Sep 4;325(5945):1240-3)。 CHDlL也称为ALCl(肝癌I中扩增），其经常在肝癌(人肝细胞癌，HCC)中扩增和过表达。此外， CHDlL的过表达促进细胞周期中G1/S阶段的过渡，通过降低p53表达的细胞增殖并抑制细胞 调亡（Isolation and characterization of a novel onco 邑 ene ,amplified in liver cancer I,within a commonly amplified region at lq21in hepatocellular carcinoma.Hepatology.2008化13;47(2) :503-10.)。
[0018] 如上文所述，已知ZBTB7A、YAP1和畑DlL作为抗癌药物祀标的可能性，但用于 ZBTB7A、YAP1或CHDlL的SiRNA治疗剂的开发和递送SiRNA治疗剂的技术仍微不足道。因此对 于能够特异性和有效抑制ZBTB7A、YAP1或C皿IL表达的SiRNA治疗剂和递送SiRNA治疗剂的 技术的需求在市场上是显著的。
[0019] 公开内容
[0020] 技术问题
[0021] 本发明的目的是提供能够特异性并高度有效抑制ZBTB7A、YAP1或CHDlL表达的新 型S iRNA，包含所述S iRNA的双链寡RNA分子和制备所述双链寡RNA分子的方法。
[0022] 本发明的另一目的是提供用于预防和治疗癌症特别是肝癌的药物组合物，其包含 ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性-SiRNA或含有ZBTB7A、YAP1或C皿IL特异性SiRNA的双链寡RNA 分子作为活性成分。
[0023] 本发明的另一目的是提供使用ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA或含有ZBTB7A、 YAPl或CHDlL特异性SiRNA的双链寡RNA分子预防和治疗癌症的方法。
[0024] 技术方案
[0025] 根据本发明的方面，给出了ZBTB7A、YAP1或畑DlL(其为肝癌相关基因）特异性 SiRNA,其包含第一寡核巧酸和第二寡核巧酸，所述第一寡核巧酸为含有选自SEQ ID NO. 1-300的任一序列的有义链，所述第二寡核巧酸为与其互补的反义链。
[0026] 本发明的术语"ZBTB7A特异性SiRNA"、"YAPl特异性SiRNA"或"CHD1L特异性SiRNA" 意指特异性针对编码ZBTB7A、YAP1或CHD1L蛋白的基因的S iRNA。
[0027] 此外，只要所述SiRNA保持对ZBTB7A、YAP1或CHDlL的特异性，本发明的SiRNA还包 含在SEQ ID NO: 1-300的有义链或与SEQ ID NO: 1-300互补的反义链中具有一个或多个核 巧酸缺失、插入或取代的有义链或反义链。
[002引沈Q ID NO. 1-100表示ZBTB7A特异性SiRNA的有义链的序列，SEQ ID NO. 101-200 表示YAPl特异性SiRNA的有义链的序列，且SEQ ID NO.201-300表示CHDlL特异性SiRNA的有 义链的序列。
[00巧]优选地，根据本发明的SiRNA可具有含有沈Q ID ^).1、2、3、4、5、6、7或8的序列的 ZBTB7A特异性SiRNA的有义链、含有沈Q ID NO. 103、107、108、112、116、117、118、121 或 122 的序列的YAPl特异性SiRNA的有义链，或含有SEQ ID NO.201、202、203或204的C皿IL特异性 S iRNA的有义链，
[0030] 更优选地，根据本发明的SiRNA可具有含有SEQ ID NO. 1、2或4的序列的ZBTB7A特 异性SiRNA的有义链、含有SEQ ID NO. 116、118或121的序列的YAPl特异性SiRNA的有义链， 或沈Q ID NO.202、203或204的CHDlL特异性SiRNA的有义链，
[0031] 且最优选地，根据本发明的SiRNA可具有含有SEQ ID NO.4的序列的ZBTB7A特异性 SiRNA的有义链、含有SEQ ID NO. 118的序列的YAPl特异性SiRNA的有义链，或含有SEQ ID NO. 204的序列的CHDlL特异性SiRNA的有义链。
[0032] 根据本发明的SiRNA的有义链或反义链可由19-31个核巧酸组成。
