一种固定化脂肪酶的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种固定化脂肪酶的制备方法。
【背景技术】
[0002]脂肪酶可溶于水溶液中，但其天然底物如油脂却不溶于水。虽然采用适当的有机溶剂或乳化剂有助于酶与底物的结合，但脂肪酶在非均相反应体系的实际利用中仍存在技术上的问题。例如反应系统中残存的酶可能对产物的质量产生不利影响。另外游离酶的使用寿命相对较短，从而使成本增加。如果将脂肪酶固定化，使其在反应体系中成为独立相，便可通过机械手段固定于反应器中，这样就不会污染产物，使用寿命也大大延长。
[0003]生物柴油生产中固定脂肪酶的载体有大孔丙稀酞胺树脂、蚕丝、凝胶、聚亚胺酯泡沫、生物质颗粒等，但存在甘油易堵塞颗粒状固定化酶的孔径，产生固定化酶寿命缩短的问题。为制备高品质、低成本的生物柴油，应开发新型的脂肪酶固定化方法及载体，其中脂肪酶的膜固定化具有其他方法不可比拟的优势而备受关注。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种固定化脂肪酶的制备方法，采用价格低廉、活性高的游离脂肪酶Lipause OF作为催化剂，解决催化剂易受醇作用而失活以及催化剂长期使用等问题。
[0005]为实现上述目的，本发明的技术方案如下:
[0006]将一定量的LipaSe OF和海藻酸钠(浓度I % -3% )分别溶于磷酸缓冲液(pH值6.0-8.0)中，充分溶解，合并两溶液，充分搅拌，混合均匀；用微量注射器逐滴滴入到氯化钙溶液(0.02-0.15mol/L)中，室温下固定20_60min ;过滤，在35°C，真空度为0.09MPa的真空干燥箱中烘干。
[0007]本发明采用海藻酸钠包埋法制得的固定化酶，具有较好的热稳定性，在60°C温度下保持7h，其酶活力基本上不变。
【具体实施方式】
[0008]实施例1
[0009]将一定量的Lipase OF和海藻酸钠(浓度2 % )分别溶于磷酸缓冲液(pH值7.0)中，充分溶解，合并两溶液，充分搅拌，混合均匀；用微量注射器逐滴滴入到氯化钙溶液(0.05mol/L)中，室温下固定30min ;过滤，在35°C，真空度为0.09MPa的真空干燥箱中烘干。酶活达到1810U/g。
[0010]实施例2
[0011]将一定量的Lipase OF和海藻酸钠(浓度2 % )分别溶于磷酸缓冲液(pH值7.5)中，充分溶解，合并两溶液，充分搅拌，混合均匀；用微量注射器逐滴滴入到氯化钙溶液(0.05mol/L)中，室温下固定40min ;过滤，在35°C，真空度为0.09MPa的真空干燥箱中烘干。酶活达到2300U/g。
[0012]以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对上述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求的技术方案的精神和范围。
【主权项】
1.一种固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于:将一定量的LipaSe OF和海藻酸钠(浓度1% -3% )分别溶于磷酸缓冲液(pH值6.0-8.0)中，充分溶解，合并两溶液，充分搅拌，混合均匀；用微量注射器逐滴滴入到氯化钙溶液(0.02-0.15mol/L)中，室温下固定20-60min ;过滤，在35°C，真空度为0.09MPa的真空干燥箱中烘干。
【专利摘要】本发明公开了一种固定化脂肪酶的制备方法。其特征是利用海藻酸钠包埋法对Lipase OF进行固定化。固定化脂肪酶具有较好的热稳定性，在60℃温度下保持7h，其酶活力基本上不变，可以用于生物柴油的制备。
【IPC分类】C12N9-20, C12N11-10
【公开号】CN104651345
【申请号】CN201310581545
【发明人】金雪
【申请人】金雪
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年11月19日