与高血压和/或心血管疾病发病风险相关的多个单核苷酸多态性位点及相关应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及与高血压和/或心血管疾病发病风险相关的多个单核苷酸多态性位 点及相关应用，具体涉及检测多个单核苷酸多态性位点的试剂在制备用于预测高血压和/ 或心血管疾病发病风险的检测制剂或检测装置中的应用，还涉及一种用于预测高血压和/ 或心血管疾病发病风险的检测装置，通过影响亚洲人群血压变异相关的22个单核苷酸多 态性位点检测预测高血压和心血管疾病发病风险。
【背景技术】
[0002] 心血管疾病是全球人类健康的首要疾病负担。我国心血管病的发病率和死亡率呈 快速上升趋势。据估计，我国心血管疾病现患病人数至少2. 3亿，每年约350万人死于心血 管病。高血压是最常见的心血管疾病之一，也是心血管病的主要危险因素。2013年中国心 血管病报告显示，约70%的脑卒中和50%的心肌梗死的发生与血压升高有关，至少一半的 心血管病死亡与高血压有关。根据历次全国性大规模高血压患病率调查，从上世纪五六十 年代到2007-2009年，高血压患病率已由5. 1%上升到26. 6%，上升趋势明显，已成为我国 重要疾病负担。因此，高血压的防治已经成为预防心血管疾病、保障国民健康的重要需求。
[0003] 高血压和心血管疾病是复杂疾病，由多个微效基因与环境因素长期相互作用所 致。鉴定出与高血压和/或血压升高相关的易感基因和/或致病基因，在人群中筛选增加疾 病风险的易感基因确定易感个体，将有助于高血压和心血管疾病事件（冠心病和脑卒中） 的发病风险预测、新药开发、诊断和个体化治疗。
[0004] 遗传风险评分（geneticriskscore,GRS)是基于遗传易感基因建立个体患病风 险的预测评分模型，在个体水平利用个体遗传风险评分结合传统危险因素进行模型预测是 识别高血压和心血管疾病发病高危人群的有效方法。早期识别高危人群，采取针对性的生 活方式干预，能够有效地减少高血压及心血管疾病的发生，遏制医疗费用增长、延长国民期 望寿命。
【发明内容】
[0005] 本发明的一个目的在于提供一种通过多个单核苷酸多态性检测预测高血压和/ 或心血管疾病发病风险的方法。
[0006] 本发明的另一目的在于提供检测多个单核苷酸多态性位点的试剂在制备用于预 测高血压和/或心血管疾病发病风险的检测制剂或检测装置中的应用。
[0007] 本发明的另一目的在于提供一种用于预测高血压和/或心血管疾病发病风险的 检测装置。
[0008] 本发明中，通过整合影响亚洲人群血压变异相关的多个单核苷酸多态性位点，在 大量样本的研究对象中进行基因分型，并对研究对象进行多年的随访研究，计算遗传风险 评分（GRS)。在传统危险因素的模型中，加入遗传风险评分，提高对高血压和心血管事件风 险的预测能力。
[0009] 根据本发明的具体实施方案，所述亚洲人群血压变异的相关的多个单核苷酸 多态性位点包括以下22个单核苷酸多态性位点：CASZl区域rs880315、M0V10区域的 rsl0745332和rsl7030613、FIGN区域rsl6849225、SLC4A7区域rs820430、ULK4区域 rs9815354、CACNAlD区域rs9810888、FGF5区域rsl902859、ENPEP区域rs6825911、⑶CY1A3 区域rsl3143871、NPR3区域rsl 173766、HFE区域rsl799945、HLA-B区域rs9266359、 CYP21A2区域rs2021783、CYP17A1区域rs4409766、S0X6区域rs4757391、ATP2B1区域 rsl7249754、ALDH2区域rsl 1066280、TBX3-TBX5区域rsl991391、TBX3区域rs35444、 MED13L区域rsll067763和JAGl区域rsl887320。通过检测这些单核苷酸多态性位点，可 以预测高血压和/或心血管疾病发病风险。
[0010] 从而，一方面，本发明提供了检测多个单核苷酸多态性位点的试剂在制备用于预 测高血压和/或心血管疾病发病风险的检测制剂或检测装置中的应用，其中，所述多个单 核苷酸多态性位点包括以下22个单核苷酸多态性位点：
[0011] CASZl区域rs880315、M0V10区域的rsl0745332和rsl7030613、FIGN区域 rsl6849225、SLC4A7区域rs820430、ULK4区域rs9815354、CACNAlD区域rs9810888、FGF5区 域rsl902859、ENPEP区域rs6825911、⑶CY1A3区域rsl3143871、NPR3区域rsll73766、HFE 区域rsl799945、HLA-B区域rs9266359、CYP21A2区域rs2021783、CYP17Al区域rs4409766、 S0X6区域rs4757391、ATP2B1区域rsl7249754、ALDH2区域rsll066280、TBX3-TBX5区域 rsl991391、TBX3区域rs35444、MED13L区域rsll067763和JAGl区域rsl887320。
