一种培养血耳混合菌种的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及食用、药用真菌栽培的技术领域，具体而言，设及一种培养血耳混合菌 种的方法。
【背景技术】
[0002] 血耳是一种具有很高经济价值的珍稀药食兼用真菌，具有滋阴补阳和补血强身的 功效，被看作是治疗妇科疾病的良药。野生的血耳产量极少，而人工栽培由于菌种生产技术 没有突破，故产量极低。
[0003] 血耳菌种是一个由血耳纯菌丝和其生长所必需的被称为"耳友菌"的伴生菌丝构 成的混合菌丝结构。现有的血耳栽培技术还停留在半人工仿生栽培阶段。所使用的"血耳 菌种"只是从野生血耳生长基质上分离得到血耳"耳友菌"，经纯化后采用常规方法接种于 木屑教皮培养基，菌丝长满后用于仿生栽培。
[0004] 此种栽培技术需要接种口开放不封口，W等待自然接种空气中的野生血耳抱子， 每个接种穴只有成功接种了血耳抱子、成功萌发，且与"耳友菌"伴生6个月后才能够顺利 长出血耳子实体，因而存在自然接种成功率低、培育时间过长等问题。此外，自然接种的野 生血耳抱子不一定来自同一菌株，更何况还有很大可能混入一些近缘种及杂菌，会导致最 后有幸收获的血耳产品良莽不齐，品质无法保障。运些因素都限制了血耳的产量与良品率。
[0005]有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种培养血耳菌种的方法，该方法可增加菌种的穴出耳率， 提升血耳成品的品质，大幅降低血耳培育时间。
[0007] 为了实现W上目的，本发明采用的混合菌种栽培血耳新方法，其流程如下：
[0008]1)、分离野生血耳中的耳友菌与血耳担抱子菌种，分别纯化并初步培养，得到两种 菌种；
[0009] 2)、将两种菌种分别于液体培养基中进行扩大培养，将扩大培养完成后的两种菌 种混合，得到混合液体种；
[0010] 3)、将混合液体种混合揽拌接种于木屑教皮培养基进行培养，获取用于血耳栽培 的血耳固体混合菌种。
[0011] 传统的血耳菌种中只含有耳友菌菌种，本发明将耳友菌菌种与血耳抱子菌种混合 在一起，混合接种于木屑教皮培养基，制成混合固体菌种，可有效解决血耳接种成功率低、 培育时间长的问题。
[0012] 优选的，对于上述培养血耳混合菌种流程2)中所述液体培养基，主要由W下组份 制成：
[0013]教皮微粉0. 2~0. 5份、豆巧微粉0. 2~0. 5份、玉米微粉0. 1~0. 3份、葡萄糖1. 5~2.5份、硫酸儀0.05~0.15份、憐酸二氨钟0.05~0.15份、消泡剂0.1~0. 2份、 水98~102份。
[0014] 其中教皮、豆巧、玉米微粉及葡萄糖可为真菌的生长提供充足的碳水化合物及常 规养分；硫酸儀是真菌EMP、TCA途径及赖氨酸产生的重要酶激活剂；憐酸二氨钟可为培养 基提供抑缓冲作用，且憐是细胞膜的组成部分，是蛋白质和核酸的合成原料，也是ADP、ATP 的组成部分，必不可缺。钟离子可为真菌提供适合的代谢中酶反应的离子环境；消泡剂可解 决培养基通气揽拌时容易产生气泡的问题。在此培养基下，菌种生长状态好，生长速度快。
[0015] 优选的，基于上述的液体培养基，所述的消泡剂包括天然油脂、聚酸类消泡剂、娃 类消泡剂、聚酸改性娃消泡剂的一种或多种。
[0016] 优选的，耳友菌扩大培养的时间为5~7天，而血耳芽抱扩大培养的时间为3~5 天。
[0017] 在该培养时间范围内，菌种产量较为合适，且菌种生长状态较好。
[0018] 优选的，扩大培养时的溫度为23~25 °C。
[0019] 在该培养溫度范围内，菌种生长状态较好。
