
【背景技术】
[0002]细胞在生长过程中达到相互接触时有停止分裂的现象。由于培养基中的生长因子耗尽时也会产生生长抑制，所以正常细胞因相互接触而抑制分裂的现象也称为密度依赖性的生长抑制(density-dependent inhibit1n of growth)。在相同条件下培养的恶性细胞(malignant cells)对密度依赖性生长抑制失去敏感性，因而不会在形成单层时停止生长，而是相互堆积形成多层生长的聚集体，这种现象也说明恶性细胞的生长和分裂已经失去了控制，调节细胞正常生长和分裂的信号对于恶性细胞不再起作用。因此，利用专一的检测装置对细胞生长的性质和类型以动态形式进行鉴定，对正确认识和鉴别正常细胞和恶性细胞(癌细胞)，进一步了解细胞的癌变过程，即癌症的发生机理，进而深入研宄探索治疗癌症的方法具有十分重要的意义。
[0003]目前，在细胞实验中指导学生认识癌细胞还只是停留在切片和静态的细胞形态观察上，老师给学生灌输较为先进的理论只能口头或以模式图或图片进行，无法以动态形式展现出来，对于利用检测装置，尤其是利用专一的器皿对细胞密度依赖性生长抑制或关于正常细胞与恶性肿瘤细胞的区别进行直观地展示的装置还未见报道。
【发明内容】
[0004]针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种细胞密度依赖性生长抑制检测装置及应用。
[0005]本发明所述细胞密度依赖性生长抑制检测装置，由培养皿和透明塑料材质的积木块组成；其特征在于:所述积木块形状似扇形体，由6?10块组成，其共同组合后的形状似圆柱体，且用明胶被固定于培养皿中央区域，培养皿中似圆柱体所占面积以外的区域为细胞培养观察区；其中，所述似圆柱体的底面面积为培养皿底面面积的1/2?2/3，高度为培养皿高度的2/3?4/5，所述组成似圆柱体的积木块有1/2为能解除固定的扇形体，有1/2设置有自上表面外缘到培养皿底面的斜面，斜面的上表面外缘与培养皿底面有0.5?
1.5mm的距离，且斜面的底面与自体上表面外缘连线形成的夹角为15?42度。
[0006]上述的细胞密度依赖性生长抑制检测装置中:所述组成似圆柱体的积木块优选有1/2为能解除固定的扇形体，有1/2设置有自上表面外缘到培养皿底面的斜面，且其两种积木块间隔排列。(如图1所示)。
[0007]上述的细胞密度依赖性生长抑制检测装置中:所述积木块优选由8块组成，其共同组合后的形状似圆柱体，且用明胶被固定于培养皿中央区域，；其中，有4块为能解除固定的扇形体，有4块设置有自上表面外缘到培养皿底面的斜面，且其两种积木块间隔排列，所述4块有斜面的积木块分别命名为A、B、C、D，其斜面的底面与自体上表面外缘连线形成的夹角分别为15度、25度、32度、42度。(如图2所示)。
[0008]本发明所述的细胞密度依赖性生长抑制检测装置在以动态形式直接观察待检实验细胞是否存在生长接触抑制现象中应用。
[0009]本发明所述的细胞密度依赖性生长抑制检测装置在鉴别正常细胞与恶性肿瘤细胞中应用。
[0010]取贴壁生长的对数生长期实验细胞(血管内皮细胞、肝癌细胞、胃癌细胞或胚肺成纤维细胞)，消化后制成单细胞悬液，并调整细胞浓度为17?10 8个/ml，以恰好覆盖底面量将其加入检测装置中的细胞培养观察区，将上述检测装置盖好，置于5% C02，37°C，100%相对湿度的培养箱中常规培养至细胞贴壁，然后再向培养皿中加入培养液，使培养液量为检测装置中似圆柱体高度的2/3，继续培养并定时观察细胞培养观察区内的细胞生长，以检测实验细胞是否有接触抑制的情况。
[0011]观察时，若实验细胞生长达到汇合状态且与皿或圆柱体壁密切接触后停止生长，即可初步判定为接触抑制，再继续培养并经过2?5个细胞周期，实验细胞仍停止分裂，即确定为实验细胞出现接触抑制；反之，在继续培养后，实验细胞仍能进行分裂，且呈现堆积生长，并能出现跨越有斜面的积木块斜面上表面外缘并沿斜面生长现象，则为非接触抑制。
[0012]是否出现非接触抑制可以间接用于鉴别正常细胞与恶性肿瘤细胞。本发明的细胞密度依赖性生长抑制检测装置中设置夹角分别为15度、25度、32度、42度的斜面还可进一步用于判定恶性肿瘤细胞及转化细胞的增殖强弱。
[0013]上述实验中对于证实已出现接触抑制的实验细胞，还可以通过依次分别拆除固定于培养皿中央区域的无斜面的扇形体积木块，增加其培养观察区的面积，进一步进行所述实验细胞接触抑制释放现象的观察。
[0014]本发明在现有实理论基础和实验基础上，利用机械原理与细胞学、生理学实验技术相结合的方法，研制了“细胞密度依赖性生长抑制检测装置”，应用本专利所述细胞密度依赖性生长抑制检测装置，可使学生在进行离体细胞培养实验时，极为方便地以动态形式直接观察到待检的实验细胞生长接触抑制的存在与否、细胞接触抑制释放现象、以及鉴别肿瘤细胞与正常细胞的生长增殖状态，达到区分正常细胞与转化或癌变细胞的目的。本装置特别适合于动态观察各种因素、药物对离体细胞的影响，能极大地提升学生的动手和观察能力，为实验教学提供了一种直观、方便、灵活、准确检测细胞接触抑制的工具。
【附图说明】
[0015]图1:本发明所述细胞密度依赖性生长抑制检测装置立体效果图
[0016]其中:A、B、C、D分别为4块有斜面的积木块，其斜面的底面与自体上表面外缘连线形成的夹角分别为15度、25度、32度、42度。
[0017]图2:为图1中在1-1和2-2方向的纵切剖面图，图中分别显示了 A、B、C、D 4块有斜面的积