专利名称：异养硝化细菌的筛选方法
技术领域：
本发明属于污水处理技术领域，具体涉及一种异养硝化细菌的筛选方法。
背景技术：
氮素污染是引起水体富营养化的重要原因之一，因此污水的脱氮处理对于维持水体清洁以及防止富营养化都具有重要的作用。硝化作用可以分为氨到亚硝酸(氨氧化)和亚硝酸到硝酸(亚硝酸氧化)的两个转化过程，形成的硝酸盐通过反硝化作用形成氮气逸出水体完成脱氮。一般认为硝化作用的两个步骤分别由两类化能自养微生物完成，能够氧化氨氮为亚硝酸盐的是亚硝酸菌，能够氧化亚硝酸盐为硝酸盐的是硝酸菌，硝化菌在氮元素的整个循环过程中起着非常重要的作用。传统的亚硝酸菌、硝酸菌世代周期长，生长极其缓慢，并且对环境的变化非常敏感而使自养微生物的应用受到限制。
相对于自养硝化菌而言，虽然有的异养菌的分解效率较低，但是由于它们在环境中的数量以及生长速率上往往远大于自养菌，因此在某些环境之中，异养硝化作用的贡献可以与自养菌相当，甚至超出。这些微生物可以在有机碳条件下进行硝化作用，也可以在有机土环境中进行硝化作用，在氮素循环中具有重要的作用。
发明内容
本发明的目的是采用筛选异养硝化菌的方法，从生物学角度实现异养硝化现象，该技术是实现短程同步硝化反硝化的先决条件。
本发明按照下述步骤进行一、微生物富集培养将水样静置弃去上清液，取活性污泥接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，接种量为5～10％，在30～35℃、120～14rpm的条件下恒温振荡培育，目测培养液混浊度增加时，将富集培养液接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基平板中，30℃温箱培养2～3d，挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d，重复以上操作，直至分纯；二、从牛肉膏蛋白胨固体培养基中挑取单菌落，接种于氨化培养基液体培养基中，接种量为5～10％，在30～35℃、120～140rpm的条件下恒温振荡培育，目测培养液混浊度增加时，将富集培养液接种于氨化培养基固体培养基平板中，30～35℃温箱培养2～3d，挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在氨化培养基固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d，重复以上操作，直至分纯；三、从氨化培养基固体培养基中挑取单菌落，接种于亚硝化培养基液体培养基中，接种量为5～10％，在30～35℃、120～140rpm的条件下恒温振荡培育，目测培养液混浊度增加时，将富集培养液接种于亚硝化培养基固体培养基平板中，30～35℃温箱培养2～3d，挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在亚硝化培养基固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d，重复以上操作，直至分纯，获得异养硝化细菌。
本发明的筛选异养硝化菌的方法从生物学角度实现异养硝化现象，异养硝化细菌相对于自养硝化细菌具有世代周期短，生长繁殖速率快，对环境的变化不敏感的优点，所筛选的异养硝化细菌仅可以利用氨氮作为唯一的氮源的培养基上进行生长繁殖，而且可以在亚硝酸盐作为唯一氮源的培养基中正常生长繁殖，对环境有较强的适应能力，在实际工程应用中有较大的发展潜力。
具体实施例方式
具体实施方式
一本实施方式按照如下步骤筛选异养硝化细菌一、配制如下培养基牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏1g、NaCl 1g、蛋白胨3g、乙酸钠1g、K2HPO40.5g、MnSO4·4H2O 0.01g、FeSO40.01g、H2O 1000mL，pH＝7.0～7.2。
氨化培养基NH4Cl 0.382g、乙酸钠2g、MgSO4·7H2O 0.05g、K2HPO40.2g、NaCl 0.12g、MnSO4·4H2O 0.01g、FeSO40.01g、H2O 1000mL。
亚硝化培养基NaNO20.5g、乙酸钠2g、MgSO4·7H2O 0.05g、K2HPO40.2g、NaCl 0.12g、MnSO4·4H2O 0.01g、FeSO40.01g、H2O 1000mL。
二、筛选异养硝化细菌1、微生物富集培养将水样静置弃去上清液，取活性污泥接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，接种量为5～10％，在30～35℃、120～140rpm的条件下恒温振荡培育，见有明显生长(目测培养液混浊度增加)时，然后将富集培养液接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基平板中，30℃温箱培养2～3d。挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d。重复以上操作，直至分纯。
2、从牛肉膏蛋白胨固体培养基中挑取单菌落，接种于氨化培养基液体培养基中。接种量为5～10％，在30～35℃、120～140rpm的条件下恒温振荡培育，见有明显生长(目测培养液混浊度增加)时，然后将富集培养液接种于氨化培养基固体培养基平板中，30～35℃温箱培养2～3d。挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在氨化培养基固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d。重复以上操作，直至分纯。
