专利名称：一种红花花粉氨基酸的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种红花花粉氨基酸的制备方法，属保健品和化妆品领域。
背景技术：
红花系草红花,属菊科红花属一年生草本植物Carthamus tinctorius L.。其资源分布较广，在很多国家均有栽培。全世界红花年种植面积约110万公顷。红花主要生产国为印度，年种植面积约76万公顷，占世界总面积和产量的一半以上，我国红花栽培面积在3 4万公顷，主产区集中在新疆，其次为四川、云南、河南等。我国红花栽培历史悠久，汉代就有关于红花栽培和药用的记载，是我国传统大宗中药材。其功效是活血化瘀、消炎镇痛，具有降血脂、降血压、消淤血、消肿痛、舒筋活络等作用，是中医治疗心脑血管疾患的要药。红花花绒主要是药用，红花籽主要是制食用油，其红花花粉多用于保健品。花粉，英文名称Pollen，其定义为有花植物的小孢子，萌发时产生含三个单倍体核的雄配子体。花粉的主要成分是蛋白质、氨基酸、维生素、微量元素、活性酶、黄酮类、芸苔素、脂类、核酸等。其中氨基酸的含量及比例是最接近联合国粮农组织(FAO)推荐的氨基酸模式。1860年瑞典植物学家林荟引用拉丁文Pollen (原意为“强大的、元气充沛的”)为花粉命名，完美地体现了花粉的本质。市场上销售的花粉，多半是蜂农利用电击网迫使蜜蜂将采回的花粉粒抖落的蜂窝门口获得。这样，影响酿蜜的质量和影响蜂群的繁衍。近年来，食品化学添加剂应用不当，身体受到损害。因此，人们回归自然，返璞归真的理念和愿望日趋强烈
发明内容
本发明目的在于，提供一种红花花粉氨基酸的制备方法，该方法是将红花的干燥花绒，加水浸泡，离心，得到浸泡液；再将剩余的红花渣加水浸泡，离心，得到浸泡液，合并二次浸泡液，过筛，加入纤维素酶，混悬均匀，放置，然后快速搅拌，静置，将沉淀物用抽滤，水洗，抽滤，获得纯红花花粉，再将花粉进行破壁处理，再通过活性炭柱与阳离子交换树脂柱串联使用，即可得到亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸四种氨基酸纯品。该方法完全采用人工操作，工艺简单，成本低，通过本发明所述方法获得的红花花粉氨基酸为白色晶体，无特殊气味，品种属完全纯正，从而提高了红花的经济附加值，增加药农收入。放弃蜜蜂采制的红花花粉，使其参与酿蜜和满足蜂群良性繁衍，稳定蜂产业，提高了其经济附加值及使用价值。本发明所述的一种红花花粉氨基酸的制备方法，按下列步骤进行a、将红花的干燥花绒，按重量比加入5-20倍量的去离子水浸泡，温度室温_60°C，时间5-10小时，800-1400转转栏离心机离心，取得第一次浸泡液；b、将剩余的红花渣中按步骤a干燥花绒的重量比再次加入4-8倍量的去离子水浸泡，温度室温_60°C，时间5-10小时，800-1400转转栏离心机离心，取得第二次浸泡液，合并二次浸泡液，过筛网250-350目，得到过滤浸泡液；C、将步骤b的浸泡液置于直径高=1: 1-3的透明或半透明的圆柱体容器中，加入纤维素酶，混悬均匀，在温度20-60°C条件下放置6-12小时得到酶化液体；d、将步骤c的酶化液体沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转，静置10-60分钟，虹吸出上清液，再将沉淀物中按体积比加入去离子水10-50kg，重复搅拌、静置和虹吸操作过程，至使花粉存留在容器底部；e、将步骤d花粉沉淀物用抽滤滤出水分，保持完整滤饼，再用去离子水洗涤至滤出液澄清无色，再用乙醇和乙醚梯度抽滤，倒出滤饼摊干，获得纯红花花粉；f、将步骤e的花粉通过超声、酶法或温差法，或三种方法集成做破壁处理，使花粉中的氨基酸释放出来，制成红花花粉破壁水溶液，在温度10°c下放置，时间3-4天，析出大量悬浮和沉淀物，过滤，取得红花花粉水解液；g、将步骤f红花花粉水解液，用氨水调pH4. 0，然后依次通过常规的活性炭柱和732型阳离子交换树脂柱，控制流速12毫升/分，再经过纸层析、pauly反应、茚三酮反应和坂口反应检测，得到含有亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的洗脱液；h、将步骤g的含有亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸洗脱液按常规方法通过纸层析、pauly反应、茚三酮反应和坂口反应检测，依次进行精制