[0033] 由于本发明提供的ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA具有经设计而与编码与其对 应的基因的mRNA互补结合的碱基序列，因此ZBTB7A、YAPl或CHDlL特异性SiRNA可有效抑制 对应基因的表达。此外，ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA可包含突出端，它是在SiRNA的 3末端含有一个或至少两个未配对核巧酸的结构，
[0034] 且为改进SiRNA在体内的稳定性，ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA可包含多种用 于赋予针对核酸酶的抗性和减少非特异性免疫反应的修饰。关于配置SiRNA的第一或第二 寡核巧酸的修饰，可使用至少一个选自下组的修饰:通过在至少一个核巧酸中糖结构的2'-碳位点处用-C出（甲基）、-OC出（甲氧基）、-N出、-F (氣）、-0-2-甲氧基乙基、-0-丙基、-0-2-甲 基硫乙基、-0-3-氨基丙基、-0-3-二甲基氨基丙基、-O-N-甲基乙酷胺基或-〇-二甲基氨基氧 乙基取代-OH基团的修饰;通过用硫取代所述核巧酸中糖结构中的氧的修饰;可组合W由此 使用核巧酸键变为硫代憐酸醋键、棚烧憐酸醋键或甲基憐酸醋键的修饰，和修饰为肤核酸 (PNA)类型、锁核酸化NA)类型或解锁核酸(UNA)类型(Ann.Rev.Med. 55,61-65 2004;US 5， 660,985；US 5,958,691；US6,531,584；US 5,808,023；US 6,326,358；US 6,175,001； Bioorg.Med.Chem.Lett.14:1139-1143,2003；RNA,9:1034-1048,2003；Nucleic Acid Res.31:589-595,2003；Nucleic Acids Research,38(17)5761-5773,2010；Nucleic Acids Research，39(5)1823-1832，2011)。
[0035] 本发明提供的ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA可显著抑制相应蛋白的表达W及 抑制相应基因的表达。此外，由于已知SiRNA可改进放射疗法或化疗的敏感性，其为通常与 癌症特异性RMi组合使用W治疗癌症的治疗方法（The Potential RMi-based Combination Therapeutics .Arch . Pharm. Res . 34( I) : 1-2,201)，因此根据本发明的 ZBTB7A、YAPl或CHDl L特异性S iRNA可与现有的放射疗法或化疗一起使用。
[0036] 此外，在同时使用根据本发明的ZBTB7A、YAP1和C皿IL特异性SiRNA的情况中，相应 基因的表达同时受到抑制，由此癌细胞的生长可受到显著抑制。
[0037] 根据本发明的另一方面，提供了一种缀合物，其中亲水和疏水化合物与SiRNA的两 末端缀合从而有效将肝癌相关基因特别是ZBTB7A、YAP1或C皿IL特异性SiRNA递送入身体并 改进稳定性。
[003引在亲水和疏水化合物与如上文所述的SiRNA结合的情况中，自组装的纳米颗粒通 过疏水化合物的疏水相互作用形成（参见韩国专利登记号1224828)。该缀合物具有明显优 异的向机体递送的效率和在体内出色的稳定性，且颗粒大小的均匀性是优异的，因此易于 质量控制(QC)。因此，该缀合物可具有简单的制药过程的优势。
[0039] 作为具体的实例，包含根据本发明的ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA的双链寡 RNA分子可优选地具有下列结构式(1)的结构：
[0040] A-X-R-Y-B 结构式（1)
[0041 ]在结构式（1)中，A是亲水化合物，B是疏水化合物，X和Y分别为简单共价键或接头 介导的共价键，且R是ZBTB7A、YAP1或C皿IL特异性siRNA。
[0042] 更优选地，包含根据本发明的ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA的双链寡RNA分子 可具有下列结构式(2)的结构： A-X-S-Y-B.