[0012] 在本发明的大量实验结果基础上，本发明的进一步研究发现，这些SNPs的危险 等位基因分别是：rs880315多态性位点为C;rsl7030613多态性位点为C;rsl0745332多 态性位点为A;rsl6849225多态性位点为C;rs820430多态性位点为A;rs9815354多态 性位点为A;rs9810888多态性位点为G;rsl902859多态性位点为C;rs6825911多态性 位点为C;rsl3143871多态性位点为T;rsll73766多态性位点为C;rsl799945多态性位 点为G;rs9266359多态性位点为C;rs2021783多态性位点为C;rs4409766多态性位点 为T;rs4757391多态性位点为C;rsl7249754多态性位点为G;sll066280多态性位点 为T;rsl991391多态性位点为G;rs35444多态性位点为A;rsll067763多态性位点为A; rsl887320多态性位点为A。
[0013] 可用本领域中任何的可行技术在DNA水平、RNA水平检测本发明所述的多个单 核苷酸多态性位点。例如：可以采用直接测序的方法，通过DNA直接测序可以直接揭示对 照基因和携带突变基因之间的序列差异，具体可以是传统的使用商业测序试剂盒或自动 测序仪对DNA直接进行测序，或是近年来发展的焦磷酸测序（Pyrosequencing)、微测序 (SNaPshot)等。也可以采用基于杂交的方法，具体包括Taqman探针法，DNA芯片法等。还 可以采用基于引物延伸的方法，如基质辅助激光解析离子飞行时间质谱（MLDI-Tof-MS)。 还可以采用基于构象的方法，具体例如限制性片段长度多态性（RFLP)分析、单链构象 多态性（single-strandconformationalpolymorphism，SSCP)分析、变性梯度凝胶电 泳（denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE)分析、变性高效液相色谱技术 (denaturinghighperformanceliquidchromatography，dHPLC)等分析技术。还可以 采用高分辨率溶解曲线分析技术（HRM)。在具体实施时，本领域的技术人员可以根据实 际情况选择上述的任一种技术体外检测本发明所述多个单核苷酸多态性位点，也可以采 用多种技术的组合来体外检测所述多个单核苷酸多态性位点。本发明中所述的检测多个 单核苷酸多态性位点的试剂可以是这些任何可行的检测所述多个单核苷酸多态性位点的 技术中所用到的试剂材料和/或仪器设备等。在本发明的一个【具体实施方式】中，应用的 是iPLEXSequenomMassARRAY分型系统对所述多个单核苷酸多态性位点进行检测，其中 将PCR扩增后的延伸产物用MassARRAYNanodispenserRSlOOO点样仪（Sequenom)移至 SpectroCHIP(Sequenom)芯片上，使用MALDI-TOP(matrix-assistedlaserdesorption/ ionization-timeoffligh，基质辅助飞行时间质谱）分析，并使用TYPER4.0软件 (Sequnom)分型并输出结果。
[0014] 根据本发明的具体实施方案，所述的待测个体可以为亚洲人群，优选为中国汉族 人群。具体检测时，待测样品可来自待测个体的血液、尿、唾液、胃液、头发或活组织检查。
[0015] 在本发明的具体实施方案中，本发明在中国汉族人群中选取26262例正常人群研 究对象，平均随访观察6. 9年，采集空腹血并收集性别、年龄、血压水平、血脂水平、身高、体 重、吸烟、饮酒和疾病史等相关信息。应用iPLEX Sequenom MassARRAY分型系统，对22个 血压相关单核苷酸多态性（SNP)位点进行基因分型实验（CASZ1区域rs880315、MOVlO区 域的rsl0745332和rsl7030613、FIGN区域rsl6849225、SLC4A7区域rs820430、ULK4区域 rs9815354、CACNAlD区域rs9810888、FGF5区域rsl902859、ENPEP区域rs6825911、⑶CY1A3 区域rsl3143871、NPR3区域rsl 173766、HFE区域rsl799945、HLA-B区域rs9266359、 CYP21A2区域rs2021783、CYP17A1区域rs4409766、S0X6区域rs4757391、ATP2B1区域 rsl7249754、ALDH2区域rsl 1066280、TBX3-TBX5区域rsl991391、TBX3区域rs35444、 MED13L区域rsll067763和JAGl区域rsl887320)。使用logistic和cox回归分析评估每 个SNP位点与年平均血压增加、高血压发病以及心血管病事件发生（冠心病和脑卒中）的 关系，计算危险等位基因的效应值（(6)、相对危险度（Odds ratio, 0R)或风险比（Hazard ratio, HR)。综合每个个体携带22个SNP位点的危险等位基因情况，对每个研究对象进行 遗传风险评分，评分方法是利用前期血压全基因组研究获得的风险等位基因效应值