亮氨酸精制pauly反应呈阴性部分减压浓缩，加活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，重结晶再溶于温度80°C热水中，再进行活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，滤液用95%乙醇洗涤、干燥，即可得到亮氨酸片状白色结晶；组氨酸精制pauly反应呈阳性部分在温度70°C下浓缩除氨，反复3次，再用水稀释，用盐酸调PH3.0，加入活性炭脱色，浓缩，加入体积比2倍量的浓度70%乙醇，静置，有大量结晶析出，过滤，用浓度为75%和95%乙醇依次洗涤2次，将结晶用水溶解调pH2. 5，再加入活性炭脱色，有大量结晶析出，过滤，再用浓度为75%和95%乙醇洗涤，干燥，即可得到组氨酸盐酸盐纯品；赖氨酸精制pauly反应渐弱，茚三酮反应呈阳性的部分减压浓缩除氨，至小体积，加水，用HCl调pH4. 0，加入活性炭脱色30分钟，过滤，结晶，用浓度为95%乙醇洗涤，干
燥，得赖氨酸盐酸盐纯品；精氨酸精制将坂口反应阳性洗脱液部分，合并减压除氨，用HCl调pH4. 0，减压浓缩至有结晶析出，结晶，用浓度为75%乙醇浸泡，抽干，再用浓度为95%乙醇脱水，抽干，得白色结晶精氨酸盐酸盐纯品。步骤c纤维素酶的加入量按浸泡液重量比加入纤维素酶O. 005-0. 01%。步骤g将活性炭柱与阳离子交换树脂串联使用。本发明所述的一种红花花粉氨基酸的制备方法，该方法是将红花花绒的柱蕊中附着大量的干花粉，采用水洗、水悬浮方法将红花花粉从柱蕊上洗脱下来，根据红花花绒残片在水中的比重小于红花花粉的原理，使红花花粉先沉淀于容器底部，收集沉淀，重复水悬浮方法，使残留的红花花绒残片进一步分出，用纤维素酶的酶解作用，进一步酶解悬浮于液体中红花花绒细小残片，使大分子的红花花绒的纤维素酶解成小分子的纤维素，使之全部或部分溶于水中，尽量出尽花粉中的红花花绒，收集花粉，采用梯度降低溶剂极性的方法，清除红花花粉中的水分，摊干，通过超声、酶法、温差法或三种方法的集成做破壁处理，使花粉中的氨基酸释放出来，再通过活性炭柱与阳离子交换树脂柱串联使用，即可得到亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的四种氨基酸纯品。通过本发明所述方法获得的红花花粉氨基酸为白色晶体，无特殊气味。
图1为本发明样品红花花粉氨基酸图谱图2为本发明标准品红花花粉氨基酸图谱
具体实施例方式实施例1a、将红花的干燥花绒10kg，按重量比加入5倍量的去离子水浸泡，室温，时间5小时，800转转栏离心机离心，取得第一次浸泡液30kg ；b、将剩余的红花渣中按步骤a干燥花绒重量比再次加入4倍量的去离子水浸泡，室温，时间5小时，800转转栏离心机离心，取得第二次浸泡液，合并二次浸泡液80kg，过筛网250目，得到过滤浸泡液；C、将过滤浸泡液80kg置于直径高=I I的透明的圆柱体容器中，按浸泡液重量比加入纤维素酶O. 005%,混悬均勻,在温度20°C条件下放置6小时；d、将步骤c的酶化液体沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转，静置10分钟，虹吸出上清液(用作生产红花黄色素)，再将沉淀物中加入去离子水10kg，沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转，静置10分钟，虹吸出上清液，至使花粉存留在容器底部；e、将花粉沉淀物用抽滤滤出水分，保持完整滤饼，用去离子水洗涤至滤出液澄清无色，再用乙醇和乙醚梯度抽滤，倒出滤饼摊干，获得纯红花花粉；f、将所得的花粉通过常规的超声法做破壁处理，使花粉中的氨基酸释放出来，制成红花花粉破壁水溶液，在温度10°c下放置3-4天，析出大量悬浮和沉淀物，过滤，取得红花花粉水解液；g、按常法将颗粒活性炭处理成柱层析活性炭，装柱，8 