使发酵液中含菌量多I X IOltl个/mL ;灌菌液为发酵液8000r/min离心6min后，采用等 体积0. 9%的生理盐水重悬菌体。
[0035] 其中所用LB培养基配制方法为，以配制IL培养基为例：蛋白胨10g，酵母粉5g， NaCllOg，琼脂 18-20g，定容至 lOOOmL，pH 值自然，121°C灭菌 20min。
[0036] 实施例3、温室促生效果试验
[0037] 3. 1促生有机肥在番茄（第一季、第二季）上的应用效果
[0038] 两季番茄促生试验均在江苏中宜生物肥料工程中心温室里进行，供试作物：番茄 品种为合作906,番茄种子用60°C温水浸泡，搅拌至室温，取沉淀种子，5%次氯酸钠消毒处 理3min，无菌水清洗3-4次后，于30°C培养箱中遮光催芽至露白后埋入基质中，培育出适 时、量足、苗壮、苗齐的番茄苗。共设三个处理：1)添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y40灌菌菌悬液 (Y40) ;2)添加腐熟鸡粪和磷酸钙（CKl) ;3)添加腐熟鸡粪和过磷酸钙（CK2)。每个处理8 盆，每盆装土 2kg，肥料添加量为每盆30g，磷酸钙和过磷酸钙的添加量为3g/盆，Y40灌菌 菌悬液的接种量以降低成本为基准，按照3% (体积/质量）进行。
[0039] 。肥料与土拌匀作为基肥，40天测定各处理株高、茎粗、SPAD值、地上部鲜重、地 下部鲜重、地上部干重、地下部干重，并稀释涂布计数各处理中功能菌Y40在根际的定殖数 量。
[0040] 第一季番茄促生效果如图2、生物量情况如表1所示，移苗40天后，添加腐熟鸡 粪、磷酸钙和Y40发酵液（Y40)处理与添加腐熟鸡粪和磷酸钙（CKl)在各个指标中除茎粗 外，其余均达到了显著性差异（P〈〇. 05)。与CKl相比，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y40发酵液 (Y40)的处理在株高、茎粗、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重和地下部干重方面，分别 增加了 10%、〇· 87%、10. 60%、1. 09%、9· 24%和 13. 11%。
[0041] 第二季番茄促生效果如图3、生物量情况如表2所示，移苗40天后，添加腐熟鸡粪、 磷酸钙和Y40发酵液（Y40)处理的番茄生长过程中各项指标除茎粗外，其余指标均显著高 于添加腐熟鸡粪和磷酸钙（CKl)。与CKl相比，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y40发酵液（Y40) 的处理在株高、茎粗、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重及地下部干重方面，分别增加了 13. 71 %、12. 79%、15. 19%、41· 03%、13. 40%和 25. 92%。
[0042] 综上两季盆栽结果表明，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y40发酵液（Y40)处理与添加腐 熟鸡粪和磷酸钙（CKl)处理的各项指标之间都达到了显著性差异。与添加腐熟鸡粪和过磷 酸钙（CK2)处理的番茄株高、茎粗、地上部鲜重及地下部干重之间差异不显著，说明Y40菌 株很好的发挥了解磷促生功能。
[0043] 表1、第一季番茄促生盆栽试验生物量情况
[0044]
[0045] 表2、第二季番茄促生盆栽试验生物量情况
[0046]
[0047] 3. 2促生有机肥在茄子（第一、二季）上的应用效果
[0048] 茄子品种为苏琦茄，两季茄子盆栽采用上述番茄同样的育苗方式和处理。两季茄 子生物量结果如表3和表4所不，第一季前子促生效果如图4、生物量情况如表3所不，移 苗后40天，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y40发酵液（Y40)与添加腐熟鸡粪和磷酸钙（CKl)在 地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重和地下部干重方面均达到了显著性差异（P〈〇. 05)。 与CKl相比，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y40发酵液（Y40)处理的茄子在株高、茎粗、地上部 鲜重、地下部鲜重、地上部干重和地下部干重方面，分别增加了 19. 33%、10. 88%、31. 09%、 177.18%、33.70%和 95.70%。
