一种检测人乳头瘤病毒及病毒分型的试剂盒及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测人乳头瘤病毒及病毒分型的试剂盒及其应用。
【背景技术】
[0002] 子宫颈癌(又称宫颈癌)是威胁妇女健康的主要疾病之一。发病率在女性恶性肿瘤 中居第二位，仅次于乳腺癌。现认为宫颈癌是全球性公共卫生问题，也是发展中国家最常见 的癌症。据WHO报道，2005年有超过50万的宫颈癌新发病例，90%来自发展中国家。在已 建立了筛查制度的发达国家和一些发展中国家的流行病学资料显示，子宫颈浸润癌的发病 率和死亡率已经大幅度下降。
[0003] 对宫颈癌发病病因的研究表明，人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV)高危 型持续感染是宫颈癌发生、发展的必要因素。人乳头瘤病毒是小型双链DNA病毒，主要引起 高级脊椎动物的上皮细胞发生增殖以及乳头瘤样改变。依据宫颈癌发生的危险性高低将 HPV分为：低危型HPV(如HPV-6、HPV-11、HPV-70、HPV-81 等）和高危型HPV(如HPV-16、 HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-53、HPV-56、HPV-58、 HPV-59、HPV-66、HPV-68 等）。
[0004] 尽管多数高危型HPV感染是一过性的，病毒约经6~8个月后可被清除，但仍有少 部分患者（4%)体内的HPV病毒不能被清除，感染呈持续性，这将导致上皮内瘤变（CIN)持续 存在或进一步发展为宫颈癌。从高危型HPV感染开始至发展为宫颈癌的时间间隔为15年， 因此早期筛查和清除HPV感染可有效地预防宫颈癌的发生。
[0005] 核酸检测具有操作简单、特异性高、灵敏度高等优点，已经被广泛用于临床检测。 但是普通的PCR方法和荧光定量PCR由于检测通量的局限性不能满足临床HPV分型的需 求。随着越来越多高危型HPV的确定，必须建立一种能够同时检测多种HPV的方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种检测人乳头瘤病毒的试剂盒及其应用。
[0007] 本发明首先提供了一种引物组，包括22个引物对中的至少1个引物对；所述 22个引物对为引物对HPV-6A、引物对HPV-11A、引物对HPV-16A、引物对HPV-18A、引物 对HPV-26A、引物对HPV-31A、引物对HPV-33A、引物对HPV-35A、引物对HPV-39A、引物 对HPV-45A、引物对HPV-51A、引物对HPV-52A、引物对HPV-53A、引物对HPV-56A、引物 对HPV-58A、引物对HPV-59A、引物对HPV-66A、引物对HPV-68A、引物对HPV-70A、引物对 HPV-73A、引物对HPV-81A和引物对HPV-82A;
[0008] 所述引物对HPV-6A(用于鉴定HPV-6)由序列表的序列1自5'末端第23-45位核 苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成；
[0009] 所述引物对HPV-11A(用于鉴定HPV-11)由序列表的序列3自5'末端第22-44位 核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成；
[0010] 所述引物对HPV-16A(用于鉴定HPV-16)由序列表的序列5自5'末端第21-45位 核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列6所示的单链DNA分子组成；
[0011] 所述引物对HPV-18A(用于鉴定HPV-18)由序列表的序列7自5'末端第24-44位 核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列8所示的单链DNA分子组成；
[0012] 所述引物对HPV-26A(用于鉴定HPV-26)由序列表的序列9自5'末端第21-40位 核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列10所示的单链DNA分子组成；
[0013] 所述引物对HPV-31A(用于鉴定HPV-31)由序列表的序列11自5'末端第24-46 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列12所示的单链DNA分子组成；
[0014] 所述引物对HPV-33A(用于鉴定HPV-33)由序列表的序列13自5'末端第24-47 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列14所示的单链DNA分子组成；
[0015] 所述引物对HPV-35A(用于鉴定HPV-35)由序列表的序列15自5'末端第21-42 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列16所示的单链DNA分子组成；
[0016] 所述引物对HPV-39A(用于鉴定HPV-39)由序列表的序列17自5'末端第21-45 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列18所示的单链DNA分子组成；
[0017] 所述引物对HPV-45A(用于鉴定HPV-45)由序列表的序列19自5'末端第21-42 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列20所示的单链DNA分子组成；
[0018] 所述引物对HPV-51A(用于鉴定HPV-51)由序列表的序列21自5'末端第21-42 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列22所示的单链DNA分子组成；
[0019] 所述引物对HPV-52A(用于鉴定HPV-52)由序列表的序列23自5'末端第21-39 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列24所示的单链DNA分子组成；
[0020] 所述引物对HPV-53A(用于鉴定HPV-53)由序列表的序列25自5'末端第21-41 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列26所示的单链DNA分子组成；