X 140厘米厘米，再将732型阳离子交换树脂处理成[H+]型，装柱，IOX 170厘米，活性炭柱和树脂柱串联使用，将破壁的红花花粉水解液，用氨水调PH4. O,然后依次通过炭柱和树脂柱，控制流速12毫升/分，当茚三酮反应阳性时，以每份500毫升收集，用纸层析检测(条件正丁醇冰醋酸水=4:2: 1)，合并相同流份，得1、I1、II1、IV组分，这部分主要含亮氨酸，再将水解液通过活性炭柱和树脂柱，pauly反应为阴性，树脂没有饱和，组氨酸没有出现，用蒸馏水以20毫升/分流速洗树脂柱至流出液PH6. 8，改用O.1M氨水洗脱，流速12毫升/分，当pauly反应为阳性时说明组氨酸被洗脱下来了，继续分部收集，至赖氨酸全被洗脱后，继续洗脱，可出现一段空白区，改用2M氨水洗脱，流速20毫升/分，洗至茚三酮反应阴性，精氨酸洗脱完成；h、将含有亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的洗脱液，采用纸层析、pauly反应、茚三酮反应和坂口反应检测，依次进行精制
亮氨酸精制将pauly反应呈阴性部分减压浓缩，加活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，重结晶再溶于温度80°C热水中，再进行活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，滤液用95%乙醇洗涤、干燥，即可得到亮氨酸片状白色结晶；组氨酸精制将pauly反应呈阳性部分在温度70°C下浓缩除氨，反复3次，再用水稀释至5000mL，用盐酸调pH3. 0，加入活性炭脱色，浓缩至200mL，加入体积比2倍量75%乙醇，静置，有大量结晶析出，过滤，用浓度为75%和95%乙醇依次洗涤2次，将结晶用水溶解调pH2. 5，再加入活性炭脱色，有大量结晶析出，过滤，再用浓度为75%和95%乙醇洗涤，干燥，即可得到组氨酸盐酸盐纯品；赖氨酸精制pauly反应渐弱，茚三酮反应呈阳性的部分减压浓缩除氨，至小体积，加入水2000mL，用HCl调pH4. 0，加入活性炭脱色30分钟，过滤，结晶，用浓度为95%乙
醇洗涤，干燥，得赖氨酸盐酸盐纯品；精氨酸精制将坂口反应阳性洗脱液部分，合并减压除氨，用HCl调pH4. 0，减压浓缩至有结晶析出，结晶，用浓度为75%乙醇浸泡，抽干，再用浓度为95%乙醇脱水，抽干，得白色结晶精氨酸盐酸盐纯品。通过本发明所述的方法获得的亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸为白色晶体，无特殊气味。实施例2a、将红花的干燥花绒10kg，按重量比加入10倍量的去离子水浸泡，温度30°C，时间6小时，1000转转栏离心机·离心，取得第一次浸泡液40kg ；b、将剩余的红花渣中按步骤a干燥花绒重量比再次加入5倍量的去离子水浸泡，温度30°C，时间6小时，1000转转栏离心机离心，取得第二次浸泡液，合并二次浸泡液90kg，过筛网280目，得到过滤浸泡液；C、将过滤浸泡液90kg置于直径高=I 2的半透明的圆柱体容器中，按浸泡液重量比加入纤维素酶O. 007%，混悬均匀，在温度30°C条件下放置9小时；d、将步骤c的酶化液体沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转，静置30分钟，虹吸出上清液(用作生产红花黄色素)，再将沉淀物中加入去离子水30kg，沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转，静置30分钟，虹吸出上清液，至使花粉存留在容器底部；e、将花粉沉淀物用抽滤滤出水分，保持完整滤饼，用去离子水洗涤至滤出液澄清无色，再用乙醇和乙醚梯度抽滤，倒出滤饼摊干，获得纯红花花粉；f、将所得的花粉通过常规的酶法做破壁处理，使花粉中的氨基酸释放出来，制成红花花粉破壁水溶液，在温度10°C下放置3-4天，析出大量悬浮和沉淀物，过滤，取得红花花粉水解液；g、按常法将颗粒活性炭处理成柱层析活性炭，装柱，8 X 140厘米厘米，再将732型阳离子交换树脂处理成[H+]型，装柱，IOX 170厘米，活性炭柱和树脂柱串联使用，将破壁的红花花粉水解液，用氨水调PH4. 