[0049] 第二季茄子促生效果如图5、生物量情况如表4所示，移苗后40天，添加腐熟鸡粪、 磷酸钙和Y40发酵液（Y40)处理的茄子生长过程中的各项指标均与添加腐熟鸡粪和磷酸 钙（CKl)处理之间达到了显著性差异（p〈0. 05)。同时，株高和茎粗与添加腐熟鸡粪和过磷 酸钙（CK2)之间差异不显著。与CKl相比，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y40发酵液（Y40)处理 的茄子在株高、茎粗、地上部鲜重、地下部鲜重、地上部干重和地下部干重方面，分别增加了 15. 71%、34· 41%、1· 40%、2· 51%、9· 72%和 23. 77%。
[0050] 综上两季盆栽结果表明，添加腐熟鸡粪、磷酸钙和Y40发酵液（Y40)与添加腐熟鸡 粪和过磷酸钙（CK2)处理的茄子在株高、茎粗和地下部鲜重达到了显著性差异，与添加腐 熟鸡粪和磷酸钙（CKl)处理的各项指标之间都达到了显著性差异。说明Y40菌株很好的发 挥了解磷促生功能。
[0051] 表3、第一季前子促生盆栽试验生物量情况
[0052]
[0053] 表4、第二季茄子促生盆栽试验生物量情况
[0054]
[0055] 3. 3解磷菌Y40在作物根际的定殖情况
[0056] 根际定殖功能菌株Y40采用固体磷酸钙盐无机磷培养基和卵黄培养基计数（具体 实施方案中的配方），功能菌Y40菌落数以每克根干重计算。
[0057] 由图6可以看出：解磷菌Y40在两季番茄和茄子上的定殖都达到了相当水平，解磷 菌Y40在第一季和第二季番茄上的定殖能力分别达到4. 5 X 107CFU/g和5. 4 X 107CFU/g，在 第一季和第二季茄子上的定殖能力分别达到4. 5X 107CFU/g和4. 3X 107CFU/g。由根际定 殖情况大概可以得出解磷菌Y40在番茄和茄子根际上有很强的定殖能力。
【主权项】
1. 一株乙酸1?不动杆菌（Acinetobacter sp. )Y40,保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCC NO. 10241。2. 权利要求1所述的乙酸钙不动杆菌Y40在促溶解土壤中难溶性磷和/或进植物生长 中的应用。3. 权利要求1所述的乙酸钙不动杆菌Y40在制备促溶解土壤中难溶性磷和/或进植物 生长的生物肥料中的应用。4. 由权利要求1所述的不动杆菌属细菌Y40制备的解磷促生生物肥料。5. 根据权利要求4所述的解磷促生生物肥料，其特征在于主要通过以下方法制备：将 保藏号为CGMCC NO. 10241的乙酸钙不动杆菌Y40接种到LB培养液中，进行液体发酵生产， 发酵生产的条件为：pH值自然，发酵温度范围30~35°C，搅拌速度为170~200转/分钟， 发酵时间为40h，使发酵液中含菌量多IX IOltl个/mL。6. 根据权利要求5所述的解磷促生生物肥料，其特征在于得到发酵液后将其按照常规 方法制备为其他的生物肥料常用剂型。7. 根据权利要求6所述的解磷促生生物肥料，其特征在于得到发酵液后将其按照常规 方法制备为制备为粉剂、颗粒剂或悬浮剂。8. 权利要求5所述的解磷促生生物肥料在促溶解土壤中难溶性磷和/或进植物生长中 的应用。9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于将权利要求5所述的发酵液8000~ lOOOOr/min离心5~IOmin后，采用等体积0. 9% (g/100ml)的生理盐水重悬菌体，然后直 接加至植物根际。
【专利摘要】本发明提供了一株不动杆菌属解磷促生细菌Y40及其应用，该菌株分离于马铃薯根际，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年12月25日，保藏编号为CGMCC NO.10241。摇瓶实验结果表明，菌株能够有效降低溶液pH并溶解溶液中难溶性磷；灌菌盆栽试验结果表明，该菌株能够有效促进番茄和茄子植株的生长，同时菌株能够在植株根际大量定殖，存活于根际发挥促生作用。CGMCC NO.1024120141225
【IPC分类】C12R1/01, C12N1/20, C05G3/00
【公开号】CN104974962
【申请号】CN201510399215
【发明人】沈其荣, 李 荣, 赵买琼, 张瑞福
【申请人】南京农业大学
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2015年7月8日