)，组氨酸0.2mol/L，氯化钠1.3mol/Lo
[0062]制备过程如下:
[0063]①制备浓度为6.67g/L的德谷胰岛素溶液，其中含浓度为33% (v/v)的乙腈，浓度为0.21mol/L的醋酸钱，用氨水调节pH值至7.5。
[0064]②制备A溶液，其中含有0.2mol/L组氨酸和1.9mol/L氯化钠，用3M醋酸调pH值至 7.0o
[0065]③取150ml上述德谷胰岛素溶液装于500ml三角瓶，依次加入150ml的纯化水和Ig水饱和酸并混匀，然后再加入9.3g组氨酸和15.78g氯化钠，溶解完全后加入200ml A溶液，用3M醋酸调pH至7.1，，最后加入200 μ I浓度为0.5mol/L的醋酸锌溶液，结晶开始。将装有结晶液的三角瓶放在摇床上转速100r/min，25°C结晶3h，将其降温至4°C静置，继续结晶20h。然后取少量混悬进行镜检，可见均一性较好，晶体形状规则，如图2所示。
[0066]实施例3
[0067]制备德谷胰岛素结晶液，该结晶液所含的组分和浓度分别为:德谷胰岛素1.35g/L，醋酸钱 0.105mol/L，乙醇 15% (v/v)，苯酸 0.2% (w/v)，醋酸锌 0.145mmol/L (与德谷胰岛素的含量摩尔比为4:6)，组氨酸0.2mol/L，氯化钠2.4mol/L。
[0068]制备过程如下:
[0069]①制备浓度为2.7g/L的德谷胰岛素溶液，其中含浓度为30% (v/v)的乙醇，浓度为0.21mol/L的醋酸钱，用氨水调节pH值至7.5。
[0070]②取150ml上述德谷胰岛素溶液装于500ml三角瓶，依次加入150ml的纯化水和0.6g水饱和酸，混匀，然后再加入9.3g组氨酸和42.08g氯化钠，溶解完全后用3M醋酸调pH至6.7，加入87 μ I浓度为0.5mol/L的醋酸锌溶液。将装有结晶液的三角瓶放在摇床上转速100r/min，25°C结晶3h，将其降温至4°C静置，继续结晶20h。然后取少量混悬进行镜检，放大160倍，均一性较差的不规则晶体，如图3所示。
[0071]实施例4
[0072]制备德谷胰岛素结晶液，该结晶液所含的组分和浓度分别为:德谷胰岛素5.1g/L，醋酸钱0.063mol/L，乙醇9% (v/v)，苯酸0.2% (w/v)，醋酸锌0.55mmol/L (与德谷胰岛素的含量摩尔比为4:6)，组氨酸0.2mol/L，氯化钠1.3mol/Lo
[0073]制备过程如下:
[0074]①制备A溶液，其中含有0.2mol/L组氨酸和1.9mol/L氯化钠，用3M醋酸调pH至7.0。
[0075]②制备浓度为17g/L的德谷胰岛素溶液，其中含浓度为30% (v/v)的乙醇，浓度为0.21mol/L的醋酸铵，用氨水调节pH值至7.5。
[0076]③取365ml上述德谷胰岛素溶液装于2L三角瓶，依次加入365ml的纯化水和2.43g水饱和酚并混匀，然后再加入22.63g组氨酸和38.40g氯化钠，溶解完全后加入487mlA溶液，用3M醋酸调pH至7.0，最后加入1.334ml浓度为0.5mol/L的醋酸锌溶液，结晶开始。将装有结晶液的三角瓶放在摇床上转速100r/min，25°C结晶3h，将其降温至4°C静置，继续结晶20h。然后取少量混悬进行镜检，放大160倍，可见均一性较好，颗粒较小的晶体。如图4所示。
[0077]实施例5
[0078]制备德谷胰岛素结晶液，该结晶液所含的组分和浓度分别为:德谷胰岛素3.38g/L，醋酸钱0.063mol/L，异丙醇9% (v/v)，苯酸0.2% (w/v)，醋酸锌1.64mmol/L (与德谷胰岛素的含量摩尔比为18:6)，组氨酸0.27mol/L，氯化钠1.3mol/L0
