t.No. 56404)之层析管柱；其操作 步骤是依循其产品使用说明，故不在此详述，最终步骤是W60μ1ATE缓冲液分别冲提并取 得大型、中型、小型样本之核酸产物。
[0071] 根据上述实验例2与对照例2所得之核酸产物，进一步检测其浓度与核酸质量，其 结果列示于表1。由表1可知，无论是大型、中型、小型样本，使用本发明之避免交叉污染的 生物样本处理装置所得之核酸产物浓度均高于人工前处理；就特定波长吸光值（0D)之比 例（0D260/280)而言，核酸产物（DNA)质量同于对照之组别（小型样本）或略优于对照之组 另IJ(大型、中型样本）；就特定波长吸光值（0D)之比例（0D260/230)而言，自动化前处理组 别之有机溶剂的残量状况近似于人工前处理组别。W上数据显示使用本发明之避免交叉污 染的生物样本处理装置，确实适用于自动化核酸萃取，并可有效取得浓度高而质量亦佳之 核酸产物。
[0072] 表1.核酸产物检测结果
根据上述实验例2与对照例2所得之核酸产物，进一步W聚合酶连锁反应（W下简称PCR)方法，扩增稳定表现基因GADPH的DNA，确认其质量是否适用于后续分析，相关结果如 图12所示。参见图12,根据实验例2与对照例2 :对大型样本分离取得之核酸产物PCR检 测结果12a显示；对中型样本分离取得之核酸产物PCR检测结果12b显示；对小型样本分 离取得之核酸产物PCR检测结果1化显示。其中，针对大型样本，W人工前处理之电泳结果 M5与自动化前处理之电泳结果A5表现相似，惟前者稍弱于后者；针对中型样本，W人工前 处理之电泳结果M6显示其未产出PCR产物，而自动化前处理之电泳结果A6则显示其产出 PCR产物；针对小型样本，W人工前处理之电泳结果M7显示其未产出PCR产物，而自动化前 处理之电泳结果A7则显示其产出PCR产物。由此可见，使由本发明之自动化前处理方法所 得之核酸质量良好，足W直接用于后续的分析，而人工前处理之组别虽然可测得核酸浓度， 却无法顺利产出PCR产物，显示其质量仍不足W直接使用于核酸分析，需要额外加工或纯 化方可使用。 阳07引除了前述萃取DM之实施内容外，本发明亦适用于萃取RNA，W下列举实验例3与 对照例3说明采用本发明之避免交叉污染的生物样本处理装置萃取RNA之具体内容。W下 实验例3与对照例3是W管柱吸附法(层析管柱分离方法)进行RNA分离，是采用QIAGEN核 酸纯化套组（QIAGEN;RNeasyFFPEKit;Cat.No. 73504)之层析管柱；其操作步骤是依循 产品说明，不详述于此。
[0074]实验例3: 首先，将FFPE样本折成数等分（每段不大于0. 5公分）尽可能不折断置入本发明之避 免交叉污染的生物样本处理装置中，旋紧盖体，由本装置之吸管端汲取裂解液试剂。此裂解 液试剂是由400μ1二甲苯、150μ1P邸缓冲液与10μ1蛋白酶K(proteinaseK)混合而 成。接着，于56°C环境下加热并进行吸吐混合1小时，再接着，在90°C环境下加热并吸 吐混合1小时，之后将所有液体吸至避免交叉污染的生物样本处理装置中于室溫静置10分 钟，可观察到混合液开始产生分层现象，由本装置之吸管端将下层之水层中之粗萃取液约 140μ1移入新的试管槽后，残留组织则留在避免交叉污染的生物样本处理装置中。接着，于 冰上静置3分钟，接着加入水层总体积十分之一体积的DNA酶缓冲液W及10μ1的DNA酶 原液，上下翻转微量离屯、管W混合均匀，于室溫静置15分。加入320μ1RBC缓冲液混合均 匀后，再加入1200μ1 100%化0Η，并将所有的样本混合液加入层析管柱中，最终步骤是W 60μ1RNase-化ee纯水冲提取得核酸产物。 阳07引对照例3 : 首先，将将FFPE样本折成数等分（每段不大于0. 5公分）尽可能不折断置入微量离屯、 管，加入裂解液。此裂解液试剂是由400μ1二甲苯、150μ1P邸缓冲液与10μ1蛋白酶K (proteinaseΚ)混合而成。接着，加W震荡混合10秒钟，取得一混合液。之后进行加热步 骤，是将前述混合液于56°C环境下加热15分之后，于室溫下稍加静置，同时可将加热器升 溫至80°C，待加热器溫度完成，于80°C环境下加热混合液达15分。加热时，管柱内会产 生水气，因此可稍微短暂离屯、将水气离下至混合液中。于此步骤时，可观察到混合液开始产 生分层现象，上层为有机层，下层为水层，而残留组织则留在水层之中。接着，W移液管吸取 下层之水层中之粗萃取液约140μ1移入新的微量离屯、管后，于冰上静置3分钟，接着加入 总水相液层总体积十分之一体积的DNA酶缓冲液W及10μ1的DNA酶原液，上下翻转微量 离屯、管W混合均匀，于室溫静置15分。加入320μ1RBC溶液混合均匀后，再加入1200μ1 100%化0Η，并将所有的样本混合液加入层析管柱中，最终步骤是W60μ1RNase-化ee纯水 冲提取得核酸产物。
