专利名称：一种从发酵液中分离提取高纯度布雷菲德菌素a的方法
技术领域：
本发明涉及一种从发酵液中分离提取高纯度布雷菲德菌素A的方法。 背景技术：
布雷菲德菌素A(Brefeldin Α)是一种天然存在的大环内酯类抗生素，化学名 [(1R，2E，6S，10E,lias,14aR)-1，6，7，8，9，1la，12，13，14，14a-Decahydro-l,13-dihydroxy -6-methyl-4H-cyclopent [f] oxacyclotridecin-4-one],分子式为 C16H24O4,分子量约 280,
化学结构式如下
权利要求
1.一种从发酵液中分离提取高纯度布雷菲德菌素A的方法，所述方法包括(1)将含有布雷菲德菌素A的发酵液，经固液分离去除固体杂质，得到澄清的布雷菲德菌素A发酵液上清液；(2)以非极性大孔吸附树脂为吸附剂，对步骤(1)所得布雷菲德菌素A溶液进行吸附层析操作，待树脂吸附至饱和，水洗去除未吸附杂质，再以体积浓度30 60%的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱，洗脱液减压蒸馏回收溶剂、浓缩，获得布雷菲德菌素A粗品；所述非极性大孔吸附树脂为下列之一或其中两种以上的混合物HZ830、HZ820、HZ818、HZ816、HZ841、 HZ801 ；(3)将步骤( 布雷菲德菌素A粗品复溶于乙醇中，得到布雷菲德菌素A饱和乙醇溶液，再以溶析结晶或冷却结晶方式进行结晶操作，所得晶体在-4. 0 X 10_3 -4. 0 X lOlPa、 4 40°C条件下真空干燥1 M小时，即得所述高纯度布雷菲德菌素A。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述含有布雷菲德菌素A的发酵液由布雷正青霉变种CCTCC No =M 208113发酵获得。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(1)为将含有布雷菲德菌素A的发酵液，常温下9000r miiT1离心10分钟，收集上清液，即为所述澄清的布雷菲德菌素A发酵液上清液。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤( 为步骤(1)所得布雷菲德菌素A发酵液上清液用非极性大孔吸附树脂吸附至饱和，先用2 4B. V.的水淋洗除杂，再用 3 8B. V.的体积浓度30 80%的乙醇或甲醇水溶液以0. 05 0. 20B. V. /分钟的流速洗脱，洗脱液在-4. OX 10_2 -8. OX 10_2MPa、40 60°C条件下减压蒸馏回收溶剂，真空浓缩， 得到布雷菲德菌素A粗品。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤C3)为步骤( 所得布雷菲德菌素A粗品进一步于30 70°C下用适量乙醇溶解、配制布雷菲德菌素A饱和乙醇溶液，然后进行冷却结晶操作晶种投入量0. 5 10. Omg/ml，控制降温速度为0. 05 5°C /min, 搅拌速度10 400r/min，出晶温度4 45°C，养晶时间0. 5 72小时；抽滤，所得晶体在-4. OX Kr3 -4. OX KT1MPad 40°C条件下真空干燥1 M小时，获得高纯度布雷菲德菌素A晶体。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤C3)为步骤( 所得布雷菲德菌素A粗品常温下用适量乙醇溶解、配制布雷菲德菌素A饱和乙醇溶液，进行溶析结晶操作 晶种投入量0. 5 10. Omg/ml，在蠕动泵的控制下勻速将反溶剂水滴入至布雷菲德菌素A乙醇溶液，直至乙醇水体积比为1 0. 5 5，搅拌速度10 400r/min，所有反溶剂0. 5 24小时滴完，养晶0. 5 72小时；抽滤，所得晶体在-4. OXlO-3 -4. O X KT1MPad 40°C 条件下真空干燥1 M小时，得到高纯度布雷菲德菌素A晶体。
全文摘要
本发明提供了一种从发酵液中分离提取高纯度布雷菲德菌素A的方法，所述高纯度是指纯度在99％(w/w)以上，所述方法包括将含有布雷菲德菌素A的发酵液，经固液分离除固体杂质，然后以非极性大孔吸附树脂为吸附剂进行吸附层析操作，待树脂吸附至饱和，水洗去除未吸附杂质，再用体积浓度30～60％的极性溶剂水溶液洗脱，洗脱液减压蒸馏回收溶剂、浓缩，获得布雷菲德菌素A粗品，粗品进一步进行溶析结晶或冷却结晶操作，获得所述高纯度布雷菲德菌素A。本发明的有益效果主要体现在生产工艺简单易行、产物收率高、易于实现规模化生产，得到的布雷菲德菌素A晶体纯度高(＞99％)，晶型规则、晶体展开性好，满足生物试剂对品质的高要求。
文档编号C07D313/00GK102399210SQ201110370278
公开日2012年4月4日 申请日期2011年11月18日 优先权日2011年11月18日
发明者吴植献, 吴烨飞, 沈寅初, 王亚军, 薛锋, 郑裕国 申请人:浙江工业大学