0MG ~1200MG，一次或分为多次给药。
[0133] 〔MSA的预防或治疗药物的筛选方法〕
[0134] 本发明所涉及的MSA的预防或治疗药物的筛选方法，是筛选多系统萎缩症的预防 或治疗药剂的方法，包括步骤：将候选化合物与细胞接触；选择提高细胞内的辅酶QlO量的 候选化合物。
[0135] 筛选方法中所使用的细胞只要是生物合成CoQlO的细胞，没有特别限定，但是例 如可以举出淋巴母细胞样细胞等。
[0136] 对于候选化合物也没有特别限定，可以是低分子化合物、高分子化合物、核酸、 蛋白质等。本领域技术人员可以适宜决定包括将这些候选化合物和细胞接触而温育 (incubate)时的温度或时间的实验条件。可以考虑例如使参与CoQlO的生物合成的物质的 功能增强的候选化合物、或者可以考虑抑制使参与CoQlO的生物合成的物质的功能低下的 物质的功能的候选化合物等。
[0137] 关于是否提高细胞内的CoQlO量，本领域技术人员也可以通过公知的方法而进 行。可以通过测定CoQlO活性而评价量。
[0138] 〔编码CoQ2蛋白的核酸〕
[0139] V343A突变是日本人特有的，通过研究，进一步阐明发病机理，认为能够有助于 MSA的治疗或预防方法的研究开发。包含V343A突变的核酸对于前述研究是有用的。本发 明还包括：包含这种核酸的重组载体、包含该载体的转化子等。
[0140] 在本说明书中所引用的所有的专利文献以及非专利文献所公开的内容，通过参照 而整体加入于本说明书。
[0141] 实施例
[0142] 以下，根据实施例而详细说明本发明，但是本发明不受实施例的任何限制。本领域 技术人员在不脱离本发明的内容的基础上，可以对本发明进行各种方式的变更，这种变更 也包含于本发明的范围。
[0143] L对象和方法
[0144] 1-1.以人为对象的研究的审批
[0145] 个体（subject)于由东京大学以及其他研究参与机关的审查委员会审批的研究 计划上做了登记。取得了所有个体的书面的知情同意（informed consent)。
[0146] 1-2. MSA 多发家系
[0147] 根据目前已达成共识（consensus)的MSA诊断基准，进行MSA的诊断（Gilman S, 等 Neurology 2008;71:670-6.) 〇
[0148] 本发明的发明者们到目前为止发表过4个日本MSA多发家系（FMSA_1至FMSA_4) (文献12)。在本研究中登记了包括患有MSA的2组兄弟姐妹所在的2个新的日本MSA家 系（FMSA_8以及FMSA_12)的、6个MSA多发家系（图1A)。FMSA_1中有血族婚（父母是嫡 亲兄妹婚（first degree cousin))，启示可能是常染色体隐性遗传。6个MSA多发家系的临 床表现示出在表2。对FMSA_1的II-4以及II-8、FMSA_8的II-6实施了活检，确诊为MSA。
[0149][表 2]
[0150]
[0152] 缩写：" + "表示阳性；"一"表示阴性；"？ "表示未知；"N.E. "表示未评价；"MRI" 表示磁共振成像；"MSA-C"表示小脑型多系统萎缩症；"MSA-P"表示具有显著的帕金森症的 多系统萎缩症。
[0153] 1-3.散发性MSA患者和对照者
[0154] 根据目前已达成共识（consensus)的基准，进行MSA的诊断（Gilman S,等 Neurology 2008;71:670-6.)。日本人队列（cohort)包括从 Japan Multiple System Atrophy Research Consortium(JAMSAC)获得样品提供的195名MSA患者和113名健康者。 进一步地，将东京大学、高龄者Brainbank、东京都健康长寿医疗中心、新泻大学脑研究所、 北海道大学大学院医学研究科以及鹿儿岛大学大学院医齿科综合研究科的168名MSA患者 和407名对照者，作为对象。
[0155] 作为独立的MSA队列（cohort)，使用了欧洲和北美队列。欧洲人的基因组DNA样 品中包含Pitie Salpetriere医院（法国）的138名MSA患者和281名对照者、Naples Federico II大学（意大利）的34名MSA患者和34名对照者、Bonn大学（德国）的46 名MSA患者的样品。欧洲人列队中还包含悉尼大学的5名MSA患者样品。北美人的基因组 DNA样品中包含从北美多系统萎缩症研究组（North American Multiple System Atrophy Study Group ;NAMSA-SG)获得样品提供的172名MSA患者和294名对照者的样品。参加者 的统计示出在表3。
[0156][表 3]
[0158] 缩写："MSA-C"表示小脑型多系统萎缩症；"MSA-P"表示具有显著的帕金森症的多 系统萎缩症；"N.A. "表示未适用（notapplicable) ;"N.D. "表示未提及（notdescribed)。
[0159] 取样年龄和发病年龄以平均值、标准偏差表示。
[0160] 1-4.对照者的独立队列和其他的神经变性疾病队列
[0161] 用于复制研究（Replication study)的对照者的独立列队（n = 2, 383)，是从 Japanese Genetic Study Consortium for Alzheimer Disease (JGSCAD)以及 Japanese Consortium for Amyotrophic Lateral Sclerosis research(JaCALS)得到提供。为了石开 究C〇Q2变异体和MSA相关的特异性，将其他的神经变性疾病（阿尔茨海默病（AD)、帕金森 病（PD)以及肌萎缩侧索硬化症（ALS)患者；来自JGSCAD的2, 728名AD患者、来自东京大 学以及 Japanese Parkinson Disease Susceptibility Gene Consortium 的 659 名 PD 患 者、来自东京大学以及JaCALS的634名ALS患者）也作为研究对象。
