专利名称：L-氨基酸的制造方法
技术领域：
本发明涉及由N-琥珀酰氨基酸的对映体混合物高效率地制造L-氨基酸的方法， 该方法通过组合下述反应来制造L-氨基酸1)使用N-酰基氨基酸消旋酶，使N-琥珀酰氨基酸进行外消旋化的反应，和2、使用L-琥珀酰酶，使N-琥珀酰-L-氨基酸进行特异性水解的反应。
背景技术：
光学活性氨基酸、特别是光学活性非天然氨基酸，是作为农药、药品等的合成原料及中间体有用的化合物。如何高效率地制造具有光学活性的氨基酸、特别是非天然氨基酸， 成为工业生产中重要的问题。作为解决上述问题的方法之一，专利文献1中公开了下述方法以N-乙酰氨基酸的外消旋体作为原料，通过使用D-酰化氨基酸水解酶(aminoacylase)或者L-酰化氨基酸水解酶来光学拆分D构型和L构型，从而得到具有较高光学纯度的氨基酸。在上述方法中，得到光学活性氨基酸的收率最高为50%，一半的外消旋体被浪费。因此，为了使残存的 N-乙酰氨基酸发生外消旋化而组合使用N-酰基氨基酸消旋酶与酰化氨基酸水解酶，以试图提高收率。然而，将N-酰基氨基酸消旋酶与酰化氨基酸水解酶组合后的拆分反应性较低，氨基酸的收率停留在70 75%，另外，N-酰基体底物会残留，需要对其进行分离的步骤，由此会阻碍实用化(专利文献2、3、4、5)。此外，公知N-酰基氨基酸消旋酶对N-酰基氨基酸的反应性较低(非专利文献1、 2，专利文献6)，近年来，有报道称N-酰基氨基酸消旋酶对N-琥珀酰氨基酸的反应性高于对N-乙酰氨基酸的反应性(非专利文献1、2，专利文献6)。另有报道称L-琥珀酰酶对天然L-氨基酸的N-琥珀酰体产生作用(非专利文献1、2，专利文献6)。然而，通过将N-酰基氨基酸消旋酶与L-琥珀酰酶组合，由N-琥珀酰-氨基酸的对映体混合物高效率地制造 L-氨基酸的方法是未知的。此外，本制造方法中可以使用的原料即通式(III)代表的N-琥珀酰氨基酸或其盐，目前为止是未知的。[化学式1]
权利要求
1.L-氨基酸的制造方法，该制造方法通过使L-琥珀酰酶作用于N-琥珀酰氨基酸的对映体混合物来制造L-氨基酸；其中，在共存有N-酰基氨基酸消旋酶的条件下，一边使生成的L-氨基酸析出，一边进行反应。
2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，所述L-氨基酸的溶解浓度为1重量％以下。
3.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，所述N-琥珀酰氨基酸如通式(I)所示 [化学式1]
4.根据权利要求3所述的制造方法，其中，所述式⑴和(II)中，R为4-溴苄基、3-氟苄基、萘基甲基、茚满基或6-庚烯基。
5.根据权利要求1 4中任一项所述的制造方法，其中，N-酰基氨基酸消旋酶来源于属于地芽孢杆菌属(GeobaciLLus)或栖热菌属(Thermus)的微生物，L-琥珀酰酶来源于属于地芽孢杆菌属(GeobaciLLus)的微生物。
6.根据权利要求5所述的制造方法，其中，N-酰基氨基酸消旋酶来源于嗜热地芽孢杆菌(GeobaciLLus kaustophiLus)、嗜热栖热菌(Thermus thermophiLus)，L-琥珀酰酶来源于嗜热地芽孢杆菌(GeobaciLLus kaustophiLus)。
7.根据权利要求6所述的制造方法，其中，N-酰基氨基酸消旋酶来源于嗜热地芽孢杆菌(GeobaciLLus kaustophiLus) NBRC102445、嗜热栖热菌(Thermus thermophiLus) HB8, L-琥珀酰酶来源于嗜热地芽孢杆菌(GeobaciLLus kaustophiLus) NBRC10M45。
8.根据权利要求1 4中任一项所述的制造方法，其中，N-酰基氨基酸消旋酶和L-琥珀酰酶是用包含编码N-酰基氨基酸消旋酶和L-琥珀酰酶的DNA的载体进行转化而得到的转化体。
9.通式(III)表示的N-琥珀酰氨基酸或其盐，[化学式3]
10.根据权利要求9所述的N-琥珀酰氨基酸或其盐，其中，在所述式(III)中，R为 4-溴苄基、3-氟苄基、2-萘基甲基、2-茚满基或6-庚烯基。
全文摘要
本发明涉及L-氨基酸的制造方法，该方法在共存有N-酰氨基酸消旋酶的条件下，使L-琥珀酰酶作用于N-琥珀酰氨基酸的对映体混合物，并通过L构型特异的水解来制得L-氨基酸。特别是，本发明涉及以高收率制造L-氨基酸的方法，该方法以溶解浓度特别低的N-琥珀酰氨基酸为原料，一边使生成的L-氨基酸析出到反应体系外，一边进行反应。根据本发明，可以高效率地制造光学纯度高的L-氨基酸，特别是作为药品、农药等原料有用的L-氨基酸。
文档编号C12P41/00GK102203274SQ20098014317
公开日2011年9月28日 申请日期2009年10月28日 优先权日2008年10月29日
发明者田冈直明, 西山陶三, 野尻增俊 申请人:株式会社钟化