照但不给药；##p < 0.0 lGa3+-HA及光照处理的细胞 vs. HA及光照处理的细胞）。
【具体实施方式】
[0033] 下面通过具体实施例对本发明所述的技术方案给予进一步详细的说明，但有必要 指出以下实施例只用于对
【发明内容】
的描述，并不构成对本发明保护范围的限制。
[0034] 在本发明的实施例中，所用的光敏剂为竹红菌甲素 （hypocrellin A，HA)和竹红菌 乙素 （Hypocrellin B，简称HB)。HA为一种天然的光敏剂，已被用于临床治疗皮肤病、眼病 及妇科疾病等，研宄表明HA还具有很好的抗肿瘤和抗病毒活性。实施例中详细记载了水溶 性镓-竹红菌甲素链状高分子配合物的表征以及性能，实施例中记载的以下描述是为了阐 明本发明，并不以任何方式限制本发明。水溶性镓-竹红菌素链状高分子配合物同样适用 于竹红菌乙素，且具有相似的结果。
[0035] 实施例1
[0036] HA乙醇溶液（ImM) IOmL及硝酸镓乙醇溶液（ImM) IOmL经过充分超声波分散处理， 使其基本以单体分子状态存在。取50mL三颈烧瓶，在IOmL乙醇体系中，依次加入上述两种 乙醇溶液均匀混合，体系除水除氧后，暗处（无水无氧氛围中）搅拌24h，40°C旋转蒸发除去 体系中的乙醇，产物放置于真空干燥箱中（40°C )过夜，获得镓-竹红菌甲素链状高分子配 合物，整个反应均在室温下进行，全程避光。
[0037] 所述的镓-竹红菌甲素链状高分子配合物的表征：本实施例所制备的镓-竹红菌 甲素链状高分子配合物的结构依据摩尔比法确定（紫外-可见光谱及荧光光谱两种手段）， 镓-竹红菌甲素链状高分子配合物的光稳定性依据470nm LED光照后，样品470nm左右最高 紫外-可见光谱吸收峰下降程度比较。使用MTT法检测其化疗-光疗协同抗肿瘤活性（以 硝酸镓及竹红菌甲素作为对照）。
[0038] (1)摩尔比法确定镓-竹红菌甲素链状高分子配合物的配位比
[0039] 竹红菌甲素在水中有三个吸收峰，分别在586,457和468nm处。图IA是把Ga3+加 入到HA水溶液中后HA的紫外-可见吸收光谱变化图。从图中可以看出，这三个吸收峰红 移，并且在600nm左右的吸收峰强度增大，说明随着镓离子Ga3+的加入，HA的水溶性增大并 且在水中的稳定性有所提高。为了确定络合物的组成，将586nm处吸收峰强度的改变对Ga3+ 与HA摩尔比作图，得到图IB。从图中可以看出，此图在Ga3+与HA摩尔比1. 0处有拐点，说 明Ga3+与HA的配位比是1 : 1，即，一分子的竹红菌甲素能够与1分子的Ga3+形成配合物。
[0040] 运用与上述紫外-可见吸收光谱相似的方法，进一步用荧光发射光谱来确定Ga3+ 与HA的配位比。当用480nm的光激发HA水溶液时，HA在608nm处有一个荧光发射峰，图 IC记录了此荧光峰随着镓离子的加入变化的曲线，从图中可以看出随着镓离子的加入，HA 荧光峰强度逐渐降低，以此对Ga3+与HA摩尔比作图，得到图1D。从图中可以看出，当摩尔 比小于I. 0时，荧光峰强度随着Ga3+的增多下降得较快；当摩尔比大于I. 0时，荧光峰强度 基本不变，进一步确定了 Ga3+与HA的配位比是1 : 1，1分子的竹红菌甲素能够与1分子的 镓离子形成稳定的配合物。
[0041] (2)镓-竹红菌甲素链状高分子配合物的分子结构
[0042] 通过分析样品的红外图谱可以进一步确定所得到的镓-竹红菌甲素链状高分子 配合物的结构。图2A是HA和镓-竹红菌甲素链状高分子配合物的FTIR图谱。从图中可 以看出，竹红菌甲素在3479CHT1处显示出O-H基团的伸缩振动峰，而当竹红菌甲素与镓离子 生成配合物（Ga3+-HA)后此峰位移到3446CHT1处。而竹红菌甲素结构中醌羰基伸缩振动引 起的1608CHT1附近的红外峰也由于与镓离子的配位作用而位移到1508CHT1附近。综合以上 分析可以确定，竹红菌甲素能够与金属镓离子Ga3+形成I : 1的配合物，且该络合物的结构 如下式所示，聚合物结构经MALDI-T0F验证。
