一种动物组织样品简易研磨方法与流程

文档序号:12354558阅读:2063来源:国知局

本发明涉及组织样品研磨领域,特别是涉及一种动物组织样品简易研磨方法。



背景技术:

目前,动物实验过程中需要将动物组织如:脾、肝等组织切碎研磨,用以检测化验。常用的组织研磨器具有电动组织研磨器、玻璃组织研磨器、研钵等,各种研磨装置操作各有不同,都可以达到研磨效果,但是这些装置都属专业器材,需要从专业器材商处购买,操作条件严格,一般在专业实验室应用,不适合在基层一线使用。



技术实现要素:

本发明的目的是解决现有组织样品研磨技术中存在的部分问题,提供一种动物组织样品简易研磨方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的:

一种动物组织样品简易研磨方法,包括如下步骤:

(1)将处理后的瓶盖朝上放置桌面,移取样品处理液置于瓶盖内;

(2)将前处理过的铜网置于瓶盖内;

(3)取组织样品放于步骤(2)的铜网中央;

(4)手拿离心管,管盖朝下,前后挤压研磨组织样品;

(5)研磨完毕,取走铜网,瓶盖中即为组织样品细胞混悬液。

优选地,所述步骤(1)中的处理为先用自来水冲洗,然后用蒸馏水或矿泉水冲洗。

优选地,所述步骤(1)中的样品处理液为裂解液或缓冲液。

优选地,所述样品处理液的体积为200-400uL,采用移液枪移取。

优选地,所述步骤(2)中的前处理为高压灭菌后烘干;所述铜网为80目。

优选地,所述步骤(3)中组织样品的体积为黄豆粒大小。

优选地,所述步骤(4)中研磨次数为8-15次。

优选地,所述步骤(4)中研磨次数为10次。

优选地,所述步骤(4)中研磨时需要用眼科镊固定铜网;所述眼科镊需要高压灭菌烘干后使用。

优选地,所述步骤(5)中的瓶盖用84消毒液浸泡2小时后,依次经自来水、蒸馏水或矿泉水冲洗后回收待用。

本发明的有益效果:本发明取材容易:瓶盖易得,铜网市场易购买,而常规方法所用研磨器、匀浆仪及其耗材只能从专业器材商处购买;成本低:铜网、瓶盖较研磨器、匀浆仪及其耗材价格便宜;处理方便,耗时短;效果与常规方法相当。本申请的研磨过程在室温下即可,对温度没有特殊要求,易于操作。研磨质量与目数有关系,实验证明80目铜网为最合适网孔,所以选择80目。80目铜网为市售铜网,应该是标准规格。由于铜网软硬度合适,所以只选铜网。瓶盖材质无要求,瓶盖一般都耐酸碱,搜集矿泉水瓶或饮料瓶瓶盖即可,其中新开矿泉水瓶盖可直接使用,饮料瓶盖可经自来水冲洗,然后蒸馏水或矿泉水冲洗即可使用,耗材简单,节省费用。

具体实施方式

为了更好地说明本发明,下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

一种动物组织样品简易研磨方法,包括如下步骤:

(1)将处理后的瓶盖朝上放置桌面,移取样品处理液置于瓶盖内;

(2)将前处理过的铜网置于瓶盖内;

(3)取组织样品放于步骤(2)的铜网中央;

(4)手拿0.5mL离心管,管盖朝下,前后挤压研磨组织样品;

(5)研磨完毕,取走铜网,瓶盖中即为组织样品细胞混悬液,把瓶盖中组织样品细胞混悬液用移液器全部吸入1.5mL离心管中即可进行下一步核酸提取实验,或者放入4摄氏度冰箱保存备用,保存时间不超过24小时,建议处理后立即提取核酸。

所述步骤(1)中的处理为先用自来水冲洗,然后用蒸馏水或矿泉水冲洗。

所述步骤(1)中的样品处理液为裂解液或缓冲液。所述样品处理液的体积为200uL或400uL,例如400uL裂解液(提取RNA,该裂解液为本领域常规裂解液即可),200uL磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液,提取DNA);采用移液枪移取。所述步骤(2)中的前处理为高压灭菌后烘干;所述铜网为80目,按照瓶盖大小剪成圆形或方形,以小于瓶盖内圆直径为宜。所述步骤(3)中组织样品的体积为黄豆粒大小,组织样品冰柜取出后,直接剪下所需大小即可。所述步骤(4)中研磨次数平均为10次。所述步骤(4)中研磨时需要用眼科镊固定铜网;所述眼科镊需要高压灭菌烘干后使用。所述步骤(5)中的瓶盖用84消毒液浸泡2小时后,依次经自来水、蒸馏水或矿泉水冲洗后回收待用;所述84消毒液的浓度为原液/水的体积比为1:9。本方法中的离心管均需高压灭菌烘干后使用。上述研磨过程在室温下即可