本发明涉及一种色素的提取方法，具体而言就是指利用乌饭树叶为原料，通过生物酶促反应获得一种高水溶性的植物色素的提取方法。
背景技术：
乌饭树（vacciniumbracteatumthunb.）为杜鹃花科越橘属植物，又名南烛、乌饭子等。乌饭树枝叶中有效成分有花青苷类、黄酮类、丹宁类、三萜类等，其中水溶性蓝色素含量高，具有促进是视红素再合成、vp样机能、改善血液微循环、抗溃疡、抗炎症、抗衰老等多种生理活性。
目前国内乌饭树叶色素的传统提取方式为将乌饭树叶捣碎，然后加水静置，令树叶中的色素溶于水中，而后对其进行后续处理得到色素。这种方式比较简单，需要的材料也很常见，但是由于乌饭树叶色素在水中的溶解度十分有限，传统的方式并不能将所有的色素析出溶解，色素的获取率在60-%80%之间，这样显然造成了一部分原材料的无端浪费。企业在同行业的竞争中没有较大的优势。
技术实现要素：
本发明提供一种全新的乌饭树叶色素的提取方法。
本发明采用如下技术手段实现：一种乌饭树叶色素的提取方法，包括如下步骤：
1）将新鲜的乌饭树叶洗净，杀青，将树叶烘干14-30h，放入粉碎机内破碎成乌饭树叶粉末；
2）在乌饭树叶粉末中添加一定量的含水有机溶剂，冷浸或加热回流提取1-4次，每次4-12小时，而后将提取液过滤，得到滤液；
3）滤液进行2400-2800rpm的冷冻离心分离，祛除沉淀后得到上清液；
4）将上清液利用超滤膜祛除高分子物质，得到色素前体的浓缩液；
5）根据浓缩液中的总酚质量投入多酚氧化酶，在35～40℃的条件下进行保温反应，并持续通入空气，反应完毕后得到色素粗品溶液；
6）黑色粗品溶液用聚酰胺柱吸附，用去离子水洗去不吸附的杂质，直至流出液变澄清为止，然后用一定浓度的有机溶剂解析出色素溶液；
7）将所述色素溶液在≤60℃的温度下减压回收有机溶剂，再经喷雾干燥得到无定形的植物色素粉末。
步骤2中的有机溶剂为极性有机溶剂，所述极性有机溶剂为乙醇或丙酮，含水有机溶剂为含有低于80％(v/v)有机溶剂的水溶液，每公斤干燥粉末中加入3-5l含水有机溶剂。
步骤3中离心时间介于30min-40min之间。
步骤4中的超滤膜为能截留分子量在10000以上的聚砜膜。
步骤5中保温反应的时间为2-7h，通入的空气量为7-12l/min。
步骤6中所述有机溶剂为含有20-80％(v/v)乙醇的水溶液、或含有20-80％(v/v)丙酮的水溶液。
步骤7中在0.1mpa、60℃条件下脱除有机溶剂。
本发明与现有的技术相比较，具有以下优势：
1、其将乌饭树叶烘干打碎，这样增加了乌饭树叶的反应面积，令色素的提取更为充分；
2、利用有机溶剂进行提取，色素溶解量大，提取效率高；
3、选用较高浓度的乙醇水溶液或丙酮水溶液作提取溶剂，可使溶出的大分子蛋白质沉淀下来，从而过滤除去，滤除效果更显著；
4、采用膜过滤属物理除杂，不仅能耗低、污染小，还可以减少因高温色素分解，提高色素的回收率。
具体实施方式
为了能够进一步了解本发明的结构、特征及其他目的，现结合所附较佳实施例详细说明如下，所说明的较佳实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明。
实施例1
取1kg新鲜乌饭树叶，将其洗净、杀青，杀青后烘干16h，而后进行粉碎，然后将乌饭树叶粉末转移至反应釜中，加2l60％(v/v)乙醇水溶液，在50℃温度下提取2.5hr，滤除残渣，得到滤液，减压脱除乙醇，直至无醇味止，得到的浓缩液补充去离子水至最初滤液体积，过amicon-聚砜p100的超滤膜，就得到色素前体的水溶液溶液，并依照gb8313-87测得色素前体溶液中总酚质量为24.5g。
向色素前体溶液中投入2.45g(即10wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活为10000单位/g以上)，在37℃的条件下，保温反应5hr，并以5-10l/min的流速通入空气。反应完毕后，反应液经过amicon-聚砜p100的超滤膜过滤。
滤液上聚酰胺柱，以去离子水洗柱直至流出液为澄清止，随后用约500ml50％乙醇溶液为解析剂，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃条件下回收溶剂，然后进行喷雾干燥，并过60目筛，得到植物色素产品。
实施例2
取1kg新鲜乌饭树叶，将其洗净、杀青，杀青后烘干16h，而后进行粉碎，然后将乌饭树叶粉末转移至反应釜中，加1l80％(v/v)丙酮水溶液，在约25℃温度下提取2.5hr，滤除残渣，得到滤液，减压脱除丙酮，直至无丙酮味止，得到的浓缩液补充去离子水至最初滤液体积，过amicon-聚砜p100的超滤膜，就得到色素前体的水溶液溶液，并依照gb8313-87测得色素前体溶液中总酚质量为22.1g。
向色素前体溶液中投入4.42g(即20wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活为10000单位/g以上)，在35℃的条件下，保温反应3hr，并以5-10l/min的流速通入空气。反应完毕后，反应液经过amicon-聚砜p100的超滤膜过滤。
滤液上聚酰胺柱，以去离子水洗柱直至流出液为澄清止，随后用约500ml80％丙酮溶液为解析剂，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃条件下回收溶剂，然后进行喷雾干燥，并过60目筛，得到植物色素产品。