[0079]制备过程如下:
[0080]①制备A溶液，其中含有0.27mol/L组氨酸和1.9mol/L氯化钠，用3M醋酸调pH至 7.0o
[0081]②制备浓度为11.28g/L的德谷胰岛素溶液，其中含浓度为30% (v/v)的异丙醇，浓度为0.21mol/L的醋酸铵，用氨水调节pH值至7.5。
[0082]③取255ml上述德谷胰岛素溶液装于IL三角瓶，依次加入255ml的纯化水和1.7g水饱和酚，混匀，然后再加入21.34g组氨酸和26.82g，溶解完全后加入340ml A溶液，用3M醋酸调PH至7.3，最后加入2.784ml浓度为0.5mol/L的醋酸锌溶液，结晶开始。将装有结晶液的三角瓶放在摇床上转速100r/min，25°C结晶3h，将其降温至4°C静置，继续结晶20h。然后取少量混悬进行镜检，放大160倍，颗粒较大，但是晶体形状不规则，如图5所示。
[0083]实施例6
[0084]制备德谷胰岛素结晶液，该结晶液所含的组分和浓度分别为:德谷胰岛素3.72g/L，醋酸钱0.063mol/L，乙腈9% (v/v)，苯酸0.2% (w/v)，醋酸锌0.4mmol/L (与德谷胰岛素的含量摩尔比为4:6)，组氨酸0.05mol/L，氯化钠1.3mol/Lo
[0085]制备过程如下:
[0086]①制备浓度为12.4g/L的德谷胰岛素溶液，其中含浓度为30%的乙腈，浓度为0.21mol/L的醋酸铵，用氨水调节pH值至7.5。
[0087]②制备A溶液，其中含有0.05mol/L组氨酸和1.9mol/L氯化钠，用3M醋酸调pH值至7.0。
[0088]③取150ml上述德谷胰岛素溶液装于500ml三角瓶，依次加入150ml的纯化水和Ig水饱和酚，混匀，然后再加入2.325g组氨酸和15.78g，溶解完全后加入200ml A溶液，用3M醋酸调pH至7.3，最后加入400 μ I浓度为0.5mol/L的醋酸锌溶液，结晶开始。将装有结晶液的三角瓶放在摇床上转速100r/min，25°C结晶3h，将其降温至4°C静置，继续结晶20h。然后取少量混悬进行镜检，可见颗粒较大的晶体，如图6所示。
[0089]实例7
[0090]制备德谷胰岛素结晶液，该结晶液所含的组分和浓度分别为:
[0091]实验A按照公开号为CN102219851A、名称为甘精胰岛素结晶的制备方法的中国发明专利中的实施例1制备50mL结晶体系，含有德谷胰岛素3.5g/L，乙腈20 %，乙酸0.7M，乙酸钠 0.5M，苯酚 0.4%,氯化锌 120mg/L，ρΗ7.9。
[0092]实验B按照如下制备过程制备得到:将德谷胰岛素加乙腈水溶液，2Μ氢氧化钠溶液调节PH值至8.6，溶解完全，待用；配制盐溶液:二水合柠檬酸三钠、乙酸铵、氯化钠、苯酚水溶液和水混合均匀，2M氢氧化钠溶液调节pH值至8.6，并加至德谷胰岛素溶液中，混匀；最后加入乙酸锌溶液，2M盐酸调节pH值至8.1 ;放置摇床100转/分钟，15°C条件下结晶3h，然后转移至2°C条件下静置结晶15h。其中，各成分的浓度如下:德谷胰岛素3.2g/L，乙腈7 % (v/v)，二水合柠檬酸三钠0.1M，乙酸铵0.05M，氯化钠0.2M，苯酚0.05 % (w/v)，锌离子与德谷胰岛素的摩尔比为3:1，pH8.1o
[0093]实验C按照实例2的组分和含量配制。
[0094]结果:实验A德谷胰岛素只能形成絮状沉淀，未能形成规则的晶体(如图7)。结果实验B德谷胰岛素仍不能形成结晶，仍以无定形沉淀形式存在(如图8)。实验C德谷胰岛素能够形成规则的，颗粒较大的晶体(如图9)。
