8] 实施例1不同品种小麦性状的调查 发明人于2013-2015每年4~6月对来自黄淮麦区的166份有代表性的当地大规模种植 的普通小麦品种和高代品系进行田间调查，每个品种千粒重数据见表1。
[0019] 表1不同品种小麦性状调查表
表1续1不同品种小麦性状调查表
表1续2不同品种小麦性状调查表
表1续3不同品种小麦性状调查表
表1续4不同品种小麦性状调查表
[0020] 实施例2应用特异性引物鉴定TaGS5-A化-b基因型小麦 试验材料为4个小麦品种：内乡184、济麦20、蔓城9411和豫麦9号，每个品种的小麦取一 粒种子，按照常规方法(Chen等，2011)提取小麦巧粒基因组DNA作为模板，用特异性引物进 行PCR扩增。
[0021] 特异性引物对如下： 上游引物：5'- TCATACACACATAATCCAGTCGA -3'（沈Q ID N0.3); 下游引物：5'- GATCGTGGGTGTTGCATCTAT -3'（沈Q ID N0.4)。
[0022] PCR反应体系的组成：1.5mmol/L MgCl2,0.3mmol/L dNTP，上、下游引物各lOpmol， 模板DNA 200ng，0.抓 Taq酶，加 1XPCR缓冲液（含 10 mmol/L Tris-HCl，抑9.0,50mmol/L KCl，1.0% Triton X-100)定容至25化。
[0023] PCR反应程序:先95°C预变性5min;然后94°C变性30s，55°C退火30s，72°C延伸40s， 共35个循环;最后，72°C延伸10 min。
[0024] PCR扩增结束后，取上述四种PCR扩增产物各10化分别进行1.5%琼脂糖凝胶电泳 (采用1 X TAE缓冲液；漠化乙锭(EB)染色，160V，0.5小时），电泳结束后用凝胶成像系统 (MultiGenius Gel Documentation and Analysis System)扫描成像并用计算机进行分 析，最后将四种PCR扩增产物进行测序。
[0025] 测序结果进行分析，结果表明：2个小麦品种（内乡184和济麦20)中化GS5-A化基因 的启动子上游-192化P位置有G的插入，则为TaGS5-A化-b基因型小麦，而小麦品种蔓城9411 和豫麦9号该基因启动子上游-192化P位置没有G的插入，则为非化GS5-A化-b基因型小麦。 从表1可知，内乡184和济麦20的千粒重为47.03g和46.03g，而蔓城9411和豫麦9号的千粒重 分别为41.37g和39.90g，即TaGS5-A化-b基因型小麦的巧粒大于非TaGS5-A化-b基因型小麦 的巧粒，因此，检测结果与调查结果相符。
[00%] 实施例3 采用实施案例2相同方法分别对丰抗13、太空6号、濃麦9号和内江31进行检测，结果表 明：丰抗13、濃麦9号和内江31扩增产物测序后在化GS5-A化基因启动子上-192化P位置没有 G插入时，为非TaGS5-Alb-b基因型小麦；太空6号扩增产物测序后在该基因启动子上游- 1925bp位置有单碱基G插入时，其为化GS5-A化-b基因型小麦。从表1可知，太空6号的千粒重 分别为50.74g，而丰抗13、濃麦9号和内江31的千粒重分别为43.88g、41.57g和32.56g，即 TaGS5-A化-b基因型小麦的巧粒大于非化GS5-A化-b基因型小麦的巧粒，因此，检测结果与 调查结果相符。
[0027] 实施例4 发明人对上述来自黄淮麦区的166份有代表性的当地大规模种植的普通小麦品种和高 代品系按照本发明方法进行了基因型的检测，检测结果见表1，对比千粒重数据发现:在田 间栽培条件基本一致的情况下，TaGS5-A化-b基因型小麦巧粒的千粒重普遍高于非化GS5- A化-b基因型小麦巧粒的千粒重，因此，TaGS5-A化-b基因型可W导致小麦巧粒千粒重增加。
【主权项】
1. 一种普通小麦高千粒重基因 TaGS5-Alb-b，其特征在于：包括SEQ ID N0.1所示的核 苷酸序列。2. -种权利要求1所述普通小麦高千粒重基因 TaGS5-Alb-b的检测引物，其特征在于： 包括以下引物对： 上游引物：5 ' - TCATACACACATAATCCAGTCGA -3 ' ； 下游引物：5'_ GATCGTGGGTGTTGCATCTAT -3'。3. -种权利要求1所述普通小麦高千粒重基因 TaGS5-Alb-b的检测方法，其特征在于： 包括以下步骤： (1) 以待测小麦的基因组DNA为模板，用权利要求2所述检测引物进行PCR扩增； (2) 检测所得扩增产物，若在TaGS5-Alb基因启动子上游-1925bp位置有G插入，则该待 测小麦具有基因 TaGS5-Alb-b;反之，在TaGS5-Alb基因启动子上游-1925bp位置无 G插入，则 该待测小麦不具有基因 TaGS5-Alb-b。4. 根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于:所述PCR扩增中的反应体系由以下原 料组成：终浓度1.5mmo 1 /L的MgC 12，终浓度0.3mmo 1 /L的dNTP，上、下游引物各1 Opmo 1，模板 DNA 200ng，0.5U Taq酶，加1XPCR缓冲液定容至25yL。5. 根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于:所述PCR扩增中反应程序为:先95 °C预 变性5min，然后95 °C变性30s、55 °C退火30s、72 °C延伸40s，如此进行35个循环;最后，72 °C延 伸10 min〇6. 根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于:所述扩增产物的检测方法为：取所得 扩增产物l〇yL进行琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后用凝胶成像系统扫描成像并用计算机进行 分析，最后将所得PCR扩增产物进行测序。7. 小麦TaGS5-Alb-b基因型的鉴定方法，包括以下步骤： (1) 以待测小麦的基因组DNA为模板，用权利要求2所述检测引物进行PCR扩增； (2) 检测所得扩增产物并进行测序，若在该基因启动子上游-1925bp位置有G插入的，则 待测小麦为TaGS5-Alb-b基因型小麦，反之，则为非TaGS5-Alb-b基因型小麦。8. 权利要求1所述普通小麦高千粒重基因 TaGS5-Alb-b在小麦育种中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种普通小麦高千粒重基因及其应用。检测小麦<i>TaGS5-A1b-b</i>基因型的特异性引物对为：5’-？TCATACACACATAATCCAGTCGA？-3’和5’-？GATCGTGGGTGTTGCATCTAT？-3’；以待测小麦的基因组DNA为模板，用该引物对进行PCR扩增后再进行测序，若在<i>TaGS5-A1b</i>基因启动子上游-1925bp位置有G插入，则具有基因<i>TaGS5-A1b-b</i>，反之则不具有。本发明检测引物可应用于鉴定<i>TaGS5-A1b-b</i>基因型小麦，并辅助小麦分子育种等方面，可直接在分子水平上进行<i>TaGS5-A1b-b</i>基因型的检测，对小麦籽粒大小、产量、其它农艺性状的改良及优良品种的培育起到重要作用。
【IPC分类】C12N15/11, C12N15/29, C12Q1/68
【公开号】CN105671053
【申请号】CN201610102036
【发明人】陈锋, 王沙沙, 崔党群, 董中东, 赵磊
【申请人】河南农业大学
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月25日