miR143及其诱导物LTA在制备抑制痤疮炎症药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明设及生命医学研究领域，具体设及SEQ ID N0.1所示miR143及其诱导物式
[1] 所示LTA在制备抗瘦疮炎症的药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 瘦疮是毛囊皮脂腺部位的一种慢性炎症性皮肤病，是一种非常常见的皮肤病。瘦 疮部位炎症因子TNF-a表达量明显高于正常皮肤，而且瘦疮部位通常表现为红肿。瘦疮与皮 肤表面的瘦疮丙酸杆菌(P.acnes)的生长有关。瘦疮丙酸杆菌是一种生长缓慢的革兰氏阳 性厌氧菌，一般寄居在毛囊及脂腺皮肤上，会产生分解皮肤和免疫原性蛋白的酶，可引起皮 肤的持续慢性炎症反应。青春期阶段由于皮脂腺分泌能力明显增强，皮脂中含有较多脂肪 酸等成分，非常适合瘦疮丙酸杆菌的生长及繁殖，因而成为瘦疮的高发期。
[0003] 葡萄球菌是人体皮肤上最常见的共生菌，它对调节皮肤炎症，维持皮肤的稳态有 着非常重要的作用。脂憐壁酸化TA)是葡萄球菌一个非常重要的成分，是由核糖醇或甘油残 基经由憐酸二脂健相互连接形成的酸性多糖。葡萄球菌的LTA能抑制化R3介导的伤口炎症 反应。而瘦疮是由瘦疮丙酸杆菌感染皮肤后引起的持续炎症，其炎症的发生主要是由瘦疮 丙酸杆菌通过激活化R2来诱导炎症因子表达，与皮肤伤口上的炎症反应具有截然不同的诱 导机制。另外，葡萄球菌的LTA是否能抑制瘦疮丙酸杆菌感染皮肤后激活化R2而引起的持续 炎症还未见报道。
[0004] miRNA是一类约为22nt核巧酸的非编码小RNA，发挥基因转录后表达调控的功能。 miRNA与炎症调节密切相关。人成纤维细胞的miR146a可负调节衰老相关炎症因子TNF-a、 比-6与比-8的表达，角质形成细胞中的miR146a也可负调节化R2依赖性炎症应答。miR143还 通过抑制TLR2的表达抑制了人结肠癌细胞的迁移和浸润。在食物诱导的肥胖模型中 miR12化与miR143的表达量下降。但是miRNA是否参与对P.acnes诱导的炎症因子TNF-a的调 节作用还未见报道。
【发明内容】
[0005] 本发明首次公开提出了一种miR143,其可由皮肤共生表皮葡萄球菌的脂憐壁酸诱 导角质形成细胞产生;所述miR143的核巧酸序列如SEQ ID N0.1所示：
[0006] gcgc曰gcgcc cugucuccc曰 gccug曰ggug c曰gugcugc曰 ucucugguc曰 guuggg曰guc
[0007] ug曰g曰ug曰曰g c曰cugu曰gcu c曰gg曰曰g曰g曰g曰曰guuguuc ugc曰gc;
[000引本发明提出了如SEQ ID NO. 1所示miR143在制备抑制瘦疮炎症的药物中的应用。 [0009]本发明所述"瘦疮炎症"指的是由瘦疮丙酸杆菌感染后引起的皮肤炎症。
[0010] 本发明提出了如SEQ ID N0.1所示miR143在制备抑制P.acnes引起的皮肤炎症的 药物中的应用，所述miR143能够减轻瘦疮的炎症程度。在具体实施方案中，体外实验表明， P.acnes可W诱导角质形成细胞大量炎症因子TNF-a和IL-6的表达，而超表达miR143能够抑 审化.acnes诱导角质形成细胞的炎症因子TNF-a和IL-6的表达。
[0011] 所述miR143可人工合成，或由皮肤共生菌葡萄球菌脂憐壁酸诱导，其中，所述皮肤 共生表皮葡萄球菌的脂憐壁酸结构如式(I)所示：
[0012]
[001引式（I)中，
[0014] m，n为脂肪酸链长度，C原子数一般为C14-C19之间；
[0015] X为多聚化程度，在45-50之间；
[0016] R为甘油残基类型，葡萄糖类型占15% ;D型丙氨酸占70%;径基占15%。
