抗菌肽的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗菌肽，具体涉及一种具有16个氨基酸的抗菌肽。
【背景技术】
[0002] 抗菌肽是一类具有抗菌活性的小分子蛋白。自瑞典科学家Boman等从蚕蛹身上分 离得到第一个抗菌肽天蚕素以来，人们又在昆虫、两栖类、水产动物，以及包括人在内的哺 乳动物甚至植物及细菌等广泛的生物谱中发现了 1〇〇〇余种抗菌肽。内源性的抗菌肽在生 物体内经诱导而合成，在抵抗病原入侵方面起着重要的作用，是生物体非特异性免疫的重 要组成部分。
[0003] 抗菌肽的抗菌活性具有选择性高、杀菌快速、作用广谱和难以形成抗性的特点，这 使其成为研究和开发新型抗生素的理想候选。目前，从生物体内提取天然抗菌肽是抗菌肽 产品开发的主要思路，但天然抗菌肽具有结构不稳定，易失活等缺点。
【发明内容】
[0004] 本发明提供了一种抗菌肽，其来源于一种名为Scorpion Androctonus的蝎子所分 泌的毒性蛋白Mauriporin，该毒性蛋白质含有48个氨基酸。我们选择性地缩短了该毒性蛋 白的肽链长度并优化了序列，最终得到了本发明的抗菌肽。本发明抗菌肽具有广谱的抗菌 特性，不仅活性更高，而且稳定不易失活。
[0005] 根据本发明的一个方面，本发明涉及一种抗菌肽，所述抗菌肽的序列为：Phe-Lys-XfGly-Gly-Phe-Xz-Lys-Lys-Xu-Trp-Arg-Ser-XfXs-Ala，其中，X!、X 2、X3、X4和 X 5各自独立 地为1^11、116或￥&1;优选3 1和乂2各自独立地为116，父334和乂5各自独立地为1^11 ;在优 选的技术方案中，所述抗菌肽的序列为Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala ;Phe-Lys-Val-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys-Lys-Val-Trp-Arg-Ser-Ile_V al-Ala ;Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Val-Lys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Val-Leu_Ala ;或 Phe -Lys-Leu-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys-Lys-Ile-Trp-Arg-Ser-Leu-Ile-Ala〇
[0006] 根据本发明的另一个方面，本发明涉及一种组合物，含有本发明的抗菌肽或其任 意混合物，所述组合物包括但不限于洗手液、洗面奶、洗发香波、沐浴液、女性护理洗液、漱 口水、牙膏、香皂、化妆品、洗衣皂、洗衣液、洗涤灵、消毒液或洁厕液等。
[0007] 根据本发明的另一个方面，本发明涉及一种织物，含有本发明的抗菌肽或其任意 混合物，所述织物包括但不限于衣物、床上用品、消毒纸巾、敷料或绷带等。
[0008] 根据本发明的另一个方面，本发明涉及一种卫生巾、卫生护垫、尿不湿或成人用尿 垫，含有本发明的抗菌肽或其任意混合物。
[0009] 根据本发明的另一个方面，本发明的抗菌肽可以作为饲料添加剂，从而本发明涉 及一种饲料，含有本发明的抗菌肽或其任意混合物。
[0010] 根据本发明的另一个方面，本发明涉及一种用于预防和/或治疗细菌感染的药物 组合物，含有预防和/或治疗有效量的本发明的抗菌肽或其任意混合物。本发明进一步涉 及本发明的抗菌肽或其任意混合物在制备用于预防和/或治疗细菌感染的药物中的应用。
[0011] 根据本发明的另一个方面，本发明涉及本发明的抗菌肽或其任意混合物在制备各 种具有抑菌和/或杀菌性能的产品中的应用。这些产品包括但不限于洗手液、洗面奶、洗发 香波、沐浴液、女性护理洗液、漱口水、牙膏、香皂、化妆品、洗衣皂、洗衣液、洗涤灵、消毒液、 洁厕液、衣物、床上用品、消毒纸巾、敷料、绷带、卫生巾、卫生护垫、尿不湿、成人用尿垫或饲 料等等。总之，本发明的抗菌肽可以应用于一切需要杀菌或者抑菌的产品中。
