一种提取虫草中氨基酸的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及提取冬虫夏草中氨基酸的方法。更具体地说，本发明涉及用柱层层析发提取氨基酸的方法。
【背景技术】
[0002]冬虫夏草是我国的一种名贵中药材，属于药用真菌，是寄生于昆虫体上的真菌与其寄生昆虫形成的虫菌复合体，隶属于子囊菌纲、麦角菌科和虫草属。在近年的研宄表明，冬虫夏草具有镇静、抑菌、抑制癌症、增强机体免疫功能等多方面的药理作用。
[0003]冬虫夏草具有多种有效成分，这些有效成分具有广泛的药理作用。虫草多糖可以增强免疫力，抗肿瘤及降血糖作用；D-甘露醇；脂肪和脂肪酸，目前发现有12种脂肪酸；抗菌活性成分；生物碱，其含量较少，包含虫草素、尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤等13种，具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫调节和清除自由基等多种药理作用；微量元素，具有30多种微量元素；其他成分，包括一些酶、维生素和抗生素成分；蛋白和氨基酸，其含有天门冬、丝、苏、谷、脯、甘、颉、蛋、异亮、亮、苯丙、络、赖、胱、半胱、精和色氨酸18种氨基酸，其中8种为人体必须氨基酸，以谷氨酸、精氨酸及络氨酸为主要有效成分，其含量在20-30%之间，与虫草具有补亏虚、辅助治疗消化系统及增强免疫功能等作用有必然的联系，从虫草中将氨基酸提取出来用于医学研宄或者保健品研发。
[0004]专利申请号201310535298.1公布了一种冬虫夏草精华物质的提取方法，其经过预处理、纯水萃取、萃取液精密分离、萃取液微孔膜过滤、反渗透膜浓缩、减压浓缩和干燥共7步提取净化物质，提取的精华物含量为50-70%。此方法工艺较复杂不利于工业应用。
【发明内容】
[0005]作为各种广泛且细致的研宄和实验的结果，本发明的发明人已经发现一种提取虫草中氨基酸的方法，将提取工艺简化为3步，和并在柱层层析分离步骤中采用丙酮和乙酸乙酯混合溶液作为解吸剂分离氨基酸和脂肪类物质，省略去除脂肪类物质这一步骤。基于这种发现，完成了本发明。
[0006]本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
[0007]为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种提取虫草中氨基酸的方法，包括以下步骤:
[0008]步骤1:将冬虫夏草粉碎成100目，虫草放入锥形瓶中，锥形瓶置于震荡仪中用35-65°C水提取3次，每次水提过程虫草与水的质量比为1: 3?5 ;
[0009]步骤2:水提后的冬虫夏草烘干放入锥形瓶，锥形瓶置于震荡仪中用溶剂提取3?8次，收集上清液，精馏除掉上清液中溶剂，每次醇提取过程虫草与醇的质量比为1:1?4 ；
[0010]步骤3:用吸管吸取浓缩液，吸管沿层析柱内壁缓缓加入浓缩液，待样品进柱后，用丙酮浓度为I?6%的乙酸乙酯溶液冲洗，分别收集层析柱底的各层流出液。
[0011]优选的是，其中，所述步骤I的水温优选为50°C。
[0012]优选的是，其中，所述步骤I中每次水提过程虫草与水的质量比优选为1: 3.5。
[0013]优选的是，其中，所述步骤2提取次数为5次。
[0014]优选的是，其中，所述步骤2中溶剂优选为乙醇、甲醇、乙二醇、丙三醇中的一种或几种。
[0015]优选的是，其中，所述步骤2中每次醇提取过程虫草与醇的质量比优选为1: 2.3。
[0016]优选的是，其中，所述步骤3中层析柱中的吸附剂优选为硅胶。
[0017]优选的是，其中，所述硅胶目数优选为80目。
[0018]本发明至少包括以下有益效果:本发明采用溶剂提取和柱层层析结合的工艺方式提取虫草中氨基酸，将提取工艺简化为3步，并在柱层层析分离步骤中采用丙酮和乙酸乙酯混合溶液作为解吸剂分离氨基酸和脂肪类物质，分离效果好且解吸剂沸点低易于后续氨基酸的浓缩。
【具体实施方式】
[0019]下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0020]应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
[0021]〈实例1>
[0022]冬虫夏草的前处理:冬虫夏草经洗涤、除杂后，晾晒至干燥。
[0023]步骤1:将2g冬虫夏草粉碎成100目，50ml锥形瓶中加入50°C水7g和虫草，锥形瓶置于震荡仪中提取10分钟，重复实验3次，收集3次实验的水溶液。
[0024]步骤2:水提后的冬虫夏草烘干放入50ml锥形瓶，之后加入4.6g乙醇；锥形瓶置于震荡仪中提取10分钟，重复实验5次，收集上清液；常压精馏除掉上清液中乙醇。
[0025]步骤3:用吸管吸取步骤2所得浓缩液，吸管沿层析柱内壁缓缓加入浓缩液，待样品进柱后，用丙酮浓度I %的乙酸乙酯溶液冲洗，观察到层析柱内分成2层层析带，分别用试管分别收集2层层析带的流出液，用色谱测试2流出液提纯物发现，层析带中氨基酸与脂肪类未分离。
[0026]< 实例 2>
[0027]冬虫夏草的前处理:冬虫夏草经洗涤、除杂后，晾晒至干燥。
[0028]步骤1:将2g冬虫夏草粉碎成100目，50ml锥形瓶中加入50°C水7g和虫草，锥形瓶置于震荡仪中提取10分钟，重复实验3次，收集3次实验的水溶液。
[0029]步骤2:水提后的冬虫夏草烘干放入50ml锥形瓶，之后加入4.6g乙醇；锥形瓶置于震荡仪中提取10分钟，重复实验5次，收集上清液；常压精馏除掉上清液中乙醇。
[0030]步骤3:用吸管吸取步骤2所得浓缩液，吸管沿层析柱内壁缓缓加入浓缩液，待样品进柱后，用丙酮浓度2%的乙酸乙酯溶液冲洗，观察到层析柱内分成2层层析带，分别用试管分别收集2层层析带的流出液，用色谱测试2流出液提纯物发现，层析带中氨基酸与脂肪类未分离。
[0031]〈实例3>
[0032]冬虫夏草的前处理:冬虫夏草经洗涤、除杂后，晾晒至干燥。
[0033]步骤1:将2g冬虫夏草粉碎成100目，50ml锥形瓶中加入50°C水7g和虫草，锥形瓶置于震荡仪中提取10分钟，重复实验3次，收集3次实验的水溶液。
[0