0，然后依次通过炭柱和树脂柱，控制流速12毫升/分，当茚三酮反应阳性时，以每份500毫升收集，用纸层析检测(条件正丁醇冰醋酸水=4:2: 1)，合并相同流份，得1、I1、II1、IV组分，这部分主要含亮氨酸，再将水解液通过活性炭柱和树脂柱，pauly反应为阴性，树脂没有饱和，组氨酸没有出现，用蒸馏水以20毫升/分流速洗树脂柱至流出液PH6. 8，改用O.1M氨水洗脱，流速12毫升/分，当pauly反应为阳性时说明组氨酸被洗脱下来了，继续分部收集，至赖氨酸全被洗脱后，继续洗脱，可出现一段空白区，改用2M氨水洗脱，流速20毫升/分，洗至茚三酮反应阴性，精氨酸洗脱完成；h、将含有亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的洗脱液，采用纸层析、pauly反应、茚三酮反应和坂口反应检测，依次进行精制亮氨酸精制将pauly反应呈阴性部分减压浓缩，加活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，重结晶再溶于温度80°C热水中，再进行活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，滤液用95%乙醇洗涤、干燥，即可得到亮氨酸片状白色结晶；组氨酸精制将pauly反应呈阳性部分在温度70°C下浓缩除氨，反复3次，再用水稀释至5000mL，用盐酸调pH3.0，加入活性炭脱色，浓缩至200mL，加入体积比2倍量75%乙醇，静置，有大量结晶析出，过滤，用浓度为75%和95%乙醇依次洗涤2次，将结晶用水溶解调pH2. 5，再加入活性炭脱色，有大量结晶析出，过滤，再用浓度为75%和95%乙醇洗涤，干燥，即可得到组氨酸盐酸盐纯品；赖氨酸精制pauly反应渐弱，茚三酮反应呈阳性的部分减压浓缩除氨，至小体积，加入水2000mL，用HCl调pH4.0，加入活性炭脱色30分钟，过滤，结晶，用浓度为95%乙
醇洗涤，干燥，得赖氨酸盐酸盐纯品；精氨酸精制将坂口反应阳性洗脱液部分，合并减压除氨，用HCl调pH4.0，减压浓缩至有结晶析出，结晶，用浓度为75%乙醇浸泡，抽干，再用浓度为95%乙醇脱水，抽干，得白色结晶精氨酸盐酸盐纯品。通过本发明所述的方法获得的亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸为白色晶体，无特殊气味。实施例3a、将红花的干燥花绒10kg，按重量比加入15倍量的去离子水浸泡，温度50°C，时间8小时，1200转转栏离心机离心，取得第一次浸泡液50kg ；b、将剩余的红花渣中按步骤a干燥花绒重量比再次加入7倍量的去离子水浸泡，温度50°C，时间8小时，1200转转栏离心机离心，取得第二次浸泡液，合并二次浸泡液110kg，再过300目筛网，得到过滤浸泡液；C、将过滤浸泡液11Okg置于直径高=13的透明的圆柱体容器中，按浸泡液重量比加入纤维素酶0.008%，混悬均匀，在温度45°C条件下放置10小时；d、将步骤c的酶化液体沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转，静置5分钟，虹吸出上清液(用作生产红花黄色素)，再将沉淀物中加入去离子水40kg，沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转，静置5分钟，虹吸出上清液，至使花粉存留在容器底部；e、将花粉沉淀物用抽滤滤出水分，保持完整滤饼，用去离子水洗涤至滤出液澄清无色，再用乙醇和乙醚梯度抽滤，倒出滤饼摊干，获得纯红花花粉。