一种通过微量药敏试验对兽药或消毒剂的评价方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及兽药或消毒剂的评价方法，尤其是一种通过微量药敏试验对兽药或消毒剂的评价方法。
【背景技术】
[0002]目前，采购市场兽药及消毒药前，养殖场一般凭经验判断药物是否有效，这存在一定的不确定性，为养殖场疫病防治带来一定风险。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种通过微量药敏试验对兽药或消毒剂的评价方法，该方法简单、精确、快捷。
[0004]为实现上述目的，本发明的方法包括如下步骤:
[0005]一、上样菌液制备:
[0006]将水样中分离大肠杆菌，挑取单个菌落混于5mL的TSB中，37°C烘箱静置孵育2h，此时菌液混浊，取100 μ L菌液10倍稀释8?10个梯度，均匀涂于TSA中，37°C静置24h后计数，然后根据计数的菌液浓度调至105CFU/mL，用于上样菌液；
[0007]二、不同浓度消毒剂制备:
[0008]根据消毒剂上使用说明的最低使用浓度和最高使用浓度，倍比稀释实验用浓度需包含最低和最高使用浓度，分别为6个梯度:0.5倍，1倍，2倍，4倍，8倍，16倍最低浓度，单位为g/L或mL/L ；
[0009]三、上样孵育:
[0010]①将96微孔板中第1排前6孔分别加入6种不同浓度消毒剂100 μ L，第7孔加入上样菌液200 μ L作为阳性对照，第8孔加入该消毒剂200 μ L ;
[0011]②第1排前6孔再加入100 μ L上样菌液，致使每孔最终体系为200 μ L ;
[0012]③第2排作为第1排消毒剂的平行对照，其他消毒剂也同上述方式加样后，盖好板盖；然后置于37°C，静置孵育，分别于3?6h和12?24h各取4个点观察MIC及测定0D450值；
[0013]四、结果判定:
[0014]①MIC即最小抑菌浓度的比较:消毒剂的MIC与其使用说明中推荐浓度或最低使用浓度比较，若低于推荐浓度，则消毒剂效果较好，反之则较差；不同消毒剂MIC比较，MIC越低，但必须先小于推荐浓度，消毒剂效果越好；
[0015]②0D450抑菌趋势比较:对于MIC值相同消毒剂，通过0D450抑菌趋势，分析其抑菌作用时间及稳定性，判定优劣；
[0016]③有效抑菌浓度费用比较:根据有效抑菌浓度即MIC，比较各消毒剂稀释同样水量，所花费的费用；
[0017]最后，结合MIC和0D450抑菌趋势及有效抑菌浓度费用综合评比，选出最优消毒剂；
[0018]上述的mL是:毫升；yL是:微升；°(:是:摄氏度出是:小时；CFU/mL是:菌落形成单位/毫升；g/L是:克/升；mL/L是:毫升/升；TSA是:胰蛋白酶大豆琼脂；TSB是:胰蛋白酶大豆肉汤；MIC是:最小抑菌浓度；0D450是:450纳米时光密度值。
[0019]有益效果:
[0020]本发明通过微量药敏评价出高效或对于本养殖场有效药物，同时对疫情防治也能提供有效兽药。
[0021]本发明采用微量药敏试验对于养殖场防治疾病所用兽药或消毒剂进行实验室评价，为正确使用药物提供一定参考依据。
【具体实施方式】
[0022]实施例1:
[0023]这种通过微量药敏试验对兽药或消毒剂的评价方法，包括如下步骤:
[0024]—、上样菌液制备:
[0025]将水样中分离大肠杆菌，挑取单个菌落混于5mL的TSB中，37°C烘箱静置孵育2h，此时菌液混浊，取100 μ L菌液10倍稀释8个梯度，均匀涂于TSA中，37°C静置24h后计数，然后根据计数的菌液浓度调至105CFU/mL，用于上样菌液；
