粉。
[0019] 培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，黄豆粉3-5g/L，酵母浸 膏 6-9g/L，葡萄糖 18-22 g/L，麦芽浸膏 25-30 g，硫酸铵 0? 5-0. 7g/L，硫酸镁 0? 3-0. 4g/L， 磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L，碳酸钙0. 7 g/L，硫酸亚铁0. 18 g/L，硫酸锰0. 025 g/L;pH 6. 3 湿黑霉菌细胞制备过程如下：黑霉菌ATCC 96178经斜面、摇瓶培养，得到种子液。 5L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至26-27°C，将黑 霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11 %，通气比为0. 9-1V/ (V分钟)，26-27°C培养 35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿黑霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0020] 生物催化转化：5L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 3,加入 底物2, 2-二氯苯乙酮，使其浓度为90g/L，玉米浆（以干物质计）含量为20g/L，吐温80 13-14g/L，木糖36g/L、异丙醇10%V/V (体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至29°C时， 加入湿黑霉菌细胞使其浓度为71g/L，通气比为0. 14V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应 时间为65小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物 (S) -2, 2-二氯-1-苯乙醇，反应转化率98%，产品收率96%，对映体过量率99%。
[0021] 实施例3 种子培养基成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，酵母提取物10 g/L，葡 萄糖20 g/L，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L;配制固体 培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0022] 培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35_45g/L，黄豆粉3_5g/L，酵母浸 膏6-9g/L，葡萄糖18-22 g/L，麦芽浸膏25-30 g，硫酸铵0? 5-0. 7g/L，硫酸镁0? 3-0. 4g/L， 磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L，碳酸钙0. 7 g/L，硫酸亚铁0. 18 g/L，硫酸锰0. 025 g/L;pH 6. 3 湿黑霉菌细胞制备过程如下：黑霉菌ATCC 96178经斜面、摇瓶培养，得到种子液。10L 发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至26-27°C，将黑霉 菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11 %，通气比为〇. 9-1V/ (V分钟)，26-27 °C培养 35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿黑霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0023] 生物催化转化：10L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 3,加入 底物2, 2-二氯苯乙酮，使其浓度为84g/L，玉米浆（以干物质计）含量为19g/L，吐温80 14g/L，木糖34g/L、异丙醇9. 5%V/V (体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至28°C时， 加入湿黑霉菌细胞使其浓度为72g/L，通气比为0. 142VAV分钟)，进行生物催化反应，反应 时间为64小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物 (S) -2, 2-二氯-1-苯乙醇，反应转化率98. 5%，产品收率96. 5%，对映体过量率99%。
[0024] 实施例4 种子培养基成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，酵母提取物10 g/L，葡 萄糖20 g/L，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L;配制固体 培养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0025] 培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，黄豆粉3-5g/L，酵母浸 膏 6-9g/L，葡萄糖 18-22 g/L，麦芽浸膏 25-30 g，硫酸铵 0? 5-0. 7g/L，硫酸镁 0? 3-0. 4g/L， 磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L，碳酸钙0. 7 g/L，硫酸亚铁0. 18 g/L，硫酸锰0. 025 g/L;pH 6. 3 湿黑霉菌细胞制备过程如下：黑霉菌ATCC 96178经斜面、摇瓶培养，得到种子液。10L发酵 罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至26-27°C，将黑霉菌种 子液接种至发酵罐，接种比例为1〇-11%，通气比为〇.9-1￥/(￥分钟），26-27°(：培养35-40 小时，用过滤式离心机离心得到湿黑霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0026] 生物催化转化：20L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 3,加入 底物2, 2-二氯苯乙酮，使其浓度为86g/L，玉米浆（以干物质计）含量为20g/L，吐温80 14g/L，木糖35g/L、异丙醇9%V/V (体积浓度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至529°C时， 加入湿黑霉菌细胞使其浓度为72g/L，通气比为0. 15V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应 时间为64小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物 (S) -2, 2-二氯-1-苯乙醇，反应转化率99%，产品收率96. 5%，对映体过量率99%。
【主权项】
1. 一种黑霉菌细胞生物催化制备（S)-2, 2-二氯-1-苯乙醇的方法，其特征在于反应罐 中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 3,加入底物2, 2-二氯苯乙酮，使底物2, 2-二氯苯乙酮添加 量为80-90 g/L，玉米浆含量为19-20g/L，吐温80 13-14g/L，木糖30-36g/L、异丙醇7-9%V/ V、异丙醇8-10%V/V，121°C高压灭菌30分钟；冷却至28-29°C时，加入湿黑霉菌细胞使其浓 度为71-73g/L，通气比为0. 14-0. 15V/ (V分钟），进行生物催化反应，反应时间为63-65小 时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-2, 2-二 氯-1-苯乙醇，反应转化率98-99%，产品收率96-97%，对映体过量率98. 5-99%。2. 权利要求1所述的方法，其特征在于湿黑霉菌细胞制备过程如下：黑霉菌ATCC 96178,经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟， 冷却至26-27°(：，将黑霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11%，通气比为0.9-1￥八￥ 分钟），26-27°C培养35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿黑霉菌细胞，用作生物催化反 应催化剂；发酵罐中培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，黄豆粉3-5g/ L，酵母浸膏6-9g/L，葡萄糖18-22 g/L，麦芽浸膏25-30 g，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁 0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾 I. 8-2. 3g/L，碳酸钙 0. 7 g/L，硫酸亚铁 0. 18 g/L，硫酸锰 0. 025 g/L;pH 6. 3〇
【专利摘要】一种黑霉菌细胞生物催化制备(S)-2,2-二氯-1-苯乙醇的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，用黑霉菌细胞进行生物催化反应，产品收率高，对映体过量率高，解决了现有方法生产的困难。
【IPC分类】C12P7/22
【公开号】CN105063103
【申请号】CN201510560652
【发明人】候培磊, 张媛媛, 刘均洪
【申请人】青岛科技大学
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年9月7日