f、将所得的花粉通过常规的温差法做破壁处理，使花粉中的氨基酸释放出来，制成红花花粉破壁水溶液，在温度10°c下放置3-4天，析出大量悬浮和沉淀物，过滤，取得红花花粉水解液；g、按常法将颗粒活性炭处理成柱层析活性炭，装柱，8 X 140厘米厘米，再将732型阳离子交换树脂处理成[H+]型，装柱，10X 170厘米，活性炭柱和树脂柱串联使用，将破壁的红花花粉水解液，用氨水调PH4.0，然后依次通过炭柱和树脂柱，控制流速12毫升/分，当茚三酮反应阳性时，以每份500毫升收集，用纸层析检测(条件正丁醇冰醋酸水=4:2: 1)，合并相同流份，得1、I1、II1、IV组分，这部分主要含亮氨酸，再将水解液通过活性炭柱和树脂柱，pauly反应为阴性，树脂没有饱和，组氨酸没有出现，用蒸馏水以20毫升/分流速洗树脂柱至流出液PH6. 8，改用O.1M氨水洗脱，流速12毫升/分，当pauly反应为阳性时说明组氨酸被洗脱下来了，继续分部收集，至赖氨酸全被洗脱后，继续洗脱，可出现一段空白区，改用2M氨水洗脱，流速20毫升/分，洗至茚三酮反应阴性，精氨酸洗脱完成；h、将含有亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的洗脱液，采用纸层析、pauly反应、茚三酮反应和坂口反应检测，依次进行精制亮氨酸精制将pauly反应呈阴性部分减压浓缩，加活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，重结晶再溶于温度80°C热水中，再进行活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，滤液用95%乙醇洗涤、干燥，即可得到亮氨酸片状白色结晶；组氨酸精制将pauly反应呈阳性部分在温度70°C下浓缩除氨，反复3次，再用水稀释至5000mL，用盐酸调pH3. 0，加入活性炭脱色，浓缩至200mL，加入体积比2倍量75%乙醇，静置，有大量结晶析出，过滤，用浓度为75%和95%乙醇依次洗涤2次，将结晶用水溶解调pH2. 5，再加入活性炭脱色，有大量结晶析出，过滤，再用浓度为75%和95%乙醇洗涤，干燥，即可得到组氨酸盐酸盐纯品；赖氨酸精制pauly反应渐弱，茚三酮反应呈阳性的部分减压浓缩除氨，至小体积，加入水2000mL，用HCl调pH4. 0，加入活性炭脱色30分钟，过滤，结晶，用浓度为95%乙
醇洗涤，干燥，得赖氨酸盐酸盐纯品；精氨酸精制将坂口反应阳性洗脱液部分，合并减压除氨，用HCl调pH4. 0，减压浓缩至有结晶析出，结晶，用浓度为75%乙醇浸泡，抽干，再用浓度为95%乙醇脱水，抽干，得白色结晶精氨酸盐酸盐纯品。通过本发明所述的方法获得的亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸为白色晶体，无特殊气味。实施例4a、将红花的干燥花绒10kg，按重量比加入20倍量的去离子水浸泡，温度60°C，时间10小时，1400转转栏离心机离心，取得第一次浸泡液70kg ；b、将剩余的红花渣中按原干燥花绒重量比再次加入8倍量的去离子水浸泡，温度600C，时间10小时，1400转转栏离心机离心，取得第二次浸泡液，合并二次浸泡液150kg，过筛网350目，得到过滤浸泡液；C、将过滤浸泡液150kg置于直径高=I 3的半透明的圆柱体容器中，按浸泡液重量比加入纤维素酶O. 01%，混悬均匀，在温度60°C条件下放置12小时；d、将步骤c的酶化液体沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转，静置60分钟，虹吸出上清液(用作生产红花黄色素)，再将沉淀物中加入去离子水50kg，沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转，静置60分钟，虹吸出上清液，至使花粉存留在容器底部；e、将花粉沉淀物用抽滤滤出水分，保持完整滤饼，用去离子水洗涤至滤出液澄清无色，再用乙醇和乙醚梯度抽滤，倒出滤饼摊干，获得纯红花花粉；f、将所得的花粉通过常规的集成温差法、酶法和超声法做破壁处理，使花粉中的氨基酸释放出来，制成红花花粉破壁水溶液，在温度10°C下放置3-4天，析出大量悬浮和沉淀物，过滤，取得红花花粉水解液；g、按常法将颗粒活性炭处理成柱层析活性炭，装柱，8 X 140厘米厘米，再将732型阳离子交换树脂处理成[H+]型，装柱，10X 170厘米，活性炭柱和树脂柱串联使用，将破壁的红花花粉水解液，用氨水调PH4. 