[0026]二、不同浓度消毒剂制备:
[0027]根据消毒剂上使用说明的最低使用浓度和最高使用浓度，倍比稀释实验用浓度需包含最低和最高使用浓度，分别为6个梯度:0.5倍，1倍，2倍，4倍，8倍，16倍最低浓度，单位为g/L或mL/L ；
[0028]三、上样孵育:
[0029]①将96微孔板中第1排前6孔分别加入6种不同浓度消毒剂100 μ L，第7孔加入上样菌液200 μ L作为阳性对照，第8孔加入该消毒剂200 μ L ;
[0030]②第1排前6孔再加入100 μ L上样菌液，致使每孔最终体系为200 μ L ;
[0031]③第2排作为第1排消毒剂的平行对照，其他消毒剂也同上述方式加样后，盖好板盖；然后置于37°C，静置孵育，分别于3h和12h各取4个点观察MIC及测定0D450值；
[0032]四、结果判定:
[0033]①MIC即最小抑菌浓度的比较:消毒剂的MIC与其使用说明中推荐浓度或最低使用浓度比较，若低于推荐浓度，则消毒剂效果较好，反之则较差；不同消毒剂MIC比较，MIC越低，但必须先小于推荐浓度，消毒剂效果越好；
[0034]②0D450抑菌趋势比较:对于MIC值相同消毒剂，通过0D450抑菌趋势，分析其抑菌作用时间及稳定性，判定优劣；
[0035]③有效抑菌浓度费用比较:根据有效抑菌浓度即MIC，比较各消毒剂稀释同样水量，所花费的费用；
[0036]最后，结合MIC和0D450抑菌趋势及有效抑菌浓度费用综合评比，选出最优消毒剂；
[0037]上述的mL是:毫升；μ L是:微升；°(:是:摄氏度；h是:小时；CFU/mL是:菌落形成单位/毫升；g/L是:克/升；mL/L是:毫升/升；TSA是:胰蛋白酶大豆琼脂；TSB是:胰蛋白酶大豆肉汤；MIC是:最小抑菌浓度；0D450是:450纳米时光密度值。
[0038]实施例2:
[0039]通过微量药敏试验对兽药或消毒剂的评价方法，包括如下步骤:
[0040]一、上样菌液制备:
[0041]将水样中分离大肠杆菌，挑取单个菌落混于5mL的TSB中，37°C烘箱静置孵育2h，此时菌液混浊，取100 μ L菌液10倍稀释10个梯度，均匀涂于TSA中，37°C静置24h后计数，然后根据计数的菌液浓度调至105CFU/mL，用于上样菌液；
[0042]二、不同浓度消毒剂制备:
[0043]根据消毒剂上使用说明的最低使用浓度和最高使用浓度，倍比稀释实验用浓度需包含最低和最高使用浓度，分别为6个梯度:0.5倍，1倍，2倍，4倍，8倍，16倍最低浓度，单位为g/L或mL/L ；
[0044]三、上样孵育:
[0045]①将96微孔板中第1排前6孔分别加入6种不同浓度消毒剂100 μ L，第7孔加入上样菌液200 μ L作为阳性对照，第8孔加入该消毒剂200 μ L ;
[0046]②第1排前6孔再加入100 μ L上样菌液，致使每孔最终体系为200 μ L ;
[0047]③第2排作为第1排消毒剂的平行对照，其他消毒剂也同上述方式加样后，盖好板盖；然后置于37°C，静置孵育，分别于6h和24h各取4个点观察MIC及测定0D450值；
[0048]四、结果判定:
[0049]①MIC即最小抑菌浓度的比较:消毒剂的MIC与其使用说明中推荐浓度或最低使用浓度比较，若低于推荐浓度，则消毒剂效果较好，反之则较差；不同消毒剂MIC比较，MIC越低，但必须先小于推荐浓度，消毒剂效果越好；
[0050]②0D450抑菌趋势比较:对于MIC值相同消毒剂，通过0D450抑菌趋势，分析其抑菌作用时间及稳定性，判定优劣；