[0017]所述miR143通过直接祀向TLR2的3'UTR来抑制TLR2的表达，从而抑制皮肤炎症反 应。
[001引本发明还提出了如SEQ ID N0.1所示miR143在抑制化R2中的应用，所述如SEQ ID NO. 1所示miRl 43通过作用于TLR2的3 ' UTR抑制TLR2蛋白表达可W抑制皮肤炎症反应。
[0019] 本发明还提出了一种皮肤共生葡萄球菌的脂憐壁酸化TA)在制备诱导SEQ ID NO. 1所示miR143的表达的药物中的应用;所述脂憐壁酸结构如式(I)所示：
[0020]
[0021] 式(1)中，
[0022] m，n为脂肪酸链长度，C原子数一般为C14-C19之间；
[0023] X为多聚化程度，在45-50之间；
[0024] R为甘油残基类型，葡萄糖类型占15% ;D型丙氨酸占70%;径基占15%。
[0025] 其中，所述miR143可抑制瘦疮炎症；具体地，所述miR143可抑制由P.acnes引起的 皮肤炎症反应，减轻瘦疮的炎症程度。在一个具体实施方案中，体外实验表明P.acnes诱导 角质形成细胞大量炎症因子TNF-α和IL-6的表达，LTA通过诱导如SEQ ID NO.l所示miR143 的表达从而抑制了 P.acnes诱导角质形成细胞的炎症因子TNF-α和IL-6的表达。体内实验表 明LTA明显抑制了炎症因子mTNF-a和mIL-6的表达，而在体内用antigomir抑制miR143后， LTA就不能抑制P. acnes诱导的皮肤炎症。
[0026] 本发明所述"皮肤炎症"指的是由瘦疮丙酸杆菌感染后引起的皮肤炎症。
[0027] 本发明还提出了如式（I)所示脂憐壁酸化TA)在制备抑制瘦疮炎症的药物中的应 用。
[0028] 本发明还提出了如式（I)所示脂憐壁酸化TA)在制备抑制P.acnes引起的皮肤炎症 的药物中的应用，所述miR143能够减轻瘦疮的炎症程度。在具体实施方案中，体外实验表 明，P.acnes可W诱导角质形成细胞大量炎症因子TNF-a和IL-6的表达，而超表达miR143能 够抑制P.acnes诱导角质形成细胞的炎症因子TNF-a和IL-6的表达。
[0029] 其中，所述皮肤共生菌葡萄球菌的脂憐壁酸可W诱导miR143的表达，进而可W抑 制瘦疮炎症。
[0030] 其中，所述miR143通过直接祀向化R2的3'UTR来抑制化R2的表达，从而抑制皮肤炎 症反应。
[0031] 本发明还提出了皮肤共生菌葡萄球菌LTA在抑制化R2中的应用，所述皮肤共生菌 葡萄球菌LTA诱导的如SEQ ID N0.1所示miR143是通过作用于TLR2来抑制皮肤炎症反应。具 体实施方案中，在野生型(Tlr2+/+)和Tlr2基因敲除上同时检测LTA对P.acnes诱导 的炎症作用，结果表明在Tlr2+/+小鼠上，LTA明显抑制P.acnes诱导的炎症因子TNF-a和IL-6 的表达;而在鼠上LTA不能起抗炎症的作用。
[0032] 本发明SEQ ID N0.1所示miR143抑制P.acnes引起的皮肤炎症的机制是:miR143通 过直接祀向TLR2的3 ' UTR来抑制TLR2的表达，从而抑制皮肤炎症反应。
[0033] 本发明提出了一种皮肤炎症用抑制剂，其含有SEQ ID N0.1所示miR143或/和式 (I)所示诱导物LTA。优选地，所述皮肤炎症用抑制剂含有有效量的所述SEQ ID NO. 1所示 miR143或/和式（I)所示诱导物LTA，其含量分别为0.01-99.9%。
[0034] 本发明还提出了一种药物组合物，其含有SEQ ID N0.1所示miR143。优选地，所述 药物组合物含有有效量的56〇10^.1所示11111?143，其含量为0.01-99.9%。
