植物乳杆菌特异性培养基及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于领域微生物检测领域，涉及一种培养基及其对菌株进行活菌计数的方 法，具体地说是一种植物乳杆菌特异性培养基及其应用。
【背景技术】
[0002] 植物乳杆菌是乳酸杆菌中的一种，常存在于发酵的蔬菜和果汁中，多数是从植物 中分离得到，因此命名为植物乳杆菌。根据我国《可用于食品的菌种名单》，植物乳杆菌是可 用于食品的益生菌菌种之一，能够良好地耐受人体的胃酸和胆汁，发挥调节肠道菌群平衡 的作用。
[0003] 研究表明，植物乳杆菌具有增强机体免疫力、降低胆固醇、预防心血管疾病、调节 肠道菌群等益生保健功能。因此，植物乳杆菌已经被广泛的应用于食品中，特别是在酸奶 (乳饮料)、发酵香肠、面包和泡菜等食品中添加一定数量的植物乳杆菌，以使其对人体发挥 有益作用。为此，需要在成品(特别是酸奶、乳饮料）中检测植物乳杆菌的数量。
[0004] 我国国标中未规定植物乳杆菌的检测和计数方法，目前，对植物乳杆菌的鉴定或 定量检测方法主要为分子生物学的PCR或荧光定量PCR方法，如申请号为201210594264. 5 名称为"一种植物乳杆菌定量检测方法及其检测组分盒和应用"的中国发明专利申请，公开 了对植物乳杆菌进行定量检测的方法，是一种PCR检测技术，具体是提取待检样品总RNA反 转录为cDNA，采用特异性引物进行荧光定量PCR，通过比较待检样品的Ct值和定量外标准 品的标准曲线测定其中植物乳杆菌数量，该方法虽然出具结果较快，缺点是该方法需要精 密的仪器、昂贵的组分和高要求的操作人员。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题，是提供一种植物乳杆菌特异性培养基，它含有林可霉 素和碳源等物质，能够对发酵乳、乳酸菌饮料或菌粉中植物乳杆菌进行培养和特异性的计 数； 本发明还提供了利用上述植物乳杆菌特异性培养基的一种应用，用于对植物乳杆菌进 行活菌计数，计数方法简单，特异性高，相对于PCR的计数方法来说，对操作人员的要求降 低，成本降低。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是： 一种植物乳杆菌特异性培养基，按照重量份数计包含如下成分： 蛋白胨 5- 15份； 牛肉膏 5-15份； 酵母浸粉 2-10份； 碳源 10-30份； 林可霉素 0· 03X10 3-30X10 3份 乙酸钠 3-10份； 朽1檬酸二胺1-5份； 吐温-80 0. 5-2份； Κ2ΗΡ04 1-3 份； MgS04·7H20 0· 02-0. 07份； MnS04 · 7H20 0· 1-0.3 份； 琼脂 10-20份； 蒸馏水 1000份。
[0007] 作为限定： 所述碳源为山梨醇或甘露醇； 所述林可霉素的添加量为〇. 3X10 3-30X10 3重量份； 所述培养基于115_122°C下灭菌15-20min，培养基的pH为6. 2-6. 4。
[0008] 本发明还提供了前述植物乳杆菌特异性培养基的一种应用，它用于对植物乳杆菌 进行活菌计数，是将菌种在所述培养基上进行培养后，再对培养后的菌株进行平板计数。
[0009] 作为限定，培养温度为35-37°C培养时间为46-50h。
[0010] 由于采用了上述的技术方案，本发明与现有技术相比，所取得的技术进步在于： 本发明提供了一种植物乳杆菌特异性培养基，具有配置方便，成本低的特点，它含有林 可霉素和特定碳源等物质，林可霉素和特定碳源配合使用后，该培养基可对发酵乳、乳酸菌 饮料或菌粉中植物乳杆菌进行培养和特异性的计数； 本发明还提供了该植物乳杆菌特异性培养基的一种应用，用于对植物乳杆菌进行活菌 计数，计数方法简单，特异性高，相对于PCR的计数方法来说，对操作人员的要求降低，成本 降低。
