一种具有抗植物病原真菌活性的化合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及南极细菌发酵培养制备化合物领域，具体是设及一种具有抗植物病原 真菌活性的化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 植物致病菌是造成主要粮食和经济作物减产的头号杀手。在过去的40年里，主 要依赖于大量使用合成农药来防治植物病害。但事实证明，合成农药已经对环境和人类 健康造成了巨大的负面影响。同时开发新型合成农药的高成本及耐药微生物的迅速出 现等因素，更加引起我们对生物农药的关注。微生物农药作为生物农药市场的主体，具 有抗菌谱广、活性功能多样化及活性物质丰富等优点。从新药研发的进程来看，绝大部 分还是来自于自然资源炬evan P, Ryder H and 化aw I. Identifying small-molecule lead compounds:The screening approach to drug discovery ；Trends Biotechnol 1995 ;113:115-121)，其中包括微生物和植物提取物的活性筛选（Shadomy S.Preclinical evaluation of antifungal agents ;in Recent trends in the discovery, development and evaluation of antifungal agents(New Jersey:Prous Science)1987 ;8-14)。
[0003] 然而，随着陆地资源的不断开发，从陆地微生物菌种中寻找新药已经变得越来 越困难，而海洋微生物资源丰富，可产生多种新颖的化合物和药物，而目前被筛选的海洋 微生物代谢产物仅约为1%，因此从海洋微生物寻找新药已成为开发药物资源的重要策 略之 一 (Carte BK. Biomedical potential of marine natural products ；Bioscience 1996 ;46 (4) : 271 ;姜健，杨宝灵等.海洋微生物生物活性物质的研究；云南大学学报2004 ; 26化A):91-95)。
[0004] 本申请人在中国专利201310637219. 8中公开枯草芽抱杆菌Pc3及其在制备 防治植物致病真菌发酵上清液中的应用，设及芽抱杆菌。所述枯草芽抱杆菌炬acillus subtilis)Pc3 的保藏编号为 CCTCC N0;M2013470。枯草芽抱杆菌炬acillus subtilis) Pc3在制备防治植物致病真菌发酵上清液中的应用，防治的植物致病真菌包括：香蕉炭痘 菌、宛氏拟青霉、核盘菌、长柄链格抱、绿色木霉、立枯丝核菌和镶刀菌等。在油菜菌核病菌 防治的盆栽试验中有较好的生物防治效果，防效可W达到95. 6%。枯草芽抱杆菌炬acillus subtilis)Pc3发酵上清液的制备工艺简单，抑真菌谱广，生防效果好。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种具有抗植物病原真菌活性的化合物及其制备方法。
[0006] 所述具有抗植物病原真菌活性的化合物的化学分子式为。化2馬〇2,其化学结构式 如下：
[0007]
【主权项】
1. 一种具有抗植物病原真菌活性的化合物，其特征在于其化学分子式为C HH12N2O2，化 学结构式如下：
所述抗植物病原真菌活性是指具有抗香蕉炭疽菌、宛氏拟青霉、核盘菌、长柄链格孢、 绿色木霉、立枯丝核菌和镰刀菌7种植物病原真菌的活性。
2. 如权利要求1所述一种具有抗植物病原真菌活性的化合物的制备方法，其特征在于 包括以下步骤： 1) 将南极细菌接种于LB培养基中活化培养；所述南极细菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)Pc3,保藏编号为 CCTCC M 2013470 ; 2) 将步骤1)活化培养后的南极细菌接种到发酵培养基中发酵培养，得到接种有南极 细菌的发酵培养液； 3) 将步骤2)中的发酵培养液离心得到发酵上清液，将发酵上清液分离纯化得到具有 抗植物病原真菌活性的化合物。
3. 如权利要求2所述一种具有抗植物病原真菌活性的化合物的制备方法，其特征在于 在步骤1)中，所述活化培养的时间为8~12h，活化培养的温度为28~37°C。
4. 如权利要求2所述一种具有抗植物病原真菌活性的化合物的制备方法，其特征在于 在步骤2)中，所述活化培养后的南极细菌接种的体积为发酵培养基体积的0. 1 %~5 %。
5. 如权利要求2所述一种具有抗植物病原真菌活性的化合物的制备方法，其特征在于 在步骤2)中，所述发酵培养基的组成为：葡萄糖5~20g/L、KH 2P046~10g/L、K2HPO4H~ 20g/L、MgS0 40. 2 ~lg/L、（NH4) 2S044 ~10g/L、微量元素 2mL，pH 6 ~8 ;0· IMPa 灭菌 30min， 过滤除菌后放入无菌试剂瓶中备用；微量元素为FeSO4 · 4H20、CaCl2 · 2H20、MnSO4 · 4H20和 211(：12各 ImM。
6. 如权利要求2所述一种具有抗植物病原真菌活性的化合物的制备方法，其特征在于 步骤3)中，所述发酵培养液离心的条件是在6000~8000r/min条件下离心10~20min。
7. 如权利要求2所述一种具有抗植物病原真菌活性的化合物的制备方法，其特征在于 步骤3)中，所述分离纯化包括：将发酵上清液用乙醇沉淀和乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后 通过反相色谱纯化，得到具有抗植物病原真菌活性的化合物。
8. 如权利要求6所述一种具有抗植物病原真菌活性的化合物的制备方法，其特征在于 所述反相色谱纯化的条件为：采用的填料为十八烷基键合硅胶，采用的流动相甲醇-水溶 液梯度洗脱和55 %甲醇-水溶液等度洗脱，梯度洗脱程序为：甲醇0~20min，5 %~70 % ; 20 ~30min，70%~100% ;30 ~35min，100%~5%。
【专利摘要】一种具有抗植物病原真菌活性的化合物及其制备方法，涉及南极细菌发酵培养制备化合物领域。所述具有抗植物病原真菌活性的化合物的化学分子式为C11H12N2O2。制备方法：1)将南极细菌接种于LB培养基中活化培养；2)将步骤1)活化培养后的南极细菌接种到发酵培养基中发酵培养，得到接种有南极细菌的发酵培养液；3)将步骤2)中的发酵培养液离心得到发酵上清液，将发酵上清液分离纯化得到具有抗植物病原真菌活性的化合物。具有抗植物病原真菌活性的化合物，具有广谱的抗植物病原真菌活性，显示出其在植物病害生物防治方面的良好应用前景。易于操作和实施，易于工业化大规模生产，具备良好的实用价值。
【IPC分类】A01N43-38, A01P3-00, C12P17-10, C07D209-18, C12R1-125
【公开号】CN104649951
【申请号】CN201510069767
【发明人】陈新华, 郭文斌, 崔鹏飞
【申请人】国家海洋局第三海洋研究所
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年2月10日