一种从发酵液中快速分离虫草素的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于中草药加工领域，尤其涉及一种从发酵液中快速分离虫草素的方法。
【背景技术】
[0002]冬虫夏草办ce/751(Berk. )G.H. Sung et 是我国传统的 名贵中药材，由于药用价值独特和野生资源减少，导致市场价格飙升，但迄今仍未实现人工 栽培冬虫夏草。蛹虫草Cbr办(L)Link又名北虫草、北冬虫夏草，属于麦 角菌科虫草属，是世界性广布种。蛹虫草代谢产物具有多种生物活性，包括抗肿瘤等。蛹 虫草已经成了一个模式种，其基因组测序的完成加快了蛹虫草各方面的研宄。因蛹虫草容 易栽培，已成为冬虫夏草的替代品，它含有多种活性化合物，如虫草素、麦角固醇等。如下 式所示，虫草素（cordycepin)是蛹虫草主要活性成分之一，是一种腺苷类似物，化学名称为 3'-脱氧腺苷，分子式为CltlH13O3N5，分子量为251. 9Da，熔点为225~26°C。虫草素是从真菌 中分离出来的第一个脱氧核苷类抗生素，紫外最大吸收波长为259nm，虫草素能溶于水，热 乙醇和甲醇，不溶于苯、乙醚和氯仿。
【主权项】
1. 一种从发酵液中快速分离虫草素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： A) 将发酵液浓缩至虫草素浓度为0. 2mg/mL~10mg/mL，得到浓缩液； B) 利用大孔吸附树脂层析分离所述浓缩液，经过HPLC鉴定含有虫草素浓度达到40%， 得到洗脱浓缩液； C) 利用硅胶C1Jl析柱分离所述洗脱浓缩液，经过HPLC鉴定含有虫草素浓度达到90%， 得到纯化后的虫草素浓缩液。
2. 根据权利要求1所述的从发酵液中快速分离虫草素的方法，其特征在于，所述步骤 B) 所述的大孔吸附树脂层析，包括以下步骤： 1) 平衡：用PH6. 0的蒸馏水平衡大孔吸附树脂层析柱； 2) 上样：以lBV/h的流速加入5BV的步骤A)所述的浓缩液； 3) 洗脱：用pH6. 0的蒸馏水洗脱所述大孔吸附层析柱，出现杂峰，至基线平衡后，改用 PH6.0的20%的乙醇洗脱所述大孔吸附层析柱，收集洗脱峰，经过HPLC鉴定含有虫草素浓度 达到40%，即为洗脱浓缩液； 4) 去除杂质：用pH6. 0的95%的乙醇洗脱所述大孔吸附树脂层析柱，洗去多余的杂质； 5) 再生：用无水乙醇再生所述大孔吸附层析柱。
3. 根据权利要求1所述的从发酵液中快速分离虫草素的方法，其特征在于，所述步骤 C) 所述的硅胶C1Jl析，包括以下步骤： 1) 平衡：用pH6. 0的5%乙醇平衡所述硅胶C1Jl析柱； 2) 样品浓缩：将所述洗脱浓缩液浓缩至虫草素浓度为0. 2mg/mL~10mg/mL后上样； 3) 洗脱：梯度洗脱0~40min，洗脱剂为5%-95%乙醇，流速为3mL/min，收集第一个洗脱 峰，经过HPLC鉴定含有虫草素浓度达到90%，即为纯化后的虫草素浓缩液； 4) 去除杂质：用pH6. 0的95%的乙醇洗脱所述硅胶C18层析柱，洗去多余的杂质。
4. 根据权利要求1所述的从发酵液中快速分离虫草素的方法，其特征在于，所述HPLC 鉴定虫草素浓度的色谱条件为：色谱柱4. 6mmX150mm，5ym，流动相为甲醇（A)和水（B)， 采用梯度洗脱，洗脱程序：0-5min，2%A;5-10min，2%-12%A;10-12min，12%-15%A;12-30 min，15%A;洗脱程序为流速为lmL/min，进样量为10yL，紫外检测波长为260nm，柱温 30。。。
5. 根据权利要求1-4任一项所述的从发酵液中快速分离虫草素的方法，其特征在于， 所述的大孔吸附树脂为。
【专利摘要】本发明公开了一种从发酵液中快速分离虫草素的方法，该方法主要先利用大孔吸附树脂AB-8柱层析从发酵液中吸附和解析出虫草素，然后通过十八烷基键合硅胶柱层析分离虫草素，最后利用HPLC和UPLC/MS鉴定虫草素。所述大孔吸附树脂是一种有机高分子，具有选择性好、吸附容量大、吸附速度快、解吸条件温和等优点，正十八烷基硅胶反相色谱利用物质极性的分配原理将不同物质分开，分辨率高。所述方法容易放大且比较环保，为规模化制备虫草素提供了基础。
【IPC分类】C07H1-06, C07H19-16
【公开号】CN104788521
【申请号】CN201510129431
【发明人】张虎成, 范海涛, 杨军, 杨国伟, 王晓杰, 辛秀兰, 王维彬, 李佳
【申请人】北京电子科技职业学院
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年3月24日