非携带者更高，其相差是显著的（p = 0.0021)。 临床分型分别如下：34名携带者为MSA-C、5名携带者为MSA-P、1名携带者为没有被分类于 任一个分型的型、468名非携带者为MSA-C、209名非携带者为MSA-P、42名非携带者为没有 被分类于任一个分型的型。对于MSA-P的MSA-C的比通过利用了 2X2列联表的Fisher确 切概率法检验而求出，其结果，C〇Q2突变的携带者与非携带者相比显著地高（p = 0.018) (表 8)。
[0230] 2-6.淋巴母细胞样细胞中的细胞内CoQlO浓度
[0231] 测定了从V343A携带者的MSA患者得到的淋巴母细胞样细胞、从不具有突变的 MSA患者得到的淋巴母细胞样细胞、以及不具有突变的对照者得到的淋巴母细胞样细胞中 的细胞内CoQlO浓度。对象被分为（1)2个突变等位基因（R337Q/V343A、R337X/V343A以及 V343A/V343A)携带者的MSA患者、（2)V343A的杂合体携带者的16名MSA患者、（3)不具有 突变的133名MSA患者以及⑷不具有突变的76名对照者（表9)。
[0232][表9]
[0233]
[0234] 缩写："MSA"表示多系统萎缩症；"CcA。"表示辅酶qlO。
[0235] 总CoQll/游离胆固醇的结果以平均值以及括号中的标准偏差（nmol/mol)表示。
[0236] 从2个突变等位基因的携带者的MSA患者获得淋巴母细胞样细胞内的CoQlO浓度 比不具有突变的对照者相比低很多。具有V343A的杂合体的MSA患者中，与不具有突变的 对照者相比，发现存在细胞内CoQlO浓度低下的倾向，但差异不显著。不具有C0Q2突变的 MSA患者的淋巴母细胞样细胞内的CoQlO浓度与不具有C0Q2突变的对照者大致相同。
[0237] 2-7.脑组织中的细胞内CoQlO浓度
[0238] 虽然能够从具有C0Q2突变的MSA患者获得脑组织的数有限，但测定了具有C0Q2 突变的3名患者（1名为M78V-V343A/M78V-V343A、2名为V343A/wt)的冻结脑组织以及不 具有突变的对照者的冻结脑组织中的CoQlO浓度（图2C)。具有M78V-V343A的纯合体的 MSA患者中的CoQlO浓度与不具有突变的对照者相比显著低下。
[0239] 3.以MSA患者为对象的泛醌醇的临床试验
[0240] 3-1.试验药物与给药方法
[0241] 在家族性MSA发病者中，将具有C0Q2基因的R337X/V343A复合杂合突变的患者1 例（图1中所示的FMSA_12的II-4)为对象，进行了泛醌醇的临床试验。
[0242]作为从 kaneka (力本力）获得提供的泛醌醇（2_[ (2E，6E，10E，14E，18E，22E，26E， 30E, 34E)-3, 7, 11，15, 19, 23, 27, 31，35, 39-十甲基-2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38-癸酰 基]-5,6-二甲氧基-3-甲基环己烷-2,5-二烯-1，4-二醇（2-[(2￡，6￡，1(^，14￡，18￡，22￡， 26E, 30E, 34E)-3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39-decamethyltetraconta-2, 6, 10, 14, 18, 22 ,26,30,34,38-decaenyl]-5, 6-dimethoxy-3-me thylcyclohexa-2, 5_diene-l, 4-diol))， 将含120mg的稳定性粉末以规定的用量（600mg、840mg、1200mg)，从胃造痿管（gastrostomy tube)每天早上给药一次。
[0243] 3-2?试验的设计、目的
[0244] 是1例对象的没有设定对照的非盲法（Unblinded)探索性临床试验，以研究以下 项目为目的而进行。
[0245] 1.确认高用量给药的安全性
[0246] 2?研究药代动力学
[0247] 3.从药代动力学判断长期给药用量
[0248] 4.研究临床指标
[0249] 3-3?试验的评价项目
[0250] 试验的评价项目如下。
[0251] (1)主要评价项目（Primary endpoint)
[0252] ?血浆以及白血球中、髓液中辅酶QlO浓度
[0253] ?有害现象的有无
[0254] (2)次要评价项目（Secondary endpoint)
[0255] ? UMSARS PartII(运动功能的评价）
[0256] ?尿中 8-0HdG
[0257] ?基于150-PET的氧代谢能力评价
[0258] (3)安全性评价项目
[0259]?肝功能检测（AST，ALT，y-GTP，ALP，T.Bil)
[0260] 由于有向大鼠以300mg/kg给予辅酶QlO的结果，AST、ALT轻微上升的研究报告。
[0261] ?主观症状，根据身体诊断、神经学诊断的客观判断
[0262] ?实施的各种检测值的异常
[0263] 3-4.试验概要
[0264] 试验概要示出在图4。
[0265] 3-5.短期给药与试验结果
[0266] ?关于有害现象
[0267] 在试验期间中，按时间观察（chronologicalobservation)主观症状、客观症状的 有无，临床检测（血液，生化学检验：AST、ALT、y-GTP、ALP、T.Bil、BUN、Cre、Na、K、Cl、Glu、 CK)〇
[0268] 没有发生判断为与试验药物有关的有害现象。
[0269] 3-6?血浆 CoQlO 浓度
[0270] 血浆CoQlO浓度的测定结果示出在图5。
