新颖噬菌体和包括所述新颖噬菌体的抗细菌组成物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种具有针对禽病原性大肠杆菌（avianpathogenicEscherichia coli;APEC)的特异性杀菌活性的新颖噬菌体以及包括所述新颖噬菌体的抗细菌组成物。 另外，本发明涉及一种使用所述新颖噬菌体或所述抗细菌组成物来预防或治疗家禽疾病的 方法。
【背景技术】
[0002] 大肠杆菌（下文称为"大肠杆菌（E.coli) "）是一种属于埃希氏菌属 (Escherichia)和肠杆菌科（Enterobacteriaceae)的革兰氏阴性（Gram-negative)、短杆 状细菌，并且是存在于各种动物（包含哺乳动物）的肠中的正常菌丛中的一者。已知大部 分大肠杆菌的菌株是非病原性的并且可能导致机会性感染，但一些高度病原性菌株在动物 (包含人类）中导致多种肠疾病和败血症。
[0003] 已知在这些大肠杆菌菌株中，通过鸟类（例如，鸡、鸭、火鸡等等）的呼吸道感染的 大肠杆菌禽病原性大肠杆菌（APEC)尤其通过呼吸道粘膜渗透到体内。APEC在鸟类中导致 各种疾病，如败血症、肉芽肿、气囊炎、咽鼓管炎、关节炎等等。确切地说，APEC对家禽行业 造成巨大经济损害，因为APEC主要在家禽等等中导致呼吸道疾病，以使得APEC成为问题。
[0004] 同时，噬菌体是一种仅感染并且破坏细菌，并且可以仅在宿主细菌内自我复制的 特定病毒类型。噬菌体与抗生素相比具有强宿主特异性，并且最近，针对使用抗生素的耐受 性细菌的出现问题较为严重，以使得对噬菌体的实际使用的兴趣已经增加（非专利文献1 和非专利文献2)。
[0005] 因此，关于噬菌体的研究已经在全世界的许多国家中积极地进行，并且除了针对 噬菌体的专利申请之外，获得对含有噬菌体的组成物的食品和药物管理局（FoodandDrug Administration;FDA)批准的尝试已经逐渐增多。
[0006] 作为噬菌体的现有技术，专利文献1中已经公开7种用于控制大肠杆菌0157:H 的菌体，并且专利文献2中已经公开一种具有针对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)的特异性杀菌活性的噬菌体。此外，专利文献3中已经公开衍生自特异性地破坏细 菌细胞膜的肽聚糖结构的噬菌体的溶解蛋白，以及由所述溶解蛋白产生的细菌溶解物。 [0007] 然而，尽管存在以下现有技术，但与噬菌体相关联的用于预防和/或治疗由APEC 导致的传染病（其是饲养鸟类（包含家禽）中的重要问题）的技术仍然不充足，以使得应 该开发菌体和与·菌体相关联的技术。
[0008] [现有技术文献]
[0009][专利文献]
[0010] (专利文献1)美国专利第6, 485, 902号
[0011] (专利文献2)韩国专利登记第10-0910961B1号
[0012] (专利文献3)韩国专利特许公开公开案第10-2009-0021475A号 [0013][非专利文献]
[0014] (非专利文献1)西斯罗M(CiSl〇Μ)等人，免疫与治疗学实验文献（Arch. Immunol.Ther.Exp.)2:175-183, 1987
[0015] (非专利文献2)金胜励（SungHunKim)等人，菌体，新颖替代抗生素 (Bacteriophage,NovelAlternativeAntibiotics),生物波（BioWave)第 7 卷第 15 期，2005,BRIC
【发明内容】
[0016] 技术问题
[0017] 本发明人进行了研究以便解决如在使用抗生素之后出现的耐受性细菌和残留在 肉中的抗生素等等的问题，并且有效地预防和治疗鸟类的传染病。因此，本发明人从自然 中分离出了具有针对APEC(其导致家禽的呼吸道疾病）的特异性杀菌活性的新型噬菌体 ?CJ23(KCCM11365P)〇
[0018] 另外，本发明人鉴别了新颖噬菌体的形态、生物化学以及遗传特征，并且确认了所 述噬菌体具有极好的耐酸性、耐热性等等，从而使用所述新颖噬菌体开发抗生素、消毒剂、 饲料添加剂以及其它组成物。此外，本发明人开发了用于预防或治疗在鸟类中产生的传染 病的组成物，和使用所述组成物预防或治疗所述疾病的方法。
[0019] 本发明提供一种具有针对APEC的特异性杀菌活性的新颖噬菌体 ?CJ23(KCCM11365P)〇
[0020] 另外，本发明提供一种预防和/或治疗由APEC导致的传染病的组成物，其含有噬 菌体〇CJ23(KCCM11365P)作为活性成分。
