的表皮干细胞培养液，分别向下方垫有膜过滤器（membranefilter)的96well 板分株后，向各分株的培养基上分株珠子（bead)混合物25μ1和结合有生物素（biotin) 的混合物（Biotin-ConjugateMixture,eBioscience) 50μ1。之后，在上方粘贴胶带后， 盖上银箱，遮光后，在常温（18-25°C)下，放在振动器（shaker)上，以500rpm反应2个小 时。之后，放入分析缓冲液（IX) 100后，进行真空洗涤，再反复一次后，用手纸擦拭底面， 去除剩余的水分。之后，分别分株分析缓冲液（IX)各100μ1后，把事先制造的链霉亲和 素（streptavidin)-PE溶液，分株各50μ1，进行混合后，上方粘贴胶带后，在上方粘贴胶带 后，盖上银箱，放在振动器（shaker)上，以500rpm反应1个小时。去除胶带后，把分析缓冲 液（IX)各分株200μ1后，通过移液管（tube)混合，各200μ1，移到1. 5ml管，进行稀释后， 向管（tube)加入分析缓冲液各100μΙ后，用手指轻拍，混合后，进行了FACS分析。结果如 图4及5所示。如图4及5所示，与皮肤细胞活性剂增殖相关的VEGF，按穿心莲萃取物及穿 心莲内酯的处理浓度，相伴升高。
[0100] 实施例6 :穿心莲萃取物及穿心莲内酯对人体皮肤的安全性检验试验
[0101] 6-1.含穿心莲萃取物或穿心莲内酯的皮肤外用剂的制造
[0102] 为了确认穿心莲萃取物或穿心莲内酯对人体皮肤是否安全，以如下表2的成分及 含量制造含有穿心莲萃取物或穿心莲内酯〇. 1重量％的皮肤外用剂后，进行如下皮肤安全 性验证试验。首先，向鲨烯（squalene)混合纯净水、甘醇、丁二醇，在70°C温度下溶解后（水 状组），把所述三种成分和除去三轻乙基胺（triethanolamine)的其他成分，在约70温度下 溶解（油状组）。之后，把油状组添加到水状组中，通过高速搅拌机（homomixer)(Tokushu Kika公司，日本）进行搅拌，进行1次油化后，最终添加三羟乙基胺。
[0103]【表2】
[0104] 123456 6-2皮肤累积刺激试验
2 通过以所述6-1方法制造的皮肤外用剂，以健康成年人30人为对象，在左上臂部 位，隔日总共涂抹9次，累积24小时，检测了穿心莲萃取物或穿心莲内酯是否对皮肤产生刺 激。作为对比群使用了角鲨烷加穿心莲萃取物及不含穿心莲内酯的皮肤外用剂。 3 皮肤过敏试验（patchtest)利用了芬恩室（Finnchamber,EpitestLtd,芬兰）， 在各室使用所述各皮肤外用剂15后，进行试验。对每次产生的反应程度，利用如下试验式 1加以分数化，结果如下表3所示。 4
[0108]【试验式1】 5 平均反应度= 6
[[反应指数X反应度/总受检人数X最高分数（4分）]X100]/检查次数
[0111] 这里，反应度中土为1分，+为2分+++为4分，平均反应度不到3时判定为安全 合成物。
[0112]【表3】
[0113]
[0114] 如上表3所示，对比群、试验群1及2的对应于土、+及++的人数分别为0人、0人、 〇人，都未出现皮肤反应。根据所述试验式1计算的结果，反应度分别为〇. 〇〇、〇.〇〇、〇. 〇〇， 都是3以下的反应度，被判定为安全合成物。
[0115] 下面，对本发明合成物的制剂例进行说明。
[0116] 制造例1:化妆材料的制造
[0117] 1-L柔软化妆水的制造
[0118] 如下表4,把作为有效成分含穿心莲萃取物或穿心莲内酯的柔软化妆水，以通常方 法制造。
[0119]【表4】
[0120]
1-2营养化妆水的制造
[0122] 以下表5所示的配比，通过常用方法，制造了作为有效成分含穿心莲萃取物或穿 心莲内酯的营养化妆水。
[0123] 【表5】
[0124]
[0129] 1-4按摩奶液的制造
[0130] 以下表7所示的配比，通过常用方法，制造了作为有效成分含穿心莲萃取物或穿 心莲内酯的按摩奶液。
[0131] 【表7】
[0132]
[0133] 1-5面膜的制造
[0134] 以下表8所示的配比，通过常用方法，制造了作为有效成分含穿心莲萃取物或穿 心莲内酯的面膜。
[0135] 【表8】
[0136]