3、从“氨化培养基固体培养基”挑取单菌落，接种于亚硝化培养基液体培养基中。接种量为5～10％，30～35℃、120～140rpm的条件下恒温振荡培育，见有明显生长(目测培养液混浊度增加)时，然后将富集培养液接种于亚硝化培养基固体培养基平板中，30～35℃温箱培养2～3d。挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在亚硝化培养基固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d。重复以上操作，直至分纯。
具体实施例方式
二本实施方式是通过以下步骤实现的1、微生物富集培养将水样静置弃去上清液，取活性污泥接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，接种量为5％，30℃、120rpm恒温振荡培育，见有明显生长(目测培养液混浊度增加)时，然后将富集培养液接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基平板中，30℃温箱培养2～3d。挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d。重复以上操作，直至分纯。
2、从牛肉膏蛋白胨固体培养基挑取单菌落，接种于氨化培养基液体培养基中。接种量为5％，30℃、120rpm恒温振荡培育，见有明显生长(目测培养液混浊度增加)时，然后将富集培养液接种于氨化培养基固体培养基平板中，30℃温箱培养2～3d。挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在氨化培养基固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d。重复以上操作，直至分纯。
3、从氨化培养基固体培养基挑取单菌落，接种于亚硝化培养基液体培养基中。接种量为5％，30℃、120rpm恒温振荡培育，见有明显生长(目测培养液混浊度增加)时，然后将富集培养液接种于亚硝化培养基固体培养基平板中，30℃温箱培养2～3d。挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在亚硝化培养基固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d。重复以上操作，直至分纯。
4、将分离到的微生物接种到氨化培养基液体培养基和亚硝化培养基液体培养基中，采用常规方法测定其硝化性能。
权利要求
1.一种异养硝化细菌的筛选方法，其特征在于所述筛选方法为一、微生物富集培养将水样静置弃去上清液，取活性污泥接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，接种量为5～10％，在30～35℃、120～140rpm的条件下恒温振荡培育，目测培养液混浊度增加时，将富集培养液接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基平板中，30℃温箱培养2～3d，挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d，重复以上操作，直至分纯；二、从牛肉膏蛋白胨固体培养基中挑取单菌落，接种于氨化培养基液体培养基中，接种量为5～10％，在30～35℃、120～140rpm的条件下恒温振荡培育，目测培养液混浊度增加时，将富集培养液接种于氨化培养基固体培养基平板中，30～35℃温箱培养2～3d，挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在氨化培养基固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d，重复以上操作，直至分纯；三、从氨化培养基固体培养基中挑取单菌落，接种于亚硝化培养基液体培养基中，接种量为5～10％，在30～35℃、120～140rpm的条件下恒温振荡培育，目测培养液混浊度增加时，将富集培养液接种于亚硝化培养基固体培养基平板中，30～35℃温箱培养2～3d，挑取单菌落转接于斜面试管上，再将具有不同性状的菌落在亚硝化培养基固体培养基平板上划线纯化，平板倒置温箱2～3d，重复以上操作，直至分纯，获得异养硝化细菌。
2.根据权利要求1所述的异养硝化细菌的筛选方法，其特征在于所述牛肉膏蛋白胨培养基的组成如下牛肉膏1g、NaCl 1g、蛋白胨3g、乙酸钠1g、K2HPO40.5g、MnSO4·4H2O 0.01g、FeSO40.01g、H2O 1000mL，pH＝7.0～7.2。
3.根据权利要求1所述的异养硝化细菌的筛选方法，其特征在于所述氨化培养基的组成如下NH4Cl 0.382g、乙酸钠2g、MgSO4·7H2O 0.05g、K2HPO40.2g、NaCl 0.12g、MnSO4·4H2O 0.01g、FeSO40.01g、H2O 1000mL。
4.根据权利要求1所述的异养硝化细菌的筛选方法，其特征在于所述亚硝化培养基的组成如下NaNO20.5g、乙酸钠2g、MgSO4·7H2O 0.05g、K2HPO40.2g、NaCl 0.12g、MnSO4·4H2O 0.01g、FeSO40.01g、H2O 1000mL。
全文摘要
异养硝化细菌的筛选方法，属于污水处理技术领域。本发明的目的是采用筛选异养硝化菌的方法，从生物学角度实现异养硝化现象，该技术是实现短程同步硝化反硝化的先决条件。本发明按照下述步骤进行1.微生物富集培养；2.从牛肉膏蛋白胨固体培养基中挑取单菌落，接种于氨化培养基中培养、纯化；3.从氨化培养基固体培养基中挑取单菌落，接种于亚硝化培养基中培养、纯化，获得异养硝化细菌。本发明所筛选的异养硝化细菌仅可以利用氨氮作为唯一的氮源的培养基上进行生长繁殖，而且可以在亚硝酸盐作为唯一氮源的培养基中正常生长繁殖，对环境有较强的适应能力，在实际工程应用中有较大的发展潜力。
文档编号C02F3/00GK1884480SQ20061001026
公开日2006年12月27日 申请日期2006年7月7日 优先权日2006年7月7日
发明者马放, 苏俊峰, 杨基先 申请人:哈尔滨工业大学