[0021] 此外，本发明提供一种含有噬菌体?CJ23(KCCM11365P)作为活性成分的抗生素、 饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂或清洁剂。
[0022] 此外，本发明提供一种使用噬菌体ΦCJ23 (KCCM11365P)或含有噬菌体 ?CJ23(KCCM11365P)作为活性成分的组成物来预防和/或治疗由APEC导致的传染病的方 法。
[0023] 问题的解决方案
[0024] 本发明的一个示范性实施例提供一种具有针对禽病原性大肠杆菌（APEC)的特异 性杀菌活性的新颖噬菌体〇CJ23(KCCM11365P)。
[0025] 本发明的另一个示范性实施例提供一种用于预防或治疗由APEC导致的传染病的 组成物，其含有如上文所描述的噬菌体?CJ23(KCCM11365P)作为活性成分。。
[0026] 本发明的另一个示范性实施例提供一种含有如上文所描述的噬菌体 ?CJ23(KCCM11365P)作为活性成分的抗生素、饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂或清洁 剂。
[0027] 本发明的另一个示范性实施例提供一种预防或治疗由APEC导致的传染病的方 法，所述方法包含向鸟类施予如上文所描述的噬菌体〇CJ23(KCCM11365P)或含有噬菌体 ?CJ23作为活性成分的组成物。
[0028] 本发明的有利作用
[0029] 根据本发明的噬菌体ΦCJ23 (KCCM11365P)具有针对禽病原性大肠杆菌（APEC)的 特异性杀菌活性。
[0030] 另外，因为本发明的噬菌体?CJ23(KCCM11365P)具有极好的耐酸性、耐热性以及 耐旱性，所以其不仅可以用作用于在各种温度或pH范围下预防或治疗由APEC导致的传染 病的物质，并且可以用作抗生素、饲料添加剂、饮用水添加剂、消毒剂以及清洁剂等等。
[0031] 此外，根据本发明，由APEC导致的传染病可以通过向鸟类施予噬菌体 ?CJ23(KCCM11365P)或含有噬菌体?CJ23(KCCM11365P)作为活性成分的组成物来预防或 治疗。
【附图说明】
[0032] 图1是新颖噬菌体OCJ23 (KCCM11365P，下文称作'OCJ23'）的电子显微镜照片。
[0033] 图2示出新颖菌体C>CJ23的脉冲场凝胶电泳（pulsedfieldgel electrophoresis;PFGE)的结果。
[0034] 图3示出新颖菌体C>CJ23的十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（sodiumd odecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis;SDS_PAGE)结果。
[0035] 图4是示出新颖噬菌体?CJ23的耐酸性测试结果的曲线图。
[0036] 图5是示出新颖噬菌体?CJ23的耐热性测试结果的曲线图。
【具体实施方式】
[0037] 在下文中，将对本发明进行详细描述。因为所属领域或类似领域的技术人员可以 充分认识和推断出本说明书中未描述的内容，所以将省略其描述。
[0038] 详细地说，本发明的一个实施例提供一种具有针对禽病原性大肠杆菌（APEC)的 特异性杀菌活性的新颖噬菌体〇CJ23(KCCM11365P)。
[0039] 通过鸟类（如，鸡、鸭、火鸡等等）的呼吸道感染的大肠杆菌APEC通过呼吸道粘膜 渗透到鸟类体内以导致各种疾病，如败血症、肉芽肿、气囊炎、咽鼓管炎、关节炎等等。APEC 是类似于一般大肠杆菌的革兰氏阴性、杆状细菌，并且由于周毛鞭毛而具有活动性，并且是 分解乳糖或果糖以产生酸和气体的好氧或兼性厌氧细菌。
[0040] APEC在通用培养基中良好地生长并且可以在约7°C到48°C下生长，并且最佳生长 温度是约35°C到37°C。确切地说，毒性因子在约42°C下有效地表达（express)，所述温度 接近于鸟类的体温。另外，APEC可以在4. 5到9. 0的pH范围中生长。
[0041] 噬菌体是感染特异性细菌以遏制并且抑制细菌生长的细菌特异性病毒，并且意指 包含单股或双股脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid;DNA)或核糖核酸（ribonucleic acid;RNA)作为遗传物质的病毒。
[0042] 本发明的噬菌体ΦCJ23,其为选择性感染APEC的物种选择性噬菌体，具有等距衣 壳的结构，但未观察到尾部（图1)，并且在形态上属于短尾·菌体科（Podoviridae)。
[0043] 噬菌体?CJ23,其为由本发明人新分离的噬菌体，是在韩国微生物保藏中心 (KoreanCultureCentero