[0137] 制造例2 :医药学制剂的制造
[0138] 2-1散剂的制造
[0139] 为了制造作为有效成分含穿心莲萃取物或穿心莲内酯的散剂，混合如下表9的成 分后，填充到如下气密袋内，制造了散剂。
[0140] 【表9】
[0141]
[0142] 2-2片剂的制造
[0143] 为了制造作为有效成分含穿心莲萃取物或穿心莲内酯的片剂，混合如下表10的 成分后，以一般的片剂制造方法，通过打片制造了片剂。
[0144]【表10】
[0145]
[0146] 2-3胶囊剂的制造
[0147] 为了制造作为有效成分含穿心莲萃取物或穿心莲内酯的胶囊剂，混合如下表11 的成分后，以通常的胶囊剂制造方法，向凝胶胶囊填充，制造了胶囊剂。
[0148]【表11】
[0149]
[0150] 制造例3:功能食品的制造
[0151] 3-1健康饮料的制造
[0152] 为了制造作为有效成分含穿心莲萃取物或穿心莲内酯的健康饮料，混合如下表12 的成分后，通过通常的健康饮料制造方法，在85条件下搅拌加热约1小时后，过滤所制作的 溶液，用灭菌容器收取，密封杀菌后，冷藏保管，制造了如下健康饮料。
[0153]【表12】
[0154]
[0155] 最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽 管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然 可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替 换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范 围。
【主权项】
1. 一种脂肪干细胞或表皮干细胞的干细胞性能增进用合成物，其特征在于：作为有效 成分含选自穿心莲萃取物，穿心莲内酯及穿心莲内酯的盐的某一种以上物质。2. -种皮肤细胞增殖用合成物，其特征在于：作为有效成分含选自穿心莲萃取物，穿 心莲内酯及穿心莲内酯的盐的某一种以上物质。3. -种皮肤状态改善用化妆材料合成物，其特征在于：含权利要求1或权利要求2的 合成物。4. 根据权利要求3所述的皮肤状态改善用化妆材料合成物，其特征在于： 所述皮肤状态的改善是指对皮肤皱纹的改善，对皮肤老化的抑制，对皮肤弹力的改善， 皮肤再生，或对皮肤表皮出现的伤口或伤疤的改善。5. -种皮肤状态改善用医药学合成物，其特征在于：含权利要求1或权利要求2的合 成物。6. 根据权利要求5所述的皮肤状态改善用医药学合成物，其特征在于： 所述皮肤状态的改善是指对皮肤皱纹的改善，对皮肤老化的抑制，对皮肤弹力的改善， 皮肤再生，或对皮肤表皮出现的伤口或伤疤的改善。7. -种皮肤状态改善用食品合成物，其特征在于：含权利要求1或权利要求2的合成 物。8. -种把选自穿心莲萃取物、穿心莲内酯及穿心莲内酯的盐的某一种以上物质投入到 个体，让存在于个体皮肤的脂肪干细胞、皮肤干细胞或皮肤细胞中的某一种以上细胞活性 得到提高的方法。9. 一种把含选自穿心莲萃取物、穿心莲内酯及穿心莲内酯的盐的某一种以上物质的皮 肤状态改善用合成物投入到个体，让存在于个体皮肤的脂肪干细胞、皮肤干细胞或皮肤细 胞中的某一种以上细胞活性得到提高，对个体的皮肤状态进行改进或抑制的方法。
【专利摘要】本发明涉及含穿心莲萃取物或穿心莲内酯或其盐的皮肤细胞增殖用合成物，及还所述合成物的皮肤状态改善用合成物。本发明所述合成物引发干细胞和皮肤细胞分泌生长因子(growth？factor)，促进细胞增殖。本发明的所述合成物可以改善皮肤皱纹、抑制皮肤老化、改善皮肤弹力、提高皮肤再生能力、提高治愈伤口及伤疤等，有皮肤状态改善效果。
【IPC分类】C12N5/02, A61K8/97, C12N5/0775
【公开号】CN105358676
【申请号】CN201480000256
【发明人】李宰昊, 刘指宁, 郑恩善, 朴德勋, 李子丹, 刘光荣, 唐健
【申请人】韩国百鸥思特公司, 无限极（中国）有限公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2014年4月14日
【公告号】WO2015156439A1