[0043]
[0044] 上述结构使用Maldi-TOF验证如图3所示，图中可见明显的聚合物特征峰，其中 786. 89 的峰为[Ga-HA] (0!1)3即 η = 1 的单聚体峰；1362. 75 的峰为[Ga-HA] 2(0Η)2(Ν03)4即 η = 2的二聚体峰；1994. 79的峰为[Ga-HA]3(OH)5NO3即η = 3的三聚体峰；其余的峰则为 部分配位峰，如965. 60的峰为[Ga-HA-Ga] (OH)2 (NO3)4的链状配合物片段峰。
[0045] (3)竹红菌甲素及镓-竹红菌甲素链状高分子配合物光稳定性比较
[0046] 大多数光敏剂在光动力过程中自身会发生降解，在紫外-可见吸收光谱或荧光发 射光谱上表现为特征峰强度降低，该过程被称为光漂白过程。如果光敏剂的光漂白强度较 大，则在光动力治疗过程中靶体组织就不能保持足够的药物浓度，那么光动力治疗的效果 就会大大降低。因此，被用于光动力治疗的光敏剂不仅需要有较强的杀伤效应，而且需要具 有较慢的光漂白速率，从而能够保证靶体组织在整个治疗过程中有效的杀伤浓度。图4为 HA和镓-竹红菌甲素链状高分子配合物样品在相同光照条件下紫外吸收峰强度随光照时 间的变化曲线。从图中可以看出，HA和镓-竹红菌甲素链状高分子配合物在光照下吸收峰 强度均有所减少，且配合物和竹红菌甲素母体光漂白百分率相近，说明HA与Ga3+形成络合 物之后仍然保留了母体HA优良的光稳定性。
[0047] (4)硝酸镓、竹红菌甲素及镓-竹红菌甲素链状高分子配合物杀灭肿瘤细胞能力 比较
[0048] 图5是米用MTT法检测不同药物对肺癌A549细胞存活率的影响。从图中可以看 出，Ga (NO) 3可以导致细胞死亡，同时在光照条件下HA和镓-竹红菌甲素链状高分子配合物 也能明显地抑制肿瘤细胞的生存。与单独的HA相比较，镓-竹红菌甲素链状高分子配合物 具有更好的肿瘤细胞抑制作用，这是由于镓-竹红菌甲素链状高分子配合物兼具HA的光疗 特性和Ga3+的化疗特性。
[0049] 实施例2,与实施例1基本相同，但改变反应条件和时间，可制得η = 1~10的 镓-竹红菌甲素链状高分子配合物。
[0050] 实施例3,与实施例1基本相同，但所述的竹红菌甲素改用竹红菌乙素。
【主权项】
1. 一种镓-竹红菌素链状高分子配合物，是由Ga3+与竹红菌素按摩尔比I: 1形成的 链状高分子配合物，具有下式所示结构X为Cr或NO3_; n = 1~10〇2. -种镓-竹红菌素链状高分子配合物的制备方法，其特征在于，以乙醇为溶剂，按照 I: 1摩尔比混合竹红菌素及硝酸镓或三氯化镓的乙醇溶液，所述竹红菌素乙醇溶液和硝 酸镓或三氯化镓乙醇溶液均经过充分超声波分散处理；在无水无氧氛围中，将上述混合液 搅拌24h以上，旋转蒸发除去乙醇，产物真空干燥，制得所述的镓-竹红菌甲素链状高分子 配合物，整个反应均在室温下进行，全程避光。3. 根据权利要求2所述的镓-竹红菌素链状高分子配合物的制备方法，其特征在于，所 述的竹红菌素为竹红菌甲素及竹红菌乙素。4. 权利要求1所述的镓-竹红菌素链状高分子配合物在制备光疗-化疗协同治疗肿瘤 药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种具有化疗-光疗协同治疗潜能的镓-竹红菌素配合物及其制备方法，及所述配合物在光动力疗法领域中的应用。所述的镓-竹红菌素配合物是由Ga3+与竹红菌素按摩尔比1∶1形成的链状高分子配合物，不仅可以有效改善竹红菌素的水溶性，而且在保留竹红菌素光疗抗肿瘤活性的同时，具有镓的化疗抗肿瘤活性，获得光疗与化疗的协同作用效果。
【IPC分类】A61P35/00, A61K41/00, C07F5/00
【公开号】CN104961755
【申请号】CN201510295839
【发明人】周林, 周家宏, 魏少华, 解文俐, 肖梦思, 袁秀雪
【申请人】南京师范大学
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年6月2日