实施例3
取1kg新鲜乌饭树叶，将其洗净、杀青，杀青后烘干16h，而后进行粉碎，然后将乌饭树叶粉末转移至反应釜中，加3l50％(v/v)丙酮水溶液，在约50℃温度下提取2.5hr，滤除残渣，得到滤液，减压脱除丙酮，直至无丙酮味止，得到的浓缩液补充去离子水至最初滤液体积，过amicon-聚砜p100的超滤膜，就得到色素前体的水溶液溶液，并依照gb8313-87测得色素前体溶液中总酚质量为25.0g。
向色素前体溶液中投入25.0g(即100wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活为10000单位/g以上)，在42℃的条件下，保温反应2hr，并以5-10l/min的流速通入空气。反应完毕后，反应液经过amicon-聚砜p100的超滤膜过滤。
滤液上聚酰胺柱，以去离子水洗柱直至流出液为澄清止，随后用约500ml80％丙酮溶液为解析剂，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃条件下回收溶剂，然后进行喷雾干燥，并过60目筛，得到植物色素产品。
实施例4
取1kg新鲜乌饭树叶，将其洗净、杀青，杀青后烘干16h，而后进行粉碎，然后将乌饭树叶粉末转移至反应釜中，加5l80％(v/v)乙醇水溶液，在约50℃温度下提取2.5hr，滤除残渣，得到滤液，减压脱除乙醇，直至无醇味止，得到的浓缩液补充去离子水至最初滤液体积，过amicon-聚砜p100的超滤膜，就得到色素前体的水溶液溶液，并依照gb8313-87测得色素前体溶液中总酚质量为26.2g。
向色素前体溶液中投入13.1g(即50wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活为10000单位/g以上)，在42℃的条件下，保温反应2hr，并以5-10l/min的流速通入空气。反应完毕后，反应液经过amicon-聚砜p100的超滤膜过滤。
滤液上聚酰胺柱，以去离子水洗柱直至流出液为澄清止，随后用约500ml70％乙醇溶液为解析剂，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃条件下回收溶剂，然后进行喷雾干燥，并过60目筛，得到植物色素产品。
实施例5
取1kg新鲜乌饭树叶，将其洗净、杀青，杀青后烘干16h，而后进行粉碎，然后将乌饭树叶粉末转移至反应釜中，加3l60％(v/v)丙酮水溶液，在约60℃温度下提取2.5hr，滤除残渣，得到的滤液，补充去离子水至最初滤液体积，过amicon-聚砜p100的超滤膜，得到色素前体溶液，并依照gb8313-87测得色素前体溶液中总酚质量为27.8g。
向前体溶液中投入8.34g(即30wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活为10000单位/g以上)，在40℃的条件下，保温反应5hr，并以5-10l/min的流速通入空气。反应完毕后，反应液经过amicon-聚砜p100的超滤膜过滤。
滤液上聚酰胺柱，以去离子水洗柱直至流出液为澄清止，随后用约500ml50％丙酮溶液为解析剂，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃条件下回收溶剂，然后进行喷雾干燥，并过60目筛，得到植物色素产品。
实施例6
取1kg新鲜乌饭树叶，将其洗净、杀青，杀青后烘干16h，而后进行粉碎，然后将乌饭树叶粉末转移至反应釜中，加5l50％(v/v)乙醇水溶液，在约60℃温度下提取3hr，滤除残渣，得到的滤液，过amicon-聚砜p100的超滤膜，得到色素前体溶液，并依照gb8313-87测得色素前体溶液中总酚质量为28.6g。
向前体溶液中投入5.72g(即20wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活为10000单位/g以上)，在40℃的条件下，保温反应6hr，并以5-10l/min的流速通入空气。反应完毕后，反应液经过amicon-聚砜p100的超滤膜过滤。
滤液上聚酰胺柱，以去离子水洗柱直至流出液为澄清止，随后用约500ml40％乙醇溶液为解析剂，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃条件下回收溶剂，然后进行喷雾干燥，并过60目筛，得到植物色素产品。
实施例7
取1kg新鲜乌饭树叶，将其洗净、杀青，杀青后烘干16h，而后进行粉碎，然后将乌饭树叶粉末转移至反应釜中，加6l60％(v/v)乙醇水溶液，在约60℃温度下提取2.5hr，滤除残渣，得到的滤液，过amicon-聚砜p100的超滤膜，得到色素前体溶液，并依照gb8313-87测得色素前体溶液中总酚质量为26.1g。
向前体溶液中投入5.22g(即20wt.％)多酚氧化酶(此多酚氧化酶的比活为10000单位/g以上)，在40℃的条件下，保温反应5hr，并以5-10l/min的流速通入空气。反应完毕后，反应液经过amicon-聚砜p100的超滤膜过滤。
滤液上聚酰胺柱，以去离子水洗柱直至流出液为澄清止，随后用约500ml50％乙醇溶液为解析剂，得到色素溶液。
色素溶液在0.09mpa真空、60℃条件下回收溶剂，然后进行喷雾干燥，并过60目筛，得到植物色素产品。