[0076] 根据前述本发明之避免交叉污染的生物样本处理装置，提供了一种可直接应用于 现有自动化核酸萃取设备之避免交叉污染的生物样本处理装置，除可W有效提升效能，并 更能有效地大幅减低既有技术与人工操作可能衍生之气雾（aerosol)形成、交叉污染、感染 危害等不良效应。
[0077] 虽然本发明已将各种较佳实施例掲露如前述，然其并非用W限定本发明，任何熟 习本领域技艺者，在不脱离本发明之精神和范围内，当可作些许之更动与润饰，因此本发明 之专利保护范围须视本说明书所附之申请专利范围所界定者为准。
【主权项】
1. 一种避免交叉污染的生物样本处理装置（100)，其特征在于：一管柱（1030)，具有 一第一管体部（10)及一第二管体部（30)，所述管柱（1030)为中空且两端开放，使所述管 柱（1030)内形成一流道，且所述第一管体部（10)之一开放端缘形成一第一开口（11)，所 述第二管体部（30)之一开放端缘形成一第二开口（33)，其中，所述管柱（1030)之内径沿 一轴向方向自所述第一开口（11)向所述第二开口（33)逐渐缩减，使所述第一管体部（10) 之平均内径大于所述第二管体部（30)之平均内径；一盖体（20)，是同轴设置于所述第一 开口（11)以连接所述第一管体部（10)，所述盖体（20)于一端形成一顶盖部（203)并于相 对所述顶盖部（203)的另一端形成一底板（2010)且于所述底板（2010)上具有一穿透孔 (2011);以及 一托座（60)，同轴设置所述流道中，用于托持一生物样本；其中，所述托座（60)具有复 数通孔（6010)，供一试剂通过所述通孔，使所述试剂于所述流道内往复流通。2. 根据权利要求1所述之避免交叉污染的生物样本处理装置（100)，其特征在于，所述 顶盖部（203)与所述底板（2010)间形成一中空内栓（201)，所述中空内栓（201)由所述第 一开口（11)同轴置入所述第一管体部（10)中。3. 根据权利要求2所述之避免交叉污染的生物样本处理装置（100)，其特征在于，所述 顶盖（203)之中央形成一顶盖孔（2030)，所述中空内栓（201)与所述顶盖孔（2030)形成一 气道（204)，且所述气道（204)与所述流道相互连通。4. 根据权利要求1所述之避免交叉污染的生物样本处理装置（100)，其特征在于，所述 盖体（20)与所述第一管体部（10)之间是以螺纹、卡榫或啮合连接。5. 根据权利要求3所述之避免交叉污染的生物样本处理装置，其特征在于，所述气道 (204)内同轴设置一阻隔件（40)，用以封闭并阻隔所述试剂流向所述第一开口（11)。6. 根据权利要求5所述之避免交叉污染的生物样本处理装置，其特征在于，所述阻隔 件（40)的材质是由下列组合中选出，包括海棉、滤棉、防尘棉、透气滤膜等材质。7. 根据权利要求1所述之避免交叉污染的生物样本处理装置（100)，其特征在于，所述 托座(60)上的所述通孔(6010)为几何形状。8. 根据权利要求1所述之避免交叉污染的生物样本处理装置（100)，其特征在于，所述 托座(60)为一圆盘状之托座（607)且在所述托座（607)周缘形成向上突起之肩部(6074)。9. 根据权利要求1所述之避免交叉污染的生物样本处理装置（100)，其特征在于，所述 托座(60)为一圆盘状之托座（608)且所述托座（608)之托座侧壁(6081)为弧形托座侧壁 (6081) 〇10. 根据权利要求9所述之避免交叉污染的生物样本处理装置（100)，其特征在于，所 述托座（608)之所述弧形托座侧壁(6081)上进一步配置一密封环。
【专利摘要】本发明公开了一种避免交叉污染的生物样本处理装置，包含：管柱，具有第一及第二管体部，所述管柱为中空且两端开放，使管柱内形成一流道，且所述第一管体部之一开放端缘形成第一开口，所述第二管体部之一开放端缘形成第二开口，其中，管柱之内径沿轴向方向自所述第一开口向所述第二开口逐渐缩减；盖体，同轴设置于所述第一开口以连接第一管体部，盖体于一端形成一顶盖部并于相对顶盖部的另一端形成一底板且于底板上具有穿透孔；以及托座，用于托持一生物样本；其中，所述托座具有复数通孔，供一试剂通过该些通孔，使所述试剂于所述流道内往复流通。本发明所公开的避免交叉污染的生物样本处理装置适用于自动化核酸萃取，以提高整体效能与质量。
【IPC分类】C12M1/00
【公开号】CN105368697
【申请号】CN201410403020
【发明人】钟挺豪, 吕秋莹, 林旻仪, 官振群
【申请人】冠研（上海）企业管理咨询有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2014年8月15日