[0043] 结构式(2) AS
[0044] 在结构式(2)中，A、B、X和Y分别具有如结构式（1)中那些相同的定义，S是ZBTB7A、 YAPl或CHDlL特异性SiRNA的有义链，且AS是ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA的反义链。
[0045] 只要SiRNA保持对ZBTB7A、YAPl或CHDlL的特异性，本发明的ZBTB7A、YAPl或CHDlL 特异性SiRNA还包含与ZBTB7A、YAPl或畑DlL mRNA部分互补（错配）的反义链，W及与 ZBTB7A、YAP1或CHDlL mRNA完全互补(完全匹配)的反义链。
[0046] 本发明的SiRNA的反义或有义链可具有与ZBTB7A、YAP1或CHDlL mRNA序列至少 70%、优选80%、更优选90%且最优选95%的序列同源性或互补性。
[0047] SiRNA可W是双链复合体(duplex)或单链多核巧酸，其包括但不限于反义寡核巧 酸或miRNA。
[004引更优选地，包含根据本发明的ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA的双链寡RNA分子 可具有下列结娩古（3)的结娩，
[0049]
[0050] 对本发明所属领域的技术人员显而易见的是:在结构式（1)-(3)中，一至=个憐酸 基团可与含有ZBTB7A、YAP1或C皿IL特异性SiRNA的双链寡RNA分子反义链的5'-末端结合， 且SiRNA可替换所述SiRNA使用。
[0051] 结构式（1)-(3)中的亲水化合物可优选为包含200-10,000分子重量的阳离子或非 离子多聚化合物，更优选地，为包含1，000-2,000分子量的非离子多聚化合物。例如，作为亲 水多聚化合物，可优选使用非离子亲水多聚化合物如聚乙二醇、聚乙締化咯烧酬、聚嗯挫嘟 等，但本发明并不局限于此。
[0052] 结构式（1)-(3)中的疏水化合物B可发挥作用W形成由结构式（1)的寡核巧酸分子 通过疏水相互作用制成的纳米颗粒。优选地，疏水化合物可具有250-1,000的分子量，且可 使用酱类衍生物、甘油醋衍生物、甘油酸、聚丙二醇、饱和或不饱和的Cu-Cs胞、二酷基憐脂 酷胆碱、脂肪酸、憐脂和脂多胺等，但本发明并不局限于此。对本发明所属领域的技术人员 显而易见的是可使用任何疏水化合物，只要所述化合物可满足本发明的目的。
[0053] 所述酱类衍生物可选自下组:胆酱醇、胆酱烧醇、胆酸、胆酱醇甲酸醋、胆酱烧醇甲 酸醋和胆酱醇胺，且所述甘油醋衍生物选自单、双和S甘油醋等。在运种情况中，甘油醋的 脂肪酸优选可为不饱和或饱和C12-C50脂肪酸。
[0054] 具体地，在疏水化合物中，饱和或非饱和控类或胆酱醇因为易于在合成过程中与 根据本发明的寡核巧酸分子结合可为优选的。
[0055] 疏水化合物可结合至亲水化合物的相反远端，且可结合至SiRNA的有义或反义链 的任何位点。
[0056] 结构式（1)-(3)中的亲水或疏水化合物和根据本发明的ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异 性SiRNA可通过简单共价键或接头介导的共价键(X或Y)彼此结合。介导共价键的接头与亲 水或疏水化合物在ZBTB7A、YAP1或CHDlL特异性SiRNA的末端共价结合，且只要所述接头在 特定环境中可提供可降解键，所述接头酌情可不受具体限制。因此，作为接头，可使用结合 W在制备根据本发明的双链寡RNA分子的过程中激活ZBTB7A、YAP1或C皿IL特异性SiRNA和/ 或亲水(或疏水)化合物的任何化合物。共价键可W是不可降解键或可降解键的任一种。在 运种情况中，不可降解键的实例可包括酷胺键和憐酸键，且可降解键的实例包括二硫键、酸 可降解键、醋键、酸酢键、生物可降解键、酶可降解键等，但不可降解键或可降解键并不局限 于此。
[0057] 此外，作为在结构式（l)-(3)中由