一种具有增肥效果的秸秆腐解菌剂及其应用_3

文档序号:8454017阅读:来源:国知局
号培养基上,置于 30°C 培养箱培养3天,分别得到活化的拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCC NO. 3. 6608 和鲜绿青霉(Penicilliumvisidicatum)CGMCCNO. 3. 5933。
[0050] 1. 3、将解木聚糖梭菌(Clostridiumx}danolyticum)DSMNo. 6555 和枯草芽胞 杆菌炬acillussubtilis)ACCCNo. 03189分别接种于装有100ml4号培养基的250ml S角瓶中,置于30°C培养箱静置培养3天,分别得到活化的解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSMNo. 6555 和枯草芽胞杆菌炬acillussubtilis)ACCCNo. 03189。 [0化1] 1. 4、将圆褐固氮菌-1接种在6号培养基上,置于37°C培养箱培养3天,再将培养 的菌落接种于装有25ml5号培养基的250mlS角瓶中,置于37°C培养箱中,100巧m(旋转 半径25mm)振荡培养3天,得到活化的圆褐固氮菌-1。
[0化2] 1. 5、将圆褐固氮菌-2接种在6号培养基上,置于28°C培养箱培养3天,再将培养 的菌落接种于装有25ml5号培养基的250mlS角瓶中,置于28°C培养箱中,lOOrpm(旋转 半径25mm)振荡培养3天,得到活化的圆褐固氮菌-2。
[0化3] 2、扩大培养
[0054] 将步骤1中1. 1和1. 2活化的黑曲霉ZM-8、拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningi;L)CGMCCNO. 3. 6608 和鲜绿青霉(Penicilliumvisidicatum)CGMCC NO. 3. 5933分别接入S个装有3号培养基的发酵罐、步骤1中1. 3活化的解木聚糖梭菌 (Clostridiumxylanolyti州m)DSMNo. 6555 和枯草芽胞杆菌炬acillussubtilis)ACCC No. 03189分别接入两个装有4号培养基的发酵罐、步骤1中1. 4活化的圆褐固氮菌-1和步 骤1中1. 5活化的圆褐固氮菌-2分别接入两个装有5号培养基的发酵罐,均在30°C进行 静止逐级扩大培养,扩大培养过程中接种量为5% -10% (体积百分比含量),分别得到黑 曲霉ZM-8(AspergillusnigerZM-8)CCTCCN0;M209125 发酵液(lXl〇9cfu/ml)(简称黑 曲霉ZM-8 发酵液)、拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCCNO. 3. 6608 发酵 液(lX109cfu/ml)(简称拟康氏木霉发酵液)、鲜绿青霉(Penicilliumvisidicatum)CGMCC NO. 3. 5933发酵液(1X109cfu/ml)(简称鲜绿青霉发酵液)、解木聚糖梭菌(Clostridium x^anol^icum)DSMNo. 6555发酵液(IX109c化/ml)(简称解木聚糖梭菌发酵液)和枯草 芽胞杆菌炬acillussubtilis)ACCCNo.03189 发酵液aX109cfu/ml)(简称枯草芽胞杆 菌发酵液)、圆褐固氮菌-1发酵液(1Xl〇9c化/ml)(简称圆褐固氮菌-1发酵液)和圆褐固 氮菌-2发酵液(1Xl〇9c化/ml)(简称圆褐固氮菌-2发酵液)。
[0化5] 3、菌剂的制备
[0化6] 3.1、菌剂A的制备
[0057] 将按照步骤2得到的圆褐固氮菌-1发酵液和圆褐固氮菌-2发酵液的菌落形成单 位(C化)数目比为1:1的比例进行混合得到发酵混合液A。该发酵混合液A中,圆褐固氮 菌-1和圆褐固氮菌-2的含量均为5X108c化/ml。将吸附载体和上述发酵混合液A混合, 保持总含水量为75% (质量百分比),30°C静止培养3天待充分吸附后,35°C通风自然干燥 得到菌剂A,菌剂A中的活性成分的含量为1X108c化/g菌剂,菌剂A的活性成分为;圆褐固 氮菌-1和圆褐固氮菌-2。所述菌剂A中,圆褐固氮菌-1和圆褐固氮菌-2的菌落形成单位 (cfu)数目比为1:1。
[0化引 3. 2、菌剂B的制备
