，在得到的沉淀中加入140ul70%乙醇，离心弃上清，在得到的沉淀中加入140ul 100%乙醇，离心弃上清，在得到的沉淀中加入500ul 100%乙醇，轻轻震荡关闭后在低速涡旋振荡器中涡旋3s，得微载体；
[0026]S5、将BT杀虫毒蛋白基因DNA质粒、bar基因DNA质粒、玉米矮花叶病毒外壳蛋白基因MDMVCPDNA质粒包被在步骤S4所得的微载体内；
[0027]S6、取按常规方法培养所得的胚性玉米愈伤组织，用基因枪对其进行轰击后，置于分化培养基上避光恢复培养一天，光照下培养3天后，转移至1/2MS+IBA4.8mg/L+NAA0.04mg/L培养基中继续培养；
[0028]S8、至抗性芽生长至Icm以上后，将其移入生根培养基:
[0029]改良MS+0.04mg/L NAA+0.75mg/L6-BA+0.075mg/L IBA+35g/L 蔗糖培养基中继续培养，幼苗生长至根系发达、茎叶健壮后将其移入温室中培育，直至结种，所述改良MS包括营养元素和有机物，所述营养元素包括蛋氨酸锰10mg/L、，一水硫酸锌5mg/L、一水硫酸亚铁17mg/L、氨基酸螯合镁5mg/L、砸蛋氨酸5.5mg/L、植酸酶0.75mg/L、碱式硫酸铜4.5mg/L、[!比啶酸络0.065mg/L、碘酸|丐0.3mg/L、赖氨酸6mg/L、三氯化六氨合钴0.065mg/L、蛋白锗0.75mg/L、碘酵母6mg/L ;所述有机物包括盐酸硫胺素10mg/L、盐酸卩比卩多醇3mg/L、肌醇35mg/L、环己六醇 27mg/L ；
[0030]S9、将 0.1 份 MnS04 粉末、0.05 份 CuS04 粉末、0.1 份 ZnS04 粉末、0.2 份 NiS04 粉末、0.2份(NH4) 6Mo7024.4H20粉末和适量的EDTA (防止沉淀生成)，离子水300?400mL混合均匀，制备浸泡液，并用此浸泡液浸渍步骤S8所得的种子12h ;
[0031]S10、整地松土，将步骤S9所得的种子进行播种，土壤质地选择滴管带的滴头流量；播种完成后，避开天气过程后统一滴出苗水，灌水量以两条滴灌带湿润锋交汇为宜；
[0032]S11、出苗后，随水滴罐抗旱营养剂，所述抗旱营养剂由以下重量百分比浓度的组分构成:水杨酸12.21ppm，阿魏酸22.3ppm，香草酸21.7ppm，槲皮素12.0ppm,木犀草素12.0ppm，硅酸钾184.8ppm，磷酸二氢钾1.38%，尿素1.7%，硫酸锌0.55%，余量水。
[0033]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种玉米育种方法，其特征在于，包括如下步骤: .51、准确称取1mg金粉微载体置于1.5ml离心管中，加入1.5ml乙醇，祸旋振荡3_5min，静置15min后，1000rmp离心lmin，弃掉上清液； . 52、往步骤SI所得的溶液中加入Iml无菌去离子水，充分涡旋振荡3min;静置3min后，6000rmp离心30S，弃掉上清； . 