[0012] 本领域技术人员知晓在本发明的各种组合物、饲料和药物组合物中，可进一步含 有常规的各种辅料和/或活性成分，并且能够根据本领域的常规方法确定本发明的抗菌肽 以及各种辅料和/或活性成分的合适的含量。本领域技术人员同样知晓如何制备含有本 发明的抗菌肽的织物、卫生巾、卫生护垫、尿不湿或成人用尿垫，包括但不限于将织物、卫生 巾、卫生护垫、尿不湿或成人用尿垫，或者制造织物、卫生巾、卫生护垫、尿不湿或成人用尿 垫的材料在含有本发明抗菌肽的溶液中浸渍。
[0013] 本发明的抗菌肽可以采用本领域技术人员已知的方法合成，例如固相合成，并采 用本领域技术人员已知的方法进行纯化，例如高效液相色谱法。
[0014] 本发明的抗菌肽抗菌谱广，抗菌活性更高，而且稳定不易失活。
【附图说明】
[0015] 图1为本发明抗菌肽的高效液相色谱图。
[0016] 图2为本发明抗菌肽的质谱图。 具体实施方案
[0017] 为了更好地理解本发明，下面结合实施例和附图对本发明做进一步的详细说明， 但本领域技术人员了解，下述实施例不是对本发明保护范围的限制，任何在本发明基础上 做出的改变和变化，都在本发明的保护范围之内。
[0018] 实施例1抗菌肽的固相合成、切割、纯化及鉴定
[0019] 1. 1抗菌肽的固相合成
[0020] 本发明利用多肽合成仪采用固相合成法合成抗菌肽：
[0021] 1)以DMF为溶剂，各种a -氨基被Fmoc保护的氨基酸溶液的浓度为0. 25M，HBTU 溶液、HOBt溶液的浓度为0. 33M，哌啶溶液的浓度为200ml/L，DIEA溶液的浓度为174. 2ml/ L〇
[0022] 2)称取0? 05mmol Fmoc-Ala-Wang树脂（官能团含量0? 33mmol/g)置于固相反 应器中，加8ml DCM溶胀过夜，减压抽去溶剂。加入浓度为200ml/L的哌啶溶液8ml，室温 下反应5min，抽干；再加入浓度为200ml/L的哌啶溶液8ml，室温下反应20min，抽干；依次 用8ml的DMF洗涤3次，每次lmin。准确量取0. 2mmol的a -氨基被Fmoc保护的氨基酸 溶液、0. 2mmol的HBTU溶液、0. 195mmol的HOBt溶液加入固相反应器中，反应5min后加入 0. 4mmol的DIEA，室温下氮气气泡振荡反应2h。依次用8ml的DMF洗涤3次，每次lmin。加 入浓度为200ml/L的哌啶溶液8ml，室温下反应5min，抽干；再加入浓度为200ml/L的哌啶 溶液8ml，室温下反应20min，抽干；依次以8ml的DMF洗涤3次，每次lmin。按照如上步骤 从肽链的碳端到氮端逐一连续合成了本发明的抗菌肽Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys -Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala (多肽 1) 〇
[0023] 3)待合成完毕后，分别用DMF和DCM先后清洗连有多肽链的树脂，后将树脂至于真 空干燥箱内干燥备用。
[0024] 1.2抗菌肽的切割
[0025] 1)待树脂干燥后，用刮刀将树脂尽量打散，转移至鸡心瓶中，加入磁子，在冰水浴 下缓慢加入用于脱除树脂的切割液l〇ml (切割液中TFA :纯水：苯甲硫醚：苯酚：乙二硫醇 比例为82. 5:5:5:5:2. 5)，冰水浴下反应2h。
[0026] 2)待反应完成，将反应液连同树脂一同转移至过滤器中，用水栗抽滤，将得到的滤 液置于圆底烧瓶中，并在氮气流下吹干。
[0027] 3)待圆底烧瓶中的样品吹至粘稠，撤下氮气管，在圆底烧瓶中倒入约20ml的4°C 冰乙醚，混合后充分打散，然后于冷冻离心机内，4°C下8000r/min离心15min，弃上清，再于 20ml的4°C冰乙醚中打散，离心；如此重复操作3次，将沉淀再次真空干燥，即得抗菌肽粗 品。
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