[0162] 1-5.关联分析和全基因组测序
[0163]使用 Affymetrix SNP 6. Oarrays 对于 FMSA_1 进行了关联分析。将 FMSA_1 的 II-4 基因组 DNA 样品，利用 Illumina Genome Analyzer IIx (10〇-bp-long paired ends)，分析 了 4次。对人类基因组参考序列（NCBI36/hgl8assembly)的对准（alignment)和突变的检 测中使用了BurrowsWheelerAligner(BWA)以及Smatools0
[0164] 1-6.C0Q2基因的突变分析
[0165] 利用扩增C0Q2基因的各外显子的引物对表4,进行PCR，接着进行核苷酸序列分 析。
[0166] [表 4]
[0168] 使用引物对进行了聚合酶链反应（PCR)而扩增具有LATaq(TaKaRa)的C0Q2的各 外显子。使用ExoSAP-lT(USB，OH，USA)、BigDycTerminatorv3. 1 试剂盒以及使用ABI3130 和 3730GeneticAnalyzers(Lifeechnologies，CA，USA)的XTerminator，进行了直接核苷 酸序列分析。
[0169] 外显子 IForwardprimersequence 序列号 2
[0170] 外显子 IReverseprimersequence 序列号 3
[0171] 外显子 2Forwardprimersequence 序列号 4
[0172] 外显子 2Reverseprimersequence 序列号 5
[0173] 外显子 3Forwardprimersequence 序列号 6
[0174] 外显子 3Reverseprimersequence 序列号 7
[0175] 外显子 4Forwardprimersequence 序列号 8
[0176] 外显子 4Reverseprimersequence 序列号 9
[0177] 外显子 5Forwardprimersequence 序列号 10
[0178] 外显子 5Reverseprimersequence 序列号 11
[0179] 外显子 6Forwardprimersequence 序列号 12
[0180] 外显子 6Reverseprimersequence 序列号 13
[0181] 外显子 7Forwardprimersequence 序列号 14
[0182] 外显子 7Reverseprimersequence 序列号 15
[0183] 1-7?根据酵母互补系统（YeastComplementationSystem)的C0Q2基因的功能分 析
[0184] 对于野生型人类C0Q2基因，使用表5的引物（从上到下的顺序，序列号为16~ 47)，根据PCR进行位点特异性突变导入。接着将野生型和突变型的人类C0Q2基因cDNA插 入到酵母表达载体PAUR123 (Takara公司）将酵母coq2基因无效突变体的BY4741ACOq2 株用包含野生型或突变型人类C0Q2基因cDNA的pAUR123载体，使用YeastmakerYeast TransformationSystem2(Clontech公司）进行转化。通过用ODmonitor(Titech公司）， 监测培养基的600nm吸光度（0D600)，测定含非发酵性碳源的培养基（酵母膏、蛋白胨、甘油 培养基）中的增殖。
[0185][表 5]
[0187]使用引物与QuickChange Site-Directed Mutagenesis试剂盒 (Stratagene, CA, USA)进行了野生型人类C0Q2的基于PCR的定点诱变。
[0188] 1-8. CoQ2活性的测定
[0189] CoQ2 (EC 2. 5. 1. 39)的活性通过测定放射性对羟基苯甲酸（PHB)的聚十异戊二烯 (decaprenyl) PHB 的惨入而进行分析。具体而言，使用 QProteome Mitochondria Isolation 试剂盒（Qiagen公司），从淋巴母细胞样细胞制备的线粒体组分（fraction)作为酶源。根 据 Lopez-Martin 等人的方法（Lopez-Martin JM,等 Hum Mol Genet 2007 ;16:1091-7.)， 制备由 500 yg 的线粒体富集组分（fraction)、1000 y M[14C]PHB(1.85MBq/y mol)以及含 5 y M聚十异戊二烯焦磷酸的100 y L的测定用缓冲液（含0. 05%的3-[ (3-胆酰胺丙基）二 甲氨基]_1_ 丙横酉爱（3-[ (3-Cholamidopropyl) dimethylammonio]-1-propanesulfonate)； CHAPS)组成的反应液。反应在37°C下进行60分钟，在1000 y L正己烷中抽提。正己烷相 的放射性物质利用液体闪烁计数器Tri-Carb 2000CA (PerkinElmer公司）进行测定。结果 以9个独立的实验平均值表示。
[0190] 1-9.组织中的CoQlO水平的测定
[0191] 将由152名MSA患者和76名对照者建立的EB病毒永生化淋巴母细胞样细胞（由 JAMSAC提供），在含10 %胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养。从约IO7~10 8个淋巴母细 胞样细胞，在4倍量的2-丙醇中抽提游离胆固醇和CoQlO,或者从根据3名MSA患者以及3 名对照者的活检而制备的小脑冻结样品，在9倍量的2-丙醇中抽