[0021] 所述引物对HPV-56A(用于鉴定HPV-56)由序列表的序列27自5'末端第21-42 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列28所示的单链DNA分子组成；
[0022] 所述引物对HPV-58A(用于鉴定HPV-58)由序列表的序列29自5'末端第21-44 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列30所示的单链DNA分子组成；
[0023] 所述引物对HPV-59A(用于鉴定HPV-59)由序列表的序列31自5'末端第21-43 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列32所示的单链DNA分子组成；
[0024] 所述引物对HPV-66A(用于鉴定HPV-66)由序列表的序列33自5'末端第21-44 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列34所示的单链DNA分子组成；
[0025] 所述引物对HPV-68A(用于鉴定HPV-68)由序列表的序列35自5'末端第21-47 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；
[0026] 所述引物对HPV-70A(用于鉴定HPV-70)由序列表的序列37自5'末端第22-40 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列38所示的单链DNA分子组成；
[0027] 所述引物对HPV-73A(用于鉴定HPV-73)由序列表的序列39自5'末端第21-43 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列40所示的单链DNA分子组成；
[0028] 所述引物对HPV-81A(用于鉴定HPV-81)由序列表的序列41自5'末端第21-41 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列36所示的单链DNA分子组成；
[0029] 所述引物对HPV-82A(用于鉴定HPV-82)由序列表的序列42自5'末端第21-42 位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序列43所示的单链DNA分子组成。
[0030] 所述引物组具体可由所述22个引物对组成。所述引物组可由引物组合物甲和 引物组合物乙组成；所述引物组合物甲由所述引物对HPV-6A、所述引物对HPV-11A、所述 引物对HPV-18A、所述引物对HPV-26A、所述引物对HPV-31A、所述引物对HPV-33A、所述引 物对HPV-39A、所述引物对HPV-45A、所述引物对HPV-51A、所述引物对HPV-52A、所述引物 对HPV-53A、所述引物对HPV-56A、所述引物对HPV-58A、所述引物对HPV-59A、所述引物对 HPV-66A、所述引物对HPV-68A、所述引物对HPV-73A和所述引物对HPV-81A组成；所述引物 组合物乙由所述引物对HPV-16A、所述引物对HPV-35A、所述引物对HPV-70A和所述引物对 HPV-82A组成。
[0031] 所述引物组还可包括引物对GAPDHA(用于鉴定GAPDH内参基因）；所述引物对 GAPDHA由序列表的序列44自5'末端第21-41位核苷酸所示的单链DNA分子和序列表的序 列45所示的单链DNA分子组成。所述引物对GAPDHA可与所述引物组合物甲组合使用，也 可与所述引物组合物乙组合使用。
[0032] 所述引物组的功能为如下（a)或（b)或（c)或（d) : (a)辅助鉴定待测人乳头瘤病 毒为哪种人乳头瘤病毒；（b)辅助鉴定人乳头瘤病毒；（c)辅助检测待测样本中是否含有人 乳头瘤病毒；（d)辅助鉴定含有人乳头瘤病毒的待测样本中的人乳头瘤病毒为哪种人乳头 瘤病毒。
[0033] 本发明还保护以上任一所述的引物组在制备试剂盒中的应用。所述试剂盒的功能 为如下（a)或（b)或（c)或（d): (a)辅助鉴定待测人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒；（b) 辅助鉴定人乳头瘤病毒；（c)辅助检测待测样本中是否含有人乳头瘤病毒；（d)辅助鉴定含 有人乳头瘤病毒的待测样本中的人乳头瘤病毒为哪种人乳头瘤病毒。
[0034] 本发明还保护一种试剂盒，包括引物组和通用芯片；
[0035] 所述引物组包括引物对HPV-6B、引物对HPV-11B、引物对HPV-16B、引物对 HPV-18B、引物对HPV-26B、引物对HPV-31B、引物对HPV-33B、引物对HPV-35B、引物 对HPV-39B、引物对HPV-45B、引物对HPV-51B、引物对HPV-52B、引物对HPV-53B、引物 对HPV-56B、引物对HPV-58B、引物对HPV-59B、引物对HPV-66B、引物对HPV-68B、引物对 HPV-70B、引物对HPV-73B、引物对HPV-81B和引物对HPV-82B;
[0036] 所述引物对HPV-6B(用于鉴定HPV-6)由序列表的序列1所示的单链DNA分子和 序列表的序列2所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-11B(用于鉴定HPV-11)由序列 表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成；所述引物对 HPV-16B(用于鉴定HPV-16)由序列表的序列5所示的单链DNA分子和序列表的序列6所 示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-18B(用于鉴定HPV-18)由序列表的序列7所示的 单链DNA分子和序列表的序列8所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-26B(用于鉴 定HPV-26)由序列表的序列9所示的单链DNA分子和序列表的序列10所示的单链DNA分 子组成；所述引物对HPV-31B(用于鉴定HPV-31)由序列表的序列11所示的单链DNA分子 和序列表的序列12所示的单链DNA分子组成；所述引物对HPV-33B(用于鉴定HPV-33)由 序列表的序列13所示的单链DNA分子和序列表的序列14所示的单链DNA分子组成；所述 引物对HPV-35B(用于鉴定HPV-35)由序列表的序列15所示的单链DNA分子和