[0化9] 按照步骤2得到的黑曲霉ZM-8发酵液、拟康氏木霉发酵液、鲜绿青霉发酵液、解 木聚糖梭菌发酵液和枯草芽胞杆菌发酵液的菌落形成单位(C化)数目比为1:1:1:1:1的 比例进行混合得到发酵混合液B。该发酵混合液B中,黑曲霉ZM-8(Aspergillusniger ZM-8)CCTCCNO;M209125、拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCCNO. 3. 6608、 鲜绿青霉(Penicilliumvisidicatum)CGMCCNO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSMNo. 6555 和枯草芽胞杆菌炬acillussubtilis)ACCCNo. 03189 的含 量均为2X108c化/ml。将吸附载体和上述发酵混合液B混合,保持总含水量为75% (质量 百分比),30°C静止培养3天待充分吸附后,35°C通风自然干燥得到菌剂B,菌剂B中的活性 成分的含量为IX108c化/g菌剂,菌剂B的活性成分为;黑曲霉ZM-8(Aspergillusniger ZM-8)CCTCCNO;M209125、拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCCNO. 3. 6608、 鲜绿青霉(Penicilliumvisidicatum)CGMCCNO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium xylanolyticum)DSMNo. 6555 和枯草芽胞杆菌炬acillussubtilis)ACCCNo. 03189。所 述菌剂B中,黑曲霉ZM-8(AspergillusnigerZM-8)CCTCCNO;M209125、拟康氏木霉 (Trichodermapseudokoningi;L)CGMCCNO. 3. 6608、鲜绿青霉(Penicilliumvisidicatum) CGMCCNO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridiumx5danol}rticum)DSMNo. 6555 和枯草芽胞 杆菌炬acillussubtilis)ACCCNo. 03189的菌落形成单位kfu)数目比为1:1:1:1: 1。
[0060] 3. 3、菌剂C的制备
[0061] 将按照步骤2得到的黑曲霉ZM-8发酵液、拟康氏木霉发酵液、鲜绿青霉发酵液、解 木聚糖梭菌发酵液、枯草芽胞杆菌发酵液、圆褐固氮菌-1发酵液和圆褐固氮菌-2发酵液 进行混合得到发酵混合液C。该发酵混合液C中,黑曲霉ZM-8(AspergillusnigerZM-8) CCTCCN0;M209125、拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCCNO. 3. 6608 和鲜 绿青霉(Penicilliumvisidicatum)CGMCCNO. 3. 5933 的含量均为lX108cfu/ml,解木聚糖 梭菌(Clostridiumxylanolyticum)DSMNo. 6555 和枯草芽胞杆菌炬acillussubtilis) ACCCNo. 03189的含量均为1. 5X108c化/ml,圆褐固氮菌-1和圆褐固氮菌-2的含量均 为2X108c化/ml。将吸附载体和上述发酵混合液C混合,保持总含水量为75% (质量百 分比),30°C静止培养3天待充分吸附后,35°C通风自然干燥得到菌剂C,菌剂C中的活性 成分的含量为1X108c化/g菌剂,菌剂C的活性成分为;黑曲霉ZM-8(Aspergillusniger ZM-8)CCTCCNO;M209125、拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCCNO. 3. 6608、 鲜绿青霉(Penicilliumvisidicatum)CGMCCNO. 3. 5933、解木聚糖梭菌(Clostridium x5danol}rticum)DSMNo. 6555、枯草芽胞杆菌炬acillussubtilis)ACCCNo. 03189、圆 褐固氮菌-1和圆褐固氮菌-2。所述菌剂C中,黑曲霉ZM-8(AspergillusnigerZM-8) CCTCCNO;M209125、拟康氏木霉(Trichodermapseudokoningii)CGMCCNO. 3. 6608、 鲜绿青霉(Penicilliumvisidicatum)CG
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