[0035] 进一步地，所述药物组合物含有药学上可接受的载体或赋形剂等。所述载体和/或 赋形剂包括但不限于:盐水、缓冲液、葡萄糖、水、及其组合等。药物组合物可与给药方式相 匹配，包括片剂、丸剂、脂质体、胶囊剂、溶液、针剂、颗粒、其他固体或液体等，W常规方法制 备。所述药物组合物可通过口服、肠胃外、吸入式喷雾或通过植入式胆存器给药。"肠胃外" 包括皮下、皮内、静脉内、肌肉内、关节内、动脉内、滑膜腔内、胸骨内、銷内、病灶内或输入技 术。口服可用固体或液体状的剂量单位，如末剂、散剂、片剂、糖衣剂、胶囊剂、颗粒剂、悬浮 剂、溶液剂、糖浆剂、滴剂、舌下含片等剂型进行给药。末剂是将本发明药物组合物磨成适当 额细度而制成。散剂是将本发明化合物磨成适当的细度，然后与同样细度的药用载体(如载 体、甘露糖醇之类可食性碳水化合物等)混合制成。根据需要，也可混入矫味剂、防腐剂、分 散剂、着色剂、香料等物质。胶囊剂是将如上所述制成粉末状的末剂或片剂部分所述的颗粒 化的物质填充到明胶胶囊外壳中而制成。也可W将润滑剂和助流剂等混合到粉末状物质 中，然后在胶囊中进行填充操作。若添加助溶剂和崩解剂等，如聚乙二醇，碳酸钢，可改善胶 囊摄取时的药效。
[0036] 进一步地，所述药物组合物包括但不限于:式（I)所示LTA。
[0037] 本发明还提出了一种护肤用品，其含有SEQ ID N0.1所示miR143。优选地，所述护 肤用品中含有有效量的沈Q ID NO. 1所示miR143,其含量为0.01-99.9%。
[0038] 进一步地，所述护肤用品包括但不限于:式（I)所示LTA、甘油。
[0039] 本发明的有益效果在于，所述SEQ ID N0.1所示miR143可W抑制炎症因子TNF-a和 IL-6的表达，减轻瘦疮的炎症程度。所述如式（I)所示脂憐壁酸化TA)能够诱导SEQ ID N0.1 所示miR143的表达，进而抑制炎症因子TNF-a和IL-6的表达，减轻瘦疮的炎症程度。
[0040] 本发明的所设及的术语：
[0041] LTA为脂憐壁酸，指皮肤共生葡萄球菌的脂憐壁酸；
[0042] NC为化gative Control,指阴性对照组；
[0043] PA为P. acnes，指瘦疮丙酸杆菌处理组；
[0044] An1:a 为 an1:agomi;r，指 miR143 的抑制剂 an1:agomi;r 处理组；
[0045] TLR2为Toll 1 化e receptor 2,指Toll样受体2;
[0046] 3'UTR为mRNA3'端非翻译区
[0047] TNF-a为tumor necrosis factor al地a，即肿瘤坏死因子曰 [004引 IL-6为Interleukin 6,即白细胞介素6
[0049] HEK为人角质形成细胞
[00加]real-time RT-PCR为实时巧光定量反转录PCR [0化1 ] PBS为憐酸盐缓冲液
【附图说明】
[0052] 图1表示miR143抑制P.acnes诱导的皮肤角质形成细胞炎症因子TNF-a和IL-6的表 达。
[0化3] 图2表示LTA诱导miR143的表达。
[0化4] 图3表示LTA抑制P.acnes诱导的皮肤角质形成细胞炎症因子TNF-a和IL-6的表达。 [0化日]图4表示LTA抑制P.acnes诱导的小鼠耳部组织炎症因子TNF-a和IL-6的表达。
[0化6] 图5表示miR143直接祀向TLR2的3'UTR来抑制TLR2的表达。
[0057] 图6表示LTA对Tlr2+/+和Tlr2-/-小鼠上P.acnes诱导的皮肤炎症因子TNF-a和IL-6 的表达影响。
[0化引图7表示将体内miR143用其antagomir抑制后，LTA不能抑制P.acnes诱导的皮肤炎 症及其因子TNF-a和IL-6的表达。
【具体实施方式】
[0059]结合W下具体实施例和附图，本发明作进一步详细