专利名称：一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法
技术领域：
本发明涉及一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法。
背景技术：
蛇足石杉(Huperzia serrata)为石杉科石杉属蕨类植物，又名千层塔。石杉科植 物有5个属26个种，我国除了蛇足石杉外，还有华南马尾杉、长柄石杉、中间石杉、长白山石 杉、四川石杉、湖北石杉、闽浙马尾杉、广东马尾杉、马尾杉、狭叶马尾杉、龙岩马尾杉、矮小 马尾杉等13种。据有关分析表明，我国的上述植物基本都含有石杉碱甲，它们均是石杉碱 甲的药物资源。石杉碱甲在植物中的含量在0. 0003% -0. 006%间不等，以蛇足石杉含量和 蕴藏量相对较多。 蛇足石杉是石杉碱甲提取最常用的植物，它的适应性较强，资源十分丰富。全国除 西北地区部分省区、华北地区外均有分布。亚洲其它国家或地区(如日本、朝鲜、泰国、中南 半岛、印度、尼泊尔、缅甸、斯里兰卡、菲律宾、马来西亚、印度尼西亚等)、太平洋地区、俄罗 斯、大洋洲、中美洲有分布。 据初步估计，仅在武陵山区一带，蛇足石杉植物原料年收购量可达150-200吨，按 提取率万分之五计算，石杉碱甲纯品年产量可达7. 5-10kg。 随着社会的发展，人口老龄化速度正在加快，使老年性痴呆症的发病率相对上升。 目前，欧洲，日本和美国80岁以上的人口中约20%以上的人患有此病。全世界65岁以上的 人口中有5000多万人患有不同种类的痴呆症，其发病率约为5%。据预测，到2020年痴呆 病人将增加50%。我国近几年此病的发病率也在不断增加。据国家药监局南方医药经济 研究所所作的一项调查统计表明，目前中国约500万AD患者，其中55岁以上人群中的痴呆 发病率为2. 57%，65岁以上人群中的发病率为4.6%，75岁以上人群中，患病率为7. 49%。 总体患者中就诊率仅为22.8%。因此寻找有效的药物预防和治疗早老年痴呆症已成为药物 学家和临床医学工作者的迫切任务。 蛇足石杉提取物石杉碱甲作为第二代乙酰胆碱醋酶抑制剂，由于其独特的药理特 征和低毒性，越来越引起人们的高度重视。目前，石杉碱甲作为食品添加剂和营养保健品已 在美国互联网上销售，用于提高记忆功能，在国内，它已作为治疗AD的新药被批准上市。
虽然自1985年以来，国内外已经提出了多种化学合成石杉碱甲的方法，但由于它 的结构复杂，使其化学合成的成本远高于植物提取，在含有石杉碱甲的石杉科植物中，以蛇 足石杉中石杉碱甲的含量和蕴藏量相对较多。但石杉碱甲在蛇足石杉的含量也仅为万分之
几，并且蛇足石杉植物来源困难且生长周期长达8-10年，造成了石杉碱甲的原料药价格昂
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发明内容
本发明的目的是针对现行的收率较低，成本较高，市场竞争力弱的调制方法进行 改进，建立一条具有工业化可操作性的从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法。
本发明的目的是这样实现的一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法，其特 征在于包括以下步骤 a.提取取蛇足石杉用2%醋酸溶液搅拌提取；
b.调碱用氨水调提取液pH为9，过滤； c.大孔吸附树脂(SP825型)分离将滤液用大孔吸附树脂分离；收集目标物浓 縮，干燥，得到石杉碱甲粗品I ; d.碱性氧化铝柱层析将石杉碱甲粗品I用氯仿溶解；用氯仿甲醇洗脱；收集 目标物浓縮，干燥，得到石杉碱甲粗品II ; e.腈基键合硅胶制备色谱将石杉碱甲粗品II用40%甲醇溶解；用40%甲醇洗 脱；收集目标物浓縮，干燥，得到石杉碱甲精品。 本发明一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法，其特征在于包括以下步骤