[0011] 本发明适用于配置能对植物乳杆菌活菌数进行特异性计数的培养基，该培养基进 一步对添加有植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、保加利亚 乳杆菌、嗜热链球菌中的一种或几种菌种的饮料或奶制品中的植物乳杆菌活菌数进行特异 性检测。
【具体实施方式】
[0012] 下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0013] 下述实施例中所用的材料、组分等，如无特殊说明，均可从商业渠道得到。
[0014] 实施例1-6 -种植物乳杆菌特异性培养基 实施例1-6分别为一种植物乳杆菌特异性培养基，各自的组分和含量如表1所示，各自 的制备条件如表2所示。
[0015] 表1植物乳杆菌特异性培养基中所含的组分及其含量
表2植物乳杆菌特异性培养基的制备条件
上述实施例1-6中所提供的植物乳杆菌特异性培养基在培养基配制的过程中，除林可 霉素外的其它组分一起加入，在使用培养基时，先将培养基融化，待温度降至37-50°C时，再 添加林可霉素。
[0016] 上述植物乳杆菌特异性培养基配置方便，成本低，培养基中含有林可霉素和碳源 等物质，通过林可霉素和碳源配合使用，可对发酵乳、乳酸菌饮料或菌粉中植物乳杆菌进行 培养和特异性的计数。
[0017] 实施例7 -种对植物乳杆菌进行活菌计数的方法 实施例7是提供实施例1-6所提供植物乳杆菌特异性培养基的应用，也就是将不同菌 种(包含植物乳杆菌)分别在实施例1-6分别为所提供的植物乳杆菌特异性培养基上进行培 养，对培养后的菌株进行平板计数。
[0018] 检测样品为含有保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、乳双歧 杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的酸奶、乳酸菌饮料，具体的实验步骤如下： (1) 样品稀释 液体样品：液体样品摇匀用无菌吸管吸取样品25ml，置于225ml生理盐水中混匀，制成 1 :10的样品稀释液； (2) 取上述1:10的样品稀释液(样品匀液）lml，注入9ml生理盐水中，充分混勾，依次 逐级稀释至合适浓度； (3) 吸取上述不同浓度的样品0.lml置于已凝固的平皿中，用涂布棒进行涂布。至36°C 培养箱中培养48h，计数平板上的所有菌落。
[0019] 本实施例所提供的计数方法简单，相对于PCR的计数方法来说，对操作人员的要 求降低，成本降低。
[0020] 实施例8-10对植物乳杆菌进行活菌计数的方法 实施例8-10所提供的对植物乳杆菌进行活菌计数的方法与实施例7相同，不同之处仅 在于步骤（3)中培养箱中培养的温度和时间均与实施例7不同，具体是： 实施例8培养的温度为37°C，培养时间为46h; 实施例9培养的温度为35°C，培养时间为50h; 实施例10培养的温度为36°C，培养时间为49h。
[0021] 实施例8-10所提供的计数方法简单，相对于PCR的计数方法来说，对操作人员的 要求降低，成本降低。
[0022] 实施例8-10中不同菌种计数的结果如表3所示。
[0023] 表3不同菌种的计数结果
注：B:保加利亚乳杆菌，S:嗜热链球菌，G:干酪乳杆菌，Z:植物乳杆菌，SQ:乳双歧杆 菌，SS:嗜酸乳杆菌，SL:鼠李糖乳杆菌。
[0024]由表3可知，本发明所提供的植物乳杆菌特异性培养基可以对植物乳杆菌进行培 养和特异性的计数，计数过程简单，结果精确。
[0025] 实施例11不同菌株对不同糖利用实验探究 发酵乳中添加的菌株主要有保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、 植物乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌中的一种或几种，本实施例对发酵乳中的不同菌种 对不同糖利用进行实验，比较不同菌