53、重复步骤S23次后，加入0.25ml 50 %的灭菌甘油，并充分悬浮，得微载体甘油溶液； .54、将步骤S3所得的微载体甘油溶液加入5ul质粒，50ul的2.5mol/LCaCl2, 20ul的0.lmol/L亚精胺，持续震动3min，然后离心2S，弃上清，在得到的沉淀中加140ul70%乙醇，离心弃上清，在得到的沉淀中加入140ul 100 %乙醇，离心弃上清，在得到的沉淀中加入500ul 100%乙醇，轻轻震荡关闭后在低速涡旋振荡器中涡旋3s，得微载体； .55、将BT杀虫毒蛋白基因DNA质粒、bar基因DNA质粒、玉米矮花叶病毒外壳蛋白基因MDMVCPDNA质粒包被在步骤S4所得的微载体内； .56、取按常规方法培养所得的胚性玉米愈伤组织，用基因枪对其进行轰击后，置于分化培养基上避光恢复培养一天，光照下培养3天后，转移至1/2MS+IBA4.8mg/L+NAA0.04mg/L培养基中继续培养； .58、至抗性芽生长至Icm以上后，将其移入生根培养基: 改良 MS+0.04mg/L NAA+0.75mg/L6-BA+0.075mg/L IBA+35g/L 蔗糖培养基中继续培养，幼苗生长至根系发达、茎叶健壮后将其移入温室中培育，直至结种，所述改良MS包括营养元素和有机物，所述营养元素包括蛋氨酸锰10mg/L、，一水硫酸锌5mg/L、一水硫酸亚铁17mg/L、氨基酸螯合镁5mg/L、砸蛋氨酸5.5mg/L、植酸酶0.75mg/L、碱式硫酸铜4.5mg/L、[!比啶酸络0.065mg/L、碘酸|丐0.3mg/L、赖氨酸6mg/L、三氯化六氨合钴0.065mg/L、蛋白锗0.75mg/L、碘酵母6mg/L ;所述有机物包括盐酸硫胺素10mg/L、盐酸卩比卩多醇3mg/L、肌醇35mg/L、环己六醇 27mg/L ； . 59、将0.1 份 MnS04 粉末、0.05 份 CuS04 粉末、0.1 份 ZnS04 粉末0.2 份 NiS04 粉末、0.2份(NH4) 6Mo7024.4H20粉末和适量的EDTA (防止沉淀生成)，子水300?400mL混合均匀，制备浸泡液，并用此浸泡液浸渍步骤S8所得的种子12h ; .510、整地松土，将步骤S9所得的种子进行播种，土壤质地选择滴管带的滴头流量；播种完成后，避开天气过程后统一滴出苗水，灌水量以两条滴灌带湿润锋交汇为宜； .511、出苗后，随水滴罐抗旱营养剂，所述抗旱营养剂由以下重量百分比浓度的组分构成:水杨酸12.21ppm，阿魏酸22.3ppm，香草酸21.7ppm，槲皮素12.0ppm,木犀草素12.0ppm，硅酸钾184.8ppm，磷酸二氢钾1.38%，尿素1.7%，硫酸锌0.55%，余量水。
【专利摘要】本发明公开了一种玉米育种方法，通过基因枪法将BT杀虫毒蛋白基因、bar基因、玉米矮花叶病毒外壳蛋白基因MDMVCPDNA导入胚性玉米愈伤组织中，从而获得了具有优良的抗虫性、抗草性、抗病性以及耐旱性能的种子，通过浸种液的浸种处理，从而促进了种子的萌发，提高了幼苗的呼吸速率及根活力，增强了种子及幼苗的抗逆能力，通过抗旱营养剂的滴罐，利用酚酸类具有抗氧化性物质，可以提高植物中保护酶的数量和活性，又提高了多酚物质的含量，提高作物中抗氧化物质含量，增强了作物的抗旱性；同时，植株中酚类抗氧化物质含量的提高可以增加作物抗病、抗UV辐射等；在酚酸类物质中添加了磷酸二氢钾、氮素，增加了作物的营养元素供应。
【IPC分类】A01H4/00, C05G3/00, A01C1/00, A01C21/00, C12N15/82, A01G1/00
【公开号】CN105200079
【申请号】CN201510490786
【发明人】武江涛, 冀月林, 王雄飞, 刘建明, 贾艳清, 柴小丽, 师丽晓, 邢玉伟, 杨存良, 高海生, 武江鑫, 聂建国
【申请人】山西省原平市双惠种业有限公司
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年8月5日