[0095]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种德谷胰岛素结晶的制备方法，其特征在于包括如下步骤:在0.05?0.27M组氨酸体系，并且含体积百分比8?15%有机溶剂的条件下，从含有德谷胰岛素、锌离子、酚类物质及盐的结晶液中，在pH值为6.5?8条件下使德谷胰岛素结晶，得到德谷胰岛素结晶；所述有机溶剂为易溶于水的有机溶剂。2.根据权利要求1所述德谷胰岛素结晶的制备方法，其特征在于包含如下步骤:(1)配制含有0.05?0.27M组氨酸、1?8g/L德谷胰岛素、体积百分比为8?15%的有机溶剂、质量体积百分比为0.2?0.5%的酚类物质、0.3?2.4M盐的结晶液；(2)调节结晶液pH值至6.5?8，加入锌离子，锌离子的用量按锌离子与德谷胰岛素按摩尔比(2?15):3计；结晶；(3)然后在2?8°C条件下静置结晶，获得稳定的德谷胰岛素结晶。3.根据权利要求2所述德谷胰岛素结晶的制备方法，其特征在于:步骤(1)和步骤(2)在1?30°C条件下进行。4.根据权利要求2所述德谷胰岛素结晶的制备方法，其特征在于:步骤(2)中所述的结晶的条件为于20?28°C在搅拌状态下进行，结晶时间为3?6小时；步骤(3)中所述的结晶的条件为于2?8°C静置结晶14?22小时。5.根据权利要求1所述德谷胰岛素结晶的制备方法，其特征在于:所述的德谷胰岛素在所述的结晶液中的浓度为1?8g/L ；所述的盐的浓度为0.3?2.4M ;所述的锌离子的用量按锌离子与德谷胰岛素按摩尔比(2?15):3计；所述的酚类物质在所述的结晶液中的浓度为质量体积比0.2?0.5%。6.根据权利要求5所述德谷胰岛素结晶的制备方法，其特征在于:所述的德谷胰岛素在所述的结晶液中的浓度为1.35?5.lg/L ；所述的盐的浓度为1.2?2.4M ;所述的锌离子的用量按锌离子与德谷胰岛素按摩尔比(2?9):3计；所述的酚类物质在所述的结晶液中的浓度为质量体积比0.2?0.22%。7.根据权利要求1或2所述德谷胰岛素结晶的制备方法，其特征在于:所述的pH值为6.7 ?7.3o8.根据权利要求1或2所述德谷胰岛素结晶的制备方法，其特征在于:所述有机溶剂为乙腈、乙醇、正丙醇和异丙醇中的至少一种；所述的盐为氯化钠、醋酸钠、柠檬酸钠、醋酸铵和硫酸铵中的至少一种；所述的锌离子以锌盐形式加入，锌盐为氯化锌、氧化锌、乙酸锌、溴化锌和硫酸锌中的至少一种；所述的酚类物质为间苯二酚、苯酚、甲酚、间甲酚、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲酸甲酯中的至少一种。9.根据权利要求1或2所述德谷胰岛素结晶的制备方法，其特征在于:还包括水洗结晶的步骤。10.权利要求1?9任一项所述德谷胰岛素结晶的制备方法的应用，其特征在于:所述德谷胰岛素结晶的制备方法用于工业化制备德谷胰岛素结晶。
【专利摘要】本发明公开了一种德谷胰岛素结晶的制备方法及应用。本发明通过在0.05～0.27M组氨酸体系，并且含体积百分比8～15％有机溶剂的条件下，从含有德谷胰岛素、锌离子、酚类物质及盐的结晶液中，在pH值为6.5～8条件下使德谷胰岛素结晶，得到德谷胰岛素结晶。该制备方法生产效率高，稳定性好，因此，可用于工业化制备德谷胰岛素结晶。
【IPC分类】C07K14/62
【公开号】CN104892749
【申请号】CN201510334795
【发明人】张伟, 周小江, 曹春来, 肖拥军, 周翠, 林影
【申请人】珠海联邦制药股份有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月16日