[0271] 基础血浆CoQlO浓度在低水平。通过给药1200mg，达到了已有报告中的坪值 (plateau)。泛醌的高用量给药的既有报告中，通过给药泛醌2400mg以上，在7. 5~8. 0 y g/ ml达到坪值。本试验中，用泛醌醇1200mg，达到7. 9 y g/ml，参考既有报告的数据而判断为 达到坪值。
[0272] 3-7.对单核细胞中的游离胆固醇的全CoQlO量
[0273] 单核细胞中的全CoQlO/游离胆固醇（nM/yM)的测定结果示出在图6。通过泛醌 醇的给药，确认了用量依赖性地、单核细胞中的全CoQlO/游离胆固醇的提高。
[0274] 3-8?髓液 CoQlO 浓度
[0275] 髓液CoQlO浓度Ug/ml)的测定结果示出在图7。没有关于泛醌、泛醌醇的给药时 的髓液CoQlO浓度变化的研究报告。虽然基础髓液CoQlO浓度在低水平，但840mg，1200mg 的给药群中观察到好像达到了坪值（plateau)。
[0276] 3-9?尿中 8-0HdG
[0277] 尿中8-〇HdG (ng/mg-Cre)的测定结果示出在图8。虽然基础尿中8-〇HdG (ng/ mg-Cre)在高水平（平均8.4, n = 500)，但是通过泛醌醇的给药而下降。没有明确地发现 用量依赖性。
[0278] 3-10.临床评价量表
[0279] 临床评价量表示出在图9。虽然有轻微的变动，但难以认定为统计学上能判断为显 著的变化。获得了对主治医、家族（妻）呼叫的反应的改善、上肢举起的改善、四肢颤动减 轻的所感。但是，由于存在主观偏见、入院中的复原效果等复合因素，因此难以判断。
[0280] 3-11?脑血流量、氧代谢量
[0281] 脑血流量和氧代谢量的测定结果示出在图10。发现任意个在给药后有上升的倾 向。
[0282] 3-12?总结
[0283] 在本次试验中第一次明确了以下点。
[0284] 1.即使在高用量给药中，泛醌醇比泛醌生物利用度（bioavailability)更高。
[0285] 2.用泛醌醇1200mg，血浆CoQlO达到坪值。观察到与先前研究中观察到的血浆 CoQlO的坪值相一致的结果。这表明给予的CoQlO进入血浆中。
[0286] 3.通过泛醌醇的给药，能够确认末梢血单核细胞的CoQlO含量上升。这表明给予 的CoQlO进入细胞内。
[0287] 4.通过泛醌醇的给药，能够确认髓液CoQlO浓度上升到高于正常对照的髓液 CoQlO浓度的值。这表明给予的CoQlO进入到髓液。
[0288] 5.通过2~4,表明给予的CoQlO能够补偿CoQlO的低下。
[0289] 5.在给药泛醌醇1200mg的2周期间，没有观察到有害现象。
[0290] 6.根据[150]02PET的评价，脑氧消耗量与给药前相比，明显得到改善。启示可能成 为通过补充CoQlO,评价中枢神经系统的功能改善的替代标记（surrogate marker)。
【主权项】
1. 一种检测个体的多系统萎缩症风险的方法，包括步骤：检测从个体采取的样品中的 使辅酶QlO生物合成低下的突变。2. 如权利要求1所述的方法，所述的使辅酶QlO生物合成低下的突变，是抑制对羟基苯 甲酸酯聚戊烯转移酶（辅酶Q2)的表达或功能的突变。3. 如权利要求2所述的方法，所述的抑制辅酶Q2的表达或功能的突变选自由序列号1 中的 P49H、S57T、R69H、M78V、I97T、P107S、S113F、T267A、S297C、R337Q、R337X 以及 V343A 组成的群。4. 如权利要求2所述的方法，所述的抑制辅酶Q2的表达或功能的突变为V343A。5. -种检测多系统萎缩症风险的试剂盒，包括以下（i)至（iii)中的至少一个： (i) 与一种区域杂交的核酸，该区域包含辅酶Q2基因中的、编码从由辅酶Q2蛋白的序 列号1的49位、57位、69位、78位、97位、107位、113位、267位、297位、337位以及343位 组成的群中选择的位点的氨基酸的核酸； (ii) 能够扩增一种区域的引物对，该区域包含辅酶Q2基因中的、编码从由辅酶Q2蛋 白的序列号1的49位、57位、69位、78位、97位、107位、113位、267位、297位、337位以及 343位组成的群中选择的位点的氨基酸的核酸； (iii) 仅与在序列号 1 中具有从由 P49H、S57T、R69H、M78V、I9n\P107S、S113F、T267A、 S297C、R337Q、R337X以及V343A组成的群中选择的至少一个突变的辅酶Q2蛋白、和野生型 辅酶Q2蛋白中的任意个结合的不发生交叉反应的抗体。6. -种包含辅酶QlO的多系统萎缩症的预防或治疗药剂。7. -种包括辅酶QlO给药步骤的多系统萎缩症的预防或治疗方法。8. -种多系统萎缩症的预防或治疗药剂的筛选方法，包括步骤： 使候选化合物和细胞相接触而进行培养； 选择使细胞内的辅酶QlO量提高的候选化合物。9. 一种编码包含V343A突变的辅酶Q2蛋白的核酸。
【专利摘要】本发明的目的在于通过确定MSA的致病基因而阐明发病机理，进而寻找出其治疗方法。本发明提供一种检测个体的多系统萎缩症风险的方法，包括步骤：检测从个体采取的样品中的使辅酶Q10生物合成低下的突变。作为使辅酶Q10生物合成低下的突变，例如可以举出抑制辅酶Q2的表达或功能的突变。
【IPC分类】A61P25/16, A61K31/122, C12Q1/68, C12N15/09, A61P25/00, G01N33/50, G01N33/15, C12Q1/02
【公开号】CN105102621
【申请号】CN201480019831
【发明人】辻省次, 三井纯
【申请人】国立大学法人东京大学
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年2月5日
【公告号】WO2014123151A1