[0051]③有效抑菌浓度费用比较:根据有效抑菌浓度即MIC，比较各消毒剂稀释同样水量，所花费的费用；
[0052]最后，结合MIC和0D450抑菌趋势及有效抑菌浓度费用综合评比，选出最优消毒剂；
[0053]上述的mL是:毫升；μ L是:微升；°(:是:摄氏度；h是:小时；CFU/mL是:菌落形成单位/毫升；g/L是:克/升；mL/L是:毫升/升；TSA是:胰蛋白酶大豆琼脂；TSB是:胰蛋白酶大豆肉汤；MIC是:最小抑菌浓度；0D450是:450纳米时光密度值。
【主权项】
1.一种通过微量药敏试验对兽药或消毒剂的评价方法，其特征在于:包括如下步骤: 一、上样菌液制备: 将水样中分离大肠杆菌，挑取单个菌落混于5mL的TSB中，37°C烘箱静置孵育2h，此时菌液混浊，取100 μ L菌液10倍稀释8?10个梯度，均匀涂于TSA中，37°C静置24h后计数，然后根据计数的菌液浓度调至105CFU/mL，用于上样菌液； 二、不同浓度消毒剂制备: 根据消毒剂上使用说明的最低使用浓度和最高使用浓度，倍比稀释实验用浓度需包含最低和最高使用浓度，分别为6个梯度:0.5倍，I倍，2倍，4倍，8倍，16倍最低浓度，单位为g/L 或 ml/I ； 三、上样孵育: ①将96微孔板中第I排前6孔分别加入6种不同浓度消毒剂100μ L，第7孔加入上样菌液200 μ L作为阳性对照，第8孔加入该消毒剂200 μ L ; ②第I排前6孔再加入100μ L上样菌液，致使每孔最终体系为200 μ L ; ③第2排作为第I排消毒剂的平行对照，其他消毒剂也同上述方式加样后，盖好板盖；然后置于37°C，静置孵育，分别于3?6h和12?24h各取4个点观察MIC及测定0D450值； 四、结果判定: ①MIC即最小抑菌浓度的比较:消毒剂的MIC与其使用说明中推荐浓度或最低使用浓度比较，若低于推荐浓度，则消毒剂效果较好，反之则较差；不同消毒剂MIC比较，MIC越低，但必须先小于推荐浓度，消毒剂效果越好； ②0D450抑菌趋势比较:对于MIC值相同消毒剂，通过0D450抑菌趋势，分析其抑菌作用时间及稳定性，判定优劣； ③有效抑菌浓度费用比较:根据有效抑菌浓度即MIC，比较各消毒剂稀释同样水量，所花费的费用； 最后，结合MIC和0D450抑菌趋势及有效抑菌浓度费用综合评比，选出最优消毒剂； 上述的mL是:毫升；μ L是:微升；V是:摄氏度；h是:小时；CFU/mL是:菌落形成单位/毫升；g/L是:克/升；mL/L是:毫升/升；TSA是:胰蛋白酶大豆琼脂；TSB是:胰蛋白酶大豆肉汤；MIC是:最小抑菌浓度；0D450是:450纳米时光密度值。
【专利摘要】本发明公开了一种通过微量药敏试验对兽药或消毒剂的评价方法，一、上样菌液制备；二、不同浓度消毒剂制备；三、上样孵育；四、结果判定：①MIC即最小抑菌浓度的比较②OD450抑菌趋势比较③有效抑菌浓度费用比较，最后，结合MIC和OD450抑菌趋势及有效抑菌浓度费用综合评比，选出最优消毒剂；本发明通过微量药敏评价出高效或对于本养殖场有效药物，同时对疫情防治也能提供有效兽药。本发明采用微量药敏试验对于养殖场防治疾病所用兽药或消毒剂进行实验室评价，为正确使用药物提供一定参考依据。
【IPC分类】C12Q1/18, C12R1/19
【公开号】CN105349616
【申请号】CN201510797094
【发明人】徐行, 喻正军
【申请人】广西扬翔农牧有限责任公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年11月19日