0，然后依次通过炭柱和树脂柱，控制流速12毫升/分，当茚三酮反应阳性时，以每份500毫升收集，用纸层析检测(条件正丁醇冰醋酸水=4:2: 1)，合并相同流份，得1、I1、II1、IV组分，这部分主要含亮氨酸，再将水解液通过活性炭柱和树脂柱，pauly反应为阴性，树脂没有饱和，组氨酸没有出现，用蒸馏水以20毫升/分流速洗树脂柱至流出液PH6. 8，改用0.1M氨水洗脱，流速12毫升/分，当pauly反应为阳性时说明组氨酸被洗脱下来了，继续分部收集，至赖氨酸全被洗脱后，继续洗脱，可出现一段空白区，改用2M氨水洗脱，流速20毫升/分，洗至茚三酮反应阴性，精氨酸洗脱完成；h、将含有亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的洗脱液，采用纸层析、pauly反应、茚三酮反应和坂口反应检测，依次进行精制亮氨酸精制将pauly反应呈阴性部分减压浓缩，加活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，重结晶再溶于温度80°C热水中，再进行活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，滤液用95%乙醇洗涤、干燥，即可得到亮氨酸片状白色结晶；组氨酸精制将pauly反应呈阳性部分在温度70°C下浓缩除氨，反复3次，再用水稀释至5000mL，用盐酸调pH3. 0，加入活性炭脱色，浓缩至200mL，加入体积比2倍量75%乙醇，静置，有大量结晶析出，过滤，用浓度为75%和95%乙醇依次洗涤2次，将结晶用水溶解调pH2. 5，再加入活性炭脱色，有大量结晶析出，过滤，再用浓度为75%和95%乙醇洗涤，干燥，即可得到组氨酸盐酸盐纯品；赖氨酸精制pauly反应渐弱，茚三酮反应呈阳性的部分减压浓缩除氨，至小体积，加入水2000mL，用HCl调pH4. 0，加入活性炭脱色30分钟，过滤，结晶，用浓度为95%乙
醇洗涤，干燥，得赖氨酸盐酸盐纯品；精氨酸精制将坂口反应阳性洗脱液部分，合并减压除氨，用HCl调pH4. 0，减压浓缩至有结晶析出，结晶，用浓度为75%乙醇浸泡，抽干，再用浓度为95%乙醇脱水，抽干，得白色结晶精氨酸盐酸盐纯品。通过本发明所述的方法获得的亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸为白色晶体，无特殊气味。通过本发明所述方法获得的红花花粉的氨基酸，经新疆维吾尔自治区食品药品检验所检测为亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸。具体操作步骤取实施例1-4任意制取的红花花粉氨基酸0. 5克(亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸)，加入2倍于红花花粉氨基酸(W/W)去离子水10毫升，充分溶解；检查氨基酸检查取反应液2毫升，滴加3%茚三酮乙醇试剂10滴，加热至微沸，液体应显现紫色或蓝色；红花花粉氨基酸分析测试依据《卫生部药品标准二部第六册》(生化药品第一分册)；
测试部门新疆维吾尔自治区食品药品检验所仪器德国SYKAM-4300氨基酸分析仪，柱后衍生，磺酸基强极性离子交换树脂，柱温50°C，反应器温度130°C，柠檬酸钠缓冲液梯度洗脱，流速O. 45毫升/分钟；试剂茚三酮试剂，流速O. 25毫升/分钟。结果检测出十八种氨基酸，氨基酸总含量为O. 29%，其中组氨酸含量最高为O. 0574%，含量在O. 02%以上的有亮氨酸、精氨酸和苯丙氨酸。见表表红花花粉破壁后氨基酸含量
权利要求
