一种黑色素细胞激素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及一种制备黑色素细胞激素的方法。
【背景技术】
[0002]黑色素细胞激素(MSH)，是在1916年，从切除蛙的脑下垂体后，其表皮色素细胞及细胞内色素均减少的变化中发现的。1932年进一步证明对色素细胞有影响的一种激素，存在于脑下垂体的中叶。后来，临床报告长期使用ACTH制品有引起皮肤黑色素沉着的作用，引起了人们的重视和深入的研究。
[0003]MSH来源于脑下垂体主要作用是促进皮肤黑色素细胞分泌黑色素，使皮肤变黑，对于皮肤、头发的黑色素缺乏症有显著地疗效。据称，MSH能游离脂肪组织的的脂肪酸，改善人的视觉。
[0004]经专利检索，并没有黑色素细胞激素制备方法方面的专利文献。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供了一种黑色素细胞激素的制备方法。
[0006]本发明的技术方案是:将哺乳动物脑垂体经脱水干燥、取垂体前叶研磨成粉后，经有机溶剂、无机酸两次提取，过滤去杂蛋白等步骤得黑色素细胞激素，包括如下步骤:
(1)原料处理:将猪脑垂体取出后，立即投入丙酮中，浸泡脱水3~5次，每次约24小时，至脑垂体变硬为止，分离前叶，真空干燥，磨粉，得前叶干粉；
(2)一次提取:取前叶干粉，按1:5-1:10的比例加入丙酮，再按1:2-1:5的比例，加入
0.5 mol / L~5 mol / L盐酸溶液，搅拌溶解，加热至40°C ~60°C，保温20~40分钟，然后冷却至10~25°C，离心20~40分钟，过滤，取上清液，上清液预冷至1~5°C ；
(3)二次提取:将一次提取中的渣子再加入步骤(2)—半量的丙酮0.05 mol / L~0.5mol / L盐酸溶液，搅拌溶解，加热至40°C -60°C，保温20~40分钟，然后冷却至10~25°C，离心20~40分钟，去渣过滤，取上清液；
(4)沉淀:合并两次上清液，将上清液冷却至1~5°C，过滤至澄清；加入5~10倍量体积的丙酮，沉淀10~30分钟后，去上清液，立即用丙酮洗涤去除沉淀物上的上清液，沉淀物用无水丙酮脱水洗涤2~5次；
(5)干燥:真空干燥，即得黑色素细胞激素。
[0007]本发明的优点和积极效果:
本制备方法的的优势之处在于，工艺简单，成本低，过程温和，制得的黑色素细胞激素的效价达到3单位/mg。
【具体实施方式】
[0008]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0009]实施例1 所述的利用将哺乳动物脑垂体经脱水干燥、研磨成粉后，经有机溶剂、无机酸两次提取，去杂蛋白过滤等步骤得黑色素细胞激素，包括如下步骤:
(1)原料处理:将猪脑垂体取出后，立即投入丙酮中，浸泡脱水3次，每次约24小时，至脑垂体变硬为止，分离前叶，分别干燥，磨粉，得前叶干粉；
(2)—次提取:取3.2kg前叶干粉，加入22.4L丙酮，在搅拌下加入10L的1 mol / L盐酸溶液，搅拌溶解后，加热至50°C，保温28分钟，然后冷却至18°C，离心30分钟，过滤，取上清液，上清液预冷至:TC ;
(3)二次提取:将一次提取中的渣子加入11.2L丙酮，搅拌下加入5L的0.1 mol / L盐酸溶液，搅拌溶解后，加热至50°C，保温30分钟，然后冷却至20°C，离心25分钟，过滤，取上清液；
(4)沉淀:合并两次上清液，将上清液冷却至3°C，过滤至澄清；加入336L丙酮，沉淀15分钟后，吸出上清液，立即用丙酮洗涤去除沉淀物上的上清液，沉淀物用无水丙酮脱水洗涤3次；
(5)干燥:真空干燥，天平称重即得黑色素细胞激素成品230g。
[0010]实施例2
(1)原料处理:将猪脑垂体取出后，立即投入丙酮中，浸泡脱水4次，每次约24小时，至脑垂体变硬为止，分离前叶，分别干燥，磨粉，得前叶干粉；
(2)—次提取:取3.6kg前叶干粉，加入21.6L丙酮，在搅拌下加入8L的1 mol / L盐酸溶液，搅拌溶解后，加热至40°C，保温35分钟，然后冷却至25°C，离心20分钟，过滤，取上清液，上清液预冷至2 °C ;
(3)二次提取:将一次提取中的渣子加入10.8L丙酮，搅拌下加入4L的0.1 mol / L盐酸溶液，搅拌溶解后，加热至40°C，保温35分钟，然后冷却至20°C，离心20分钟，过滤，取上清液；
(4)沉淀:合并两次上清液，将上清液冷却至2°C，过滤至澄清；加入200L丙酮，沉淀20分钟后，吸出上清液，立即用丙酮洗涤去除沉淀物上的上清液，沉淀物用无水丙酮脱水洗涤5次；
(5)干燥:真空干燥，天平称重即得黑色素细胞激素成品248g。
[0011]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
【主权项】
1.一种黑色素细胞激素的制备方法，其特征在于:将哺乳动物脑垂体前叶经脱水干燥、研磨成粉后，经有机溶剂、无机酸两次提取，过滤去杂蛋白等步骤，得黑色素细胞激素。2.根据权利要求1所述的制备黑色素细胞激素的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤: 原料处理:将哺乳动物的脑垂体取出后，用丙酮浸泡脱水，至垂体变硬，分离出前叶；真空干燥，磨粉； (2)—次提取:取前叶干粉，加入有机溶剂、无机酸，搅拌溶解，然后加热、保温、冷却，离心过滤取上清液； (3)二次提取:将一次提取中的渣子再次加入步骤(2) —半量的有机溶剂和无机酸，搅拌溶解，然后加热、保温、冷却，离心过滤取上清液，预冷； (4)沉淀:合并两次上清液，冷却，过滤，加入有机溶剂进行沉淀，沉淀完成后，去上清液，沉淀物用无水丙酮脱水洗涤； (5)干燥:真空干燥，得黑色素细胞激素。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(1)中，所述的哺乳动物为猪、狗、牛、羊、马中的一种，优选为猪、牛、羊。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(2)中，有机溶剂为丙酮，前叶干粉与有机溶剂的重量比为1:5至1:10 ;无机酸为0.5 mol / L~5 mol / L盐酸溶液，前叶干粉与无机酸的重量比为1:2至1:5。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(2)、步骤(3)中，加热至40°C~60°C，保温20~40分钟，然后冷却至10°C ~25°C，离心过滤上清液预冷至1~5°C。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤(4)上清液冷却至1~5°C;用有机溶剂丙酮沉淀，上清液与丙酮的体积比例为1:5至1:10，沉淀10~30分钟。7.一种由权利要求1-6任意之一所述的方法制备得到的黑色素细胞激素。
【专利摘要】本发明公开了一种以哺乳动物脑垂体前叶为原料，提取黑色素细胞激素的制备方法。将哺乳动物脑垂体前叶经干燥、研磨成粉后，添加有机溶剂、无机酸提取，过滤去杂蛋白等步骤，得到黑色素细胞激素。该技术的优点在于操作简单，成本低，产品的效价达到3单位/mg。
【IPC分类】C07K1/36, C07K1/30, C07K1/34, C07K14/68
【公开号】CN105384810
【申请号】CN201510826532
【发明人】刘乃山, 赵叶华, 刘翠珍
【申请人】青岛康原药业有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年11月25日