goascus sp.)XHV25
[0039](2)方法步骤:
[0040]发酵培养基为初始培养基(桔皮粉20g，蛋白胨5g，NaCl lg, MgSO4Ig,K2HPO4.3H201g，KH2PO40.5g，水100mL)。初始发酵条件为:发酵温度30°C，发酵时间48h，初始pH为6.0，摇床转速160r/min，接种量6%，装液量50mL/250mL。采用单因素试验研宄了初始pH、摇床转速、接种量、装液量、发酵周期、发酵温度对囊酵母(Zygoascus sp.)XHV25产果胶酶活力的影响。
[0041]a.初始pH的优选试验
[0042]其它发酵条件为初始发酵条件，其它发酵条件为初始发酵条件，调整初始pH分别为4.0,4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0,8.5,9.0，摇瓶发酵后测定果胶酶活力，考察初始pH对囊酵母(Zygoascus sp.)XHV25产果胶酶活力的影响。
[0043]由图1可知，当发酵初始pH为5.5时，酶活最高为15.95U/mL。故选择初始pH为5.5o
[0044]b.摇床转速的优选试验
[0045]初始pH取上述试验确定的最优结果，其它发酵条件为初始发酵条件，调整摇床转速分别为140、160、180、200、220rpm，摇瓶发酵后测定果胶酶活力，考察摇床转速对囊酵母(Zygoascus sp.)XHV25产果胶酶活力的影响。
[0046]由图2可知，当摇床转速为160rpm时，酶活最高为17.653U/mL。故选择摇床转速为 160rpmo
[0047]c.接种量的优选试验
[0048]初始pH和摇床转速取上述试验确定的最优结果，其它发酵条件为初始发酵条件，调整接种量分别为2%、4%、6%、8%、10%，摇瓶发酵后测定果胶酶活力，考察接种量对对囊酵母(Zygoascus sp.)XHV25产果胶酶活力的影响。
[0049]由图3知，当接种量为4% (v/v)时，酶活最高为18.39U/mL。故选择接种量为4%。
[0050]d.装液量的优选试验
[0051]初始pH、摇床转速和接种量取上述试验确定的最优结果，其它发酵条件为初始发酵条件，采用250mL摇瓶装液，调整摇瓶装液量分别为12.5mL、25mL、37.5mL、50mL、62.5mL、75mL，摇瓶发酵后测定果胶酶活力，考察装液量对囊酵母(Zygoascus sp.) XHV25产果胶酶活力的影响。
[0052]由图4可知，当摇瓶装液量为25mL(摇瓶体积250mL)时，酶活最高为23.50U/mL。故选择装液量为25mL (摇瓶体积250mL)。
[0053]e.发酵温度的优选试验
[0054]初始pH、摇床转速、接种量和装液量取上述试验确定的最优结果，其它发酵条件为初始发酵条件，调整发酵温度分别为25°0、28°0、31°0、34°0、37°0、40°0，摇瓶发酵后测定果胶酶活力，考察发酵温度对囊酵母(Zygoascus sp.)XHV25产果胶酶活力的影响。
[0055]由图5可知，当发酵温度为31 °C时，酶活最高为23.974U/mL。故选择发酵温度为31。。。
[0056]f.发酵时间的优选试验
[0057]初始pH、摇床转速、接种量、装液量和发酵温度取上述试验确定的最优结果，调整发酵时间分别为12h、24h、36h、48h、60h、72h、84h，摇瓶发酵后测定果胶酶活力，考察发酵温度对囊酵母(Zygoascus sp.)XHV25产果胶酶活力的影响。
[0058]由图6可知，当发酵时间为48h时，酶活最高为24.98U/ml。故选择发酵时间为48h0
[0059]实施例三:XHV25的培养基成分优化
[0060](I)菌株:实施例一筛选出的菌种XHV25
[0061](2)方法步骤:
[0062]培养发酵条件为:发酵时间48h，温度31°C，接种量4%，初始pH5.5，装液量25mL/250mLo
[0063]a.碳源及其添加量优选试验
[0064]以果胶、橙子皮粉、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、玉米粉、木糖、糖蜜、甘露糖、果糖为碳源变量，添加量为20g/L，其他成分为初始培养基成分。
[0065]由图7可知，以橙子皮粉为碳源时菌株XHV25诱导产酶效果最好，酶活为23.925U/mL，因此选择橙子皮粉为最优碳源。
[0066]根据上实验选取橙子皮粉为最优碳源，研宄添加量分别为10g/L、20g/L、30g/L、40g/L、50g/L、60g/L 和 70g/L 对 XHV25 产果胶酶的影响。
[0067]由图8知，当橙子皮粉含量为20g/L时，酶活最高为24.2053U/mL。故选择橙子皮粉添加量为20g/L。
[0068]b.氮源及其添加量优选试验
[0069]碳源及其添加量使用上述试验结果，以牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、酵母粉、玉米浆、大豆粉、麸皮、尿素、柠檬酸氢二铵、硫酸铵、硝酸铵、硝酸钠为氮源变量，添加量为8g/L，其他成分为初始培养基成分。
[0070]由图9知，当选择蛋白胨时酶活最高为23.974U/mL，因此选择蛋白胨为最优氮源。
[0071]根据上述试验选取蛋白胨为最优氮源，研宄添加量分别为3g/L、6g/L、9g/L、12g/L、15g/L、18g/L、21g/L 和 24g/L 对 XHV25 产果胶酶的影响。
[0072]由图10可知，当蛋白胨含量为6g/L时，酶活达到最大值23.909U/mL。故选择蛋白胨添加量为6g/L。
【主权项】
1.一种囊酵母(Zygoascus sp.) XHV25，它的专利保藏编号为CCTCC M 2015183。
2.权利要求1所述的囊酵母XHV25发酵产果胶酶的工艺。
3.权利要求1所述的囊酵母XHV25在利用农业废弃物橙子皮粉生产果胶酶的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种囊酵母及其应用，该菌株被命名为囊酵母(Zygoascus sp.)XHV25，已于2015年3月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M2015183。本发明所选育的菌株可利用农业废弃物橙子皮粉发酵产果胶酶，有效解决农业废弃物的再生利用，降低生产成本，减少环境污染，提高产品附加价值。CCTCC NO:M 201518320150331
【IPC分类】C12N9-18, C12N9-26, C12N1-16, C12N9-88, C12R1-645
【公开号】CN104818223
【申请号】CN201510253431
【发明人】蔡俊, 卢晓华, 王常高, 林建国, 杜馨
【申请人】湖北工业大学
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月18日