1.一种红花花粉氨基酸的制备方法，其特征在于按下列步骤进行a、将红花的干燥花绒，按重量比加入5-20倍量的去离子水浸泡，温度室温_60°C，时间 5-10小时，800-1400转转栏离心机离心，取得第一次浸泡液；b、将剩余的红花渣中按步骤a干燥花绒的重量比再次加入4-8倍量的去离子水浸泡， 温度室温_60°C，时间5-10小时，800-1400转转栏离心机离心，取得第二次浸泡液，合并二次浸泡液，过筛网250-350目，得到过滤浸泡液；C、将步骤b的浸泡液置于直径高=1: 1-3的透明或半透明的圆柱体容器中，加入纤维素酶，混悬均匀，在温度20-60°C条件下放置6-12小时得到酶化液体；d、将步骤c的酶化液体沿一个方向快速搅拌，然后立即反方向搅拌，使液体不再旋转， 静置10-60分钟，虹吸出上清液，再将沉淀物中按体积比加入去离子水10-50kg，重复搅拌、 静置和虹吸操作过程，至使花粉存留在容器底部；e、将步骤d花粉沉淀物用抽滤滤出水分，保持完整滤饼，再用去离子水洗涤至滤出液澄清无色，再用乙醇和乙醚梯度抽滤，倒出滤饼摊干，获得纯红花花粉；f、将步骤e的花粉通过超声、酶法或温差法，或三种方法集成做破壁处理，使花粉中的氨基酸释放出来，制成红花花粉破壁水溶液，在温度10°C下放置，时间3-4天，析出大量悬浮和沉淀物，过滤，取得红花花粉水解液；g、将步骤f红花花粉水解液，用氨水调PH4.0，然后依次通过常规的活性炭柱和732型阳离子交换树脂柱，控制流速12毫升/分，在经过纸层析、pauly反应、茚三酮反应和坂口反应检测，得到含有亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的洗脱液；h、将步骤g含有亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸洗脱液按常规方法采用纸层析、 pauly反应、茚三酮反应和坂口反应检测，依次进行精制亮氨酸精制=Pauly反应呈阴性部分减压浓缩，加活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，重结晶再溶于温度80°C热水中，再进行活性炭脱色，放置冰箱静置过夜，析出结晶，过滤，滤液用浓度为95%乙醇洗涤、干燥，即可得到亮氨酸片状白色结晶；组氨酸精制=Pauly反应呈阳性部分在温度70°C下浓缩除氨，反复3次，再用水稀释，用盐酸调PH3.0，加入活性炭脱色，浓缩，加入体积比2倍量浓度为75%乙醇，静置，有大量结晶析出，过滤，用浓度为75%和95%乙醇依次洗涤2次，将结晶用水溶解调pH2. 5，再加入活性炭脱色，有大量结晶析出，过滤，再用浓度为75 %和95 %乙醇洗涤，干燥，即可得到组氨酸盐酸盐纯品；赖氨酸精制=Pauly反应渐弱，茚三酮反应呈阳性的部分减压浓缩除氨，至小体积，加水，用HCl调pH4. 0，加入活性炭脱色30分钟，过滤，结晶，用浓度为95%乙醇洗涤，干燥，得赖氨酸盐酸盐纯品；精氨酸精制将坂口反应阳性洗脱液部分，合并减压除氨，用HCl调pH4. 0，减压浓缩至有结晶析出，结晶，用浓度为75%乙醇浸泡，抽干，再用浓度为95%乙醇脱水，抽干，得白色结晶精氨酸盐酸盐纯品。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤c纤维素酶的加入量按浸泡液重量比加入纤维素酶O. 005-0. 01% ο
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤g将活性炭柱与阳离子交换树脂串联使用。
全文摘要
本发明涉及一种红花花粉氨基酸的制备方法，该方法是将红花的干燥花绒，加水浸泡，离心，得到浸泡液；再将剩余的红花渣加水浸泡，离心，得到浸泡液，合并二次浸泡液，过筛，加入纤维素酶，混悬均匀，放置，然后快速搅拌，静置，将沉淀物用抽滤，水洗，抽滤，获得纯红花花粉，再将花粉进行破壁处理，再通过活性炭柱与阳离子交换树脂柱串联使用，即可得到亮氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸四种氨基酸纯品。该方法完全采用人工操作，工艺简单，成本低，通过该方法获得的红花花粉氨基酸为白色晶体，无特殊气味，品种属完全纯正，与传统的蜜蜂采制的红花花粉相比，从而提高了红花的经济附加值，增加药农收入。
文档编号C07C229/26GK103030569SQ20111029103
公开日2013年4月10日 申请日期2011年9月29日 优先权日2011年9月29日
发明者顾政一, 贺金华, 刘砥威, 陈孝娟, 刘庆华 申请人:新疆维吾尔自治区药物研究所