专利名称：β-胡萝卜素的制备色谱分离精制方法
技术领域：
本发明属于天然产物化学领域，特别属于e-胡萝卜素的制备色谱分离精制方法。
背景技术：
13 -胡萝卜素(beta-Carotene)是一种重要的天然食用色素，广泛存在于植物、藻 类和真菌中。p-胡萝卜素是维生素A的前体，具有抑制细胞变异、结合活性氧抗氧化、捕获 自由基、增强机体免疫力、抵抗力、降低心血管疾病和癌症的发生概率等作用。P-胡萝卜 素的分子式Q。H^分子量536. 88，熔点183°C。纯品为深红色或暗红色、有光泽的斜方六 面体或结晶状粉末，对氧、热及光不稳定。易溶于二硫化碳、苯、己烷、氯仿、植物油等有机溶
剂，微溶于甲醇和乙醇，不溶于水、丙二醇、甘油、酸和碱等。
<formula>formula see original document page 3</formula>
|3-胡萝卜素属于天然产物，对于提取法制备|3-胡萝卜素而言，提取物成分复 杂，分离精制一直是影响产品质量的关键步骤。P-胡萝卜素的分离精制方法有常规的溶剂 结晶法、超临界二氧化碳萃取富集法等，而常规的柱层析制备色谱采用简单的管状柱，填充 大颗粒的无定型填料，柱效低、不稳定、重现性差，而且应用洗脱展开技术又需要大量的流 动相溶剂，导致收集馏分中产物浓度低、后处理工作量大等弊端。采用柱层析的工艺很难大 规模生产，此是制约工业化的瓶颈之一。 随着制药、生物化工等行业的迅速发展，制备型液相色谱分离技术得到越来越广 泛的开发和应用，已成为分离和纯化复杂混合物的重要方法，尤其适用于天然产物的分离。 动态轴向压縮色谱(Dynamic Axial Compression, DAC)技术解决了制备技术的放大问题， 它具有成本低、寿命长、柱效高、对称性和重复性好的特点。实际上。动态轴向压縮色谱就 是放大数百倍至数千倍的制备型高效液相色谱，可以按HPI C色谱条件直接进行放大，节约 了时间和成本。目前世界上的动态轴向压縮色谱的柱直径已达1. 6m，而柱床内的硅胶要经 数十次过柱才予以更换，满足了装填出稳定、高效的大直径柱用于大规模生产的需求。
动态轴向压縮色谱技术已成功用于天然植物提取、合成药物、蛋白质和多肽的分 离制备，其基本上主宰了整个制备型色谱柱市场，成为工业纯化的专用色谱设备。
发明内容
本发明的目的是提供一种13 -胡萝卜素的制备色谱分离精制方法。
本发明解决其技术问题所采取的技术方案是提取得到的天然P-胡萝卜素粗
品，采用动态轴向压縮色谱技术分离纯化而得到P-胡萝卜素纯品。 所述的天然|3 _胡萝卜素粗品是指采用提取方法得到的，其中13 -胡萝卜素含量 为20-90%。 所述的动态轴向压縮色谱，依据天然P-胡萝卜素粗品的分离量，采用动态轴向 压縮色谱的柱直径10-1600mm，柱长度100-2000mm，填充床高度0mm-1600mm，维持压力 l-150MPa;所用填料为5-50iim的硅胶，流动相为正己烷、正己烷/乙醚二90 : 10(V/V)、 正己烷/乙酸乙酯=95 : 5(V/V)等。使用HPLC检测含有|3-胡萝卜素的馏分，合并含有 P-胡萝卜素的馏分，浓縮除溶剂，残留物用无水乙醇重结晶而得到P-胡萝卜素纯品。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详述 实施例1 :一个直径20cm动态轴向压縮色谱柱，装填25iim的硅胶，柱床高度 25cm。 300g含量25X的P _胡萝卜素溶解于120mL正己烷中，加入到动态轴向压縮色谱柱 中，洗脱剂为正己烷/乙醚=90 : 10，流速100ml/min，洗脱完毕共用时间40min。 HPLC检 测后，合并含有P-胡萝卜素的馏分，浓縮除溶剂，得到73g深红色|3-胡萝卜素，产品纯度 96. 5%，收率97%。 所得到的|3-胡萝卜素加入无水乙醇，搅拌溶解后，密闭静置过夜析晶，过滤收集 结晶沉淀，滤饼用乙醇洗涤，干燥后70g得到P-胡萝卜素晶体。高压液相色谱分析产品 P-胡萝卜素的含量为98. 3%，收率96%。 实施例2 :—个直径32cm动态轴向压縮色谱柱，装填25iim的硅胶，柱床高度 50cm。 1500g含量30X的P _胡萝卜素溶解于300mL正己烷中，加入到动态轴向压縮色谱 柱中，洗脱剂为正己烷/乙醚=90 : 10，流速200ml/min，洗脱完毕共用时间70min。 HPLC 检测后，合并含有P-胡萝卜素的馏分，浓縮除溶剂，得到437g深红色|3-胡萝卜素，产品 纯度96%，收率97%。 所得到的|3-胡萝卜素加入无水乙醇，搅拌溶解后，密闭静置过夜析晶，过滤收集 结晶沉淀，滤饼用乙醇洗涤，干燥后419g得到P-胡萝卜素晶体。高压液相色谱分析产品 P-胡萝卜素的含量为98. 1%，收率96%。
权利要求
一种β-胡萝卜素的制备色谱分离精制方法，其特征在于提取得到的天然β-胡萝卜素粗品经柱色谱分离纯化、浓缩、结晶而得到β-胡萝卜素纯品。
2. 根据权利要求l所述的P-胡萝卜素的制备色谱分离精制方法，其特征在于天然 P _胡萝卜素粗品是指采用提取方法得到的，其中13 -胡萝卜素含量为20-90%。
3. 根据权利要求l所述的P-胡萝卜素的制备色谱分离精制方法，其特征在于采用 动态轴向压縮色谱技术完成分离纯化，动态轴向压縮色谱的柱直径10-1600mm，柱长度 100-2000咖，±真充床高度0mm-1600mm，维持压力l-150MPa。
4. 根据权利要求l所述的13-胡萝卜素的制备色谱分离精制方法，其特征在于所用填 料为5-50iim的硅胶，流动相为正己烷、正己烷/乙醚=90 : 10(V/V)、正己烷/乙酸乙酯 =95:5 (V/V)。
全文摘要
本发明属于一种β-胡萝卜素的制备色谱分离精制方法，主要步骤是提取得到的天然β-胡萝卜素粗品经柱色谱分离纯化、浓缩、结晶而得到β-胡萝卜素纯品。主要特征是采用动态轴向压缩色谱技术完成分离纯化。该方法收率高，能得到含量98％以上的β-胡萝卜素纯品，而柱填料能重复使用，分离效率高，利于大规模工业生产制备。
文档编号B01D15/30GK101768098SQ200910028639
公开日2010年7月7日 申请日期2009年1月7日 优先权日2009年1月7日
发明者乔梁, 乔维汉, 张哲 申请人:乔维汉;乔梁;张哲