[0020] 优选的，上述培养血耳混合菌种流程3)中所述的混合培养种培养时所用的固体 培养基按照重量百分数计，包括：
[0021] 1~4毫米大小的栓皮栋干木屑颗粒76~80 %、教皮18~22 %、薦糖0.8~ 1.2%、石膏粉0.8~1.2%。
[0022] 其中干木屑、教皮和薦糖能提供真菌生长所需的营养。石膏可直接补充培养基中 硫、巧的不足，供给菌丝吸收利用，巧离子还能有利于真菌菌丝吸收营养，中和菌丝在生长 过程中产生的酸，提供缓冲体系。水可提供真菌生长所需的水分和潮湿的环境。
[0023] 进一步优选的，所述的固体培养基含水量为47~53%。
[0024] 优选的，在上述的混合培养过程中，按照两种液体种的体积比，血耳菌/耳友菌的 比值在1~1. 3之间。
[00巧]耳友菌帮助血耳分解、吸收养分。当两者混合比例控制在上述范围内时，既不会造 成菌种的浪费，菌种生长状态也较好。
[00%] 优选的，上述将混合液体种混合揽拌接种于木屑教皮培养基进行培养时，接种了 混合液体种的培养基含水量控制在52~55%。
[0027] 优选的，上述混合培养过程中，培养溫度范围为23~25°C。
[0028] 此溫度范围为耳友菌和血耳均能良好生长的适宜溫度范围。
[0029] 与现有技术相比，本发明的技术效果包括W下几个方面：
[0030] 1)、应用本发明生产的血耳菌种栽培血耳，由于菌种是耳友菌菌种与血耳抱子的 混合菌种，避免了自然接种野生血耳抱子成功率低、接种时间长的问题。
[0031] 2)、由于毋须自然接种野生血耳抱子，原木接种后，接种口可封闭，降低了干旱、日 照、高溫、病虫害等不良环境因素对接种穴中菌种的影响，保障了两种"菌"正常的生长发 育，接种成活率高，产量与品质也获得提高。
[0032] 3)、由于接种口可封闭，也避免了杂菌污染的可能性。
[0033] 4)、由于两种菌种均为人工培育，保证了菌种的纯度，避免了自然接种野生血耳抱 子质量参差不齐的缺点。
[0034] 5)、综合上述几点原因，使得整体的菌种培育及后续的血耳栽培时间大幅缩短。如 果栽培环境适宜，从菌种培育到血耳成品产出一共能较传统方法缩短生产时间110天左 -?"O
【具体实施方式】
[0035] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明制备厂商者，均为 可W通过市售购买获得的常规产品。 阳〇36] 实施例1
[0037] 1)、分别在无菌条件下，于血耳耳根着生处及子实体处分离得到耳友菌与血耳担 抱子菌种，选用常规分离培养基，进行纯化与初步培养，得到两种菌种；
[003引2)、将两种菌种分别于液体培养基中进行扩大培养，将扩大培养完成后的两种菌 种混合得到混合液体种；
[0039]3)、将混合液体种混合揽拌接种于木屑教皮培养基，进行培养获取用于血耳栽培 的血耳混合固体菌种。 W40] 实施例2
[0041]1)、采集优良野生血耳标本，分别在无菌条件下，于血耳耳根着生处及子实体处分 离得到耳友菌与血耳担抱子菌种，23°C，进行纯化与初步培养，得到两种菌种；
[0042]2)、扩大培养阶段。
[0043]将耳友菌与血耳抱子菌种用700升的气升式发酵罐，分别进行加水、投料、灭菌、 冷却、接种、23°C下保压0. 03兆帕充气发酵培养。耳友菌扩大培养的时间为7天，血耳芽抱 扩大培养的时间为5天。
[0044]其中扩大培养所用液体培养基配方为：教皮微粉0. 2份、豆巧微粉0. 2份、玉米微 粉0.1份、葡萄糖1.5份、硫酸儀0.05份、憐酸二氨钟0.05份、玉米油0.1份、水98份。
[0045] 3)、混合固体菌种培养阶段。
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