这些神经变性疾病或障碍的症状中的效用。已显示，神经胶质细胞在神经变性疾病肌萎缩性侧索硬化(ALS)的发病机理中发挥重要作用(Howland等，PNAS 99，1105，1995!Clement等，Science 302，113，2003;Rothstein等，Ann.Neurol.38，73，1995)。星形细胞在CNS中发挥重要功能，包括脑血管的调控、突触传递的调节(例如谷氨酸转运)以及其它效应，包括释放生长因子和为神经元以及神经胶质提供营养支持。神经胶质细胞也可以降低或阻止在许多神经变性疾病中引起有害效应的反应性星形细胞的形成，并且神经胶质细胞可以降低例如在脊髓损伤和几种神经变性疾病中发生的神经胶质瘢痕形成的水平。此外已证实，将随后分化成星形细胞的正常神经胶质细胞移植到ALS大鼠模型中，在这种模型中具有神经保护性(Lepore等，Nature Med.11,1294,2008)。这些数据表明了神经胶质祖细胞在模型神经变性疾病中的治疗益处，并且其它研究表明，神经胶质祖细胞疗法在其它神经变性疾病或障碍中是有益的，所述其它神经变性疾病或障碍包括但不限于帕金森氏症、阿兹海默氏病、亨廷顿舞蹈症和亚历山大病(Maragakis和Rothstein,Nature Clinical Practice Neurology 2,679,2006)、多发性硬化症(Windrem等，Ce 11 Stem Ce 11.2008 Jun 5 ; 2 (6 ): 553-65 ; Hardi son等，ExpNeuro 1.2006 Feb; 197(2):420-9)、其它脱髓鞘疾病(Duncan，J Inherit Metab Dis.2005；28(3):357-68)和脊髓损伤(Keirstead 等，J Neurosc1.2005 May 11 ； 25( 19): 4694-705 ；Mitsui等，J Neurosc1.2005 Oct 19;25(2):9624-36)。
[0055]因此，本发明的另一方面涉及用于使用按照本发明制造的哺乳动物GRP细胞在哺乳动物中治疗神经胶质细胞相关的神经变性疾病或障碍以及神经系统或其一部分的损伤或损坏的方法。所谓损伤或损坏，它指的是包括由任何原因引起的损坏或损伤，包括但不限于创伤、药物、辐射和免疫介导的损坏或损伤。此外，据预期，通过提供产生相关生长因子等的健康神经胶质细胞，本发明的细胞将可用于治疗哺乳动物中的不涉及具体神经胶质细胞的神经变性疾病或障碍以及神经系统的损伤。在这些治疗方法中，可以使用本技术领域的专业神经外科医生熟悉的导管或针，通过直接实质移植施用在I百万和I亿个之间的按照本发明制造的细胞。这些移植可以在通过使用颅穿洞术或椎板切除术直接接近神经组织后执行。可选地，可以由本技术领域的专业介入放射科医生，通过CT引导的经皮递送方法不需直接目测接近神经靶组织而将移植物导入脊髓中。此外，可以通过腰椎穿刺术将细胞施用到CSF而不是直接施用到实质。最后，对于这些疾病，使用其它神经细胞类型的几个临床试验目前正在进行之中。在这些使用其它神经细胞的临床试验中所使用的相似的流程和程序可以由本技术领域的专业人员通过常规改造以用于按照本发明制造的GRP。
【主权项】
1.一种用于减少GRP细胞群中可能不想要的细胞表型和/或降低GRP细胞群细胞中的标准偏差的方法，所述方法包括: (a)从能够产生A2B5阳性细胞的哺乳动物组织源中分离A2B5阳性细胞，以及 (b)A2B5阳性细胞在基质上体外培养的天数(DIV)大于6天。2.权利要求1的方法，其还包括将收获的细胞冷冻和融化。3.—种用于减少GRP细胞群中可能不想要的细胞表型和/或降低GRP细胞群细胞中的标准偏差的方法，所述方法包括: (a)将哺乳动物神经组织解离成细胞悬液； (b)分离A2B5阳性细胞； (c)A2B5阳性细胞在基质上体外培养的天数(DIV)大于6天；以及 (d)收获培养的细胞。4.权利要求3的方法，其还包括将收获的细胞冷冻和融化。5.—种用于减少GRP细胞群中可能不想要的细胞表型的方法，所述方法包括将GRP细胞群冷冻和融化。6.权利要求5的方法，其中将GRP细胞群在冷冻之前培养6DIV或小于6DIV。7.权利要求5的方法，其还包括将融化的GRP细胞群另外体外培养的天数(DIV)为3天以上。8.权利要求6的方法，其还包括将融化的GRP细胞群另外体外培养的天数(DIV)为3天以上。9.一种用于制造A2B5阳性细胞缺失的哺乳动物神经细胞的方法，所述方法包括: (a)从能够产生A2B5阳性细胞的哺乳动物组织源中分离A2B5阳性细胞；以及 (b)收集在去除A2B5阳性细胞后剩余的细胞。10.权利要求9的方法，其中细胞在基质上体外培养的天数(DIV)为I天以上。11.权利要求9的方法，其中细胞通过冷冻和融化细胞群来进一步缺失某些细胞类型。12.权利要求9的方法，其中A2B5阳性细胞使用磁性活化细胞分选来分离。13.权利要求12的方法，其中将细胞两次以上通过包含磁珠的柱，以分离A2B5阳性细胞。14.权利要求9的方法，其中A2B5阳性细胞使用荧光活化细胞分选或免疫淘选来分离。15.权利要求14的方法，其中将细胞两次以上通过荧光活化细胞分选或免疫淘选皿。16.一种用于表征GRP细胞的抗体组，所述抗体组包含针对A2B5、GFAP的抗体，和选自01181、01丨82、01、？06?1?-0、巢蛋白、呢2、？5厶-从^1、1\^1、灯-67和恥1^的一种或多种抗体。17.—种用于将细胞鉴定或表征为GRP细胞的方法，所述方法包括用权利要求16的抗体组对细胞群进行免疫表型分型，其中大多数细胞对A2B5，以及GFAP、巢蛋白、NG2、H)GFR-a、01igl、01ig2和Ol中的一种或多种为阳性，并且大多数细胞对PSA-NCAM、TUJ1、PECAM、CD68和NeuN中的一种或多种为阴性。18.哺乳动物GRP细胞在制备药物中的应用，所述药物用于在患有与神经元脱髓鞘相关的疾病、障碍、损伤或损坏的哺乳动物中增加神经元的髓鞘重新形成，其中所述哺乳动物GRP细胞通过包含如下步骤的方法制造: (a)仅仅通过选择A2B5阳性细胞从哺乳动物神经组织分离A2B5阳性细胞； (b)A2B5阳性细胞在基质上体外培养的天数(DIV)大于6天；以及 (c)收获培养的细胞； 或者通过包含如下步骤的方法制造: (a)将哺乳动物神经组织解离成细胞悬液； (b)仅仅通过选择A2B5阳性细胞来分离A2B5阳性细胞； (c)A2B5阳性细胞在基质上体外培养的天数(DIV)大于6天；以及 (d)收获培养的细胞。19.哺乳动物GRP细胞在制备药物中的应用，所述药物用于在哺乳动物中治疗神经变性疾病或障碍或神经系统或其一部分的损伤或损坏，其中所述哺乳动物GRP细胞通过权利要求18中描述的方法制造。
【专利摘要】本发明涉及用于哺乳动物来源的神经胶质限制性祖细胞的扩增、鉴定、表征和效能增强的方法和组合物。具体而言，本发明提供了用于产生人源神经胶质限制性祖细胞(GRP)群的方法，所述细胞群具有减少的可能不想要或不期望的细胞表型和/或降低的群细胞中的标准偏差。本发明还提供了用于表征GRP的抗体组和基因表达谱及其在表征GRP细胞中的应用方法。此外，本发明提供了用于使用这些GRP细胞产生星形细胞和/或少突神经胶质细胞、使神经元重新形成髓鞘、以及治疗神经胶质细胞相关的和其它神经变性疾病或障碍或神经系统的损伤或损坏的方法。本发明还提供了A2B5阳性细胞缺失的神经细胞的制造方法。
【IPC分类】A61K35/30, C12N5/079, C07K16/18, C12N5/071, G01N33/569, C12N5/0797, A61P25/28, A61P25/00
【公开号】CN105602889
【申请号】CN201610055313
【发明人】罗伯特·桑德罗克, 詹姆斯·T·坎帕内利, 德波拉·A·埃普斯泰因
【申请人】Q医疗公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2010年11月9日
【公告号】CA2780541A1, CA2780541C, CN102686721A, CN102686721B, EP2499238A1, EP2499238A4, US20120230963, WO2011059952A1