a.提取取粉碎目数为20的蛇足石杉，在室温条件下，用2%醋酸溶液搅拌提取2 小时，提取4次；三四次提取液作为循环提取溶剂；
b.调碱用氨水调提取液pH为9，过滤； c.大孔吸附树脂(SP825型)分离将滤液用大孔吸附树脂分离；用90%甲醇洗 脱；收集目标物浓縮，干燥，得到石杉碱甲粗品I ; d.碱性氧化铝柱层析将石杉碱甲粗品I用氯仿溶解；用氯仿甲醇(96 : 4，体 积比)洗脱；收集目标物浓縮，干燥，得到石杉碱甲粗品II ; e.腈基键合硅胶制备色谱将石杉碱甲粗品II用40%甲醇溶解；用40%甲醇洗 脱；收集目标物浓縮，干燥，得到石杉碱甲精品。 本发明一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法采用2%醋酸作为提取溶剂， 代替传统工艺中所用的1%硫酸或盐酸对环境污染相对降低；与传统方法相比，本工艺采 用新的大孔吸附树脂材料(SP825型)、正反相色谱组合(碱性氧化铝柱层析与腈基键合硅 胶加压制备色谱组合)的方法，产品纯度能达到98.0%以上，产品的回收率达到75%以上，
且提高了生产效率。 本发明的有益效果是由于采用新的提取工艺，通过简化操作、减少损失、提高产 率，降低成本，增强产品的市场竞争能力。
附图1为石杉碱甲腈基键合硅胶制备色谱图。
附图2为98 %石杉碱甲HPLC色谱图
具体实施例方式
下面通过实施例对本发明进一步说明。
实施例1 取50g粉碎目数为20目的蛇足石杉，在室温条件下，用375mL2X醋酸溶液搅拌提 取2小时，提取4次。三四次提取液作为循环提取溶剂，用氨水调提取液pH为9，过滤。
SP825大孔吸附树脂柱湿法装于玻璃柱中，按厂家提供个方法进行预处理后，将 pH为9. 0提取液按6BV/h速度上柱，TLC监测上样终点。饱和后用90%甲醇为洗脱剂，流速6BV/h。收集含石杉碱甲部分的洗脱液，真空快速浓縮，干燥，得石杉碱甲粗品I。
200 300目碱性氧化铝用流动相湿法装于40*300不锈钢层析柱中，石杉碱甲粗 品I 3390毫克溶于溶于氯仿中进料，上样量为9mg粗品/ml柱床，上柱液流速6BV/h。氯 仿甲醇(96 : 4，体积比)洗脱，洗脱流速6BV/h， TLC监测，收集含石杉碱甲部分的洗脱 液，真空快速浓縮，干燥，得石杉碱甲粗品II。 称取100克25 45 ii m的腈基键合硅胶，甲醇湿法装于10*150不锈钢静态轴向 压縮柱中，手动液压并固定色谱床，相成约为50*280的制备色谱床。石杉碱甲粗品115. 10 毫克溶于40%的甲醇水溶液中进样，40%的甲醇水溶液为流动相，检测波长220nm。收集石 杉碱甲峰对应洗脱液，合并浓縮，干燥。得石杉碱甲精品。
实施例2 称取原料粉末8Kg装入100升多功能提取器中，加入60升2%醋酸，常温搅拌提 取2h，过滤，提取4次，合并4次提取液，得提取液总体积为231升。用氨水调提取液pH为 9. O，过滤。 SP825大孔吸附树脂柱湿法装于玻璃柱中，按厂家提供的方法进行预处理后，将 pH为9. 0提取液按6BV/h速度上柱，TLC监测上样终点。饱和后用90%甲醇为洗脱剂，流 速6BV/h。收集含石杉碱甲部分的洗脱液，真空快速浓縮，干燥，得石杉碱甲粗品I。
200 300目碱性氧化铝用流动相湿法装于110*1200不锈钢层析柱中，石杉碱甲 粗品I103克溶于溶于氯仿中进料，氯仿甲醇(96 : 4，体积比)洗脱，TLC监测，收集含石 杉碱甲部分的洗脱液，真空快速浓縮，干燥，得石杉碱甲粗品II。 称取360克25 45 ii m的腈基键合硅胶，甲醇湿法装于50*500不锈钢静态轴向 压縮柱中，手动液压并固定色谱床，相成约为50*280的制备色谱床。石杉碱甲粗品112. 8 克溶于40%的甲醇水溶液中进样，40%的甲醇水溶液为流动相，检测波长220nm。收集石杉 碱甲峰对应洗脱液，合并浓縮，干燥，得石杉碱甲精品。
实施例3 称取原料粉末200Kg装入2000升提取罐中，加入1500升2%醋酸，常温搅拌提取 2h，过滤，提取4次，合并4次提取液。用氨水调提取液pH为9. 0。 SP825大孔吸附树脂柱湿法装于不锈钢树脂柱中，按厂家提供的方法进行预处理 后，将pH9. 0提取液按6BV/h速度上柱，TLC监测上样终点。饱和后用90%甲醇为洗脱剂， 流速6BV/h。收集含石杉碱甲部分的洗脱液，真空快速浓縮，干燥，得石杉碱甲粗品I。
200 300目碱性氧化铝用流动相湿法装于110*1200不锈钢层析柱中，石杉碱甲 粗品I分多次进行碱性氧化铝柱层析分离，每次约115克溶于溶于氯仿中进料，氯仿甲醇 (96 : 4)洗脱，TLC监测，收集含石杉碱甲部分的洗脱液，真空快速浓縮，干燥。得石杉碱甲 粗品II。 称取1800克25 45 ii m的腈基键合硅胶，甲醇湿法装于100*500不锈钢静态轴 向压縮柱中，手动液压并固定色谱床，相成约为100*350的制备色谱床。石杉碱甲粗品II 分多次进行制备色谱纯化，每次约18. 5克溶于40%的甲醇水溶液中进样，40%的甲醇水溶 液为流动相，检测波长220nm。收集石杉碱甲峰对应洗脱液，合并浓縮，干燥，得石杉碱甲精
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权利要求
一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法，其特征在于包括以下步骤a.提取取蛇足石杉用2％醋酸溶液搅拌提取；b.调碱用氨水调提取液pH为9，过滤；c.大孔吸附树脂(SP825型)分离将滤液用大孔吸附树脂分离；收集目标物浓缩，干燥，得到石杉碱甲粗品I；d.碱性氧化铝柱层析将石杉碱甲粗品I用氯仿溶解；用氯仿∶甲醇洗脱；收集目标物浓缩，干燥，得到石杉碱甲粗品II；e.腈基键合硅胶制备色谱将石杉碱甲粗品II用40％甲醇溶解；用40％甲醇洗脱；收集目标物浓缩，干燥，得到石杉碱甲精品。
2. 按照权利要l所述的一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法，其特征在于所述 的步骤a.提取取粉碎目数为20的蛇足石杉，在室温条件下，用2%醋酸溶液搅拌提取2小 时，提取4次；三四次提取液作为循环提取溶剂。
3. 按照权利要1所述的一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法，其特征在于所述的步骤b.调碱用氨水调提取液pH为9，过滤。
4. 按照权利要l所述的一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法，其特征在于所述 的步骤c.大孔吸附树脂(SP825型)分离将滤液用大孔吸附树脂分离；用90%甲醇洗脱；收集目标物浓縮，干燥，得到石杉碱甲粗品I。
5. 按照权利要l所述的一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法，其特征在于所述的步骤d.碱性氧化铝柱层析将石杉碱甲粗品I用氯仿溶解；用氯仿甲醇(96 : 4，体积 比)洗脱；收集目标物浓縮，干燥，得到石杉碱甲粗品II。
全文摘要
本发明涉及一种从蛇足石杉中提取分离石杉碱甲的方法。本发明的目的是针对现行的收率较低，成本较高，市场竞争力弱进行改进，建立一条具有工业化可操作性的从蛇足石杉粉中提取分离石杉碱甲的方法。包括以下步骤原料粉碎→2％醋酸提取→SP825大孔吸附树脂分离→碱性氧化铝柱层析分离→腈基键合硅胶制备色谱纯化→浓缩干燥→成品。本发明的有益效果是由于采用新的提取工艺，通过简化操作、减少损失、提高产率，降低成本，增强产品的市场竞争能力。
文档编号B01J20/22GK101759641SQ201010028988
公开日2010年6月30日 申请日期2010年1月12日 优先权日2010年1月12日
发明者向极钎, 李红英, 杨永康, 王发松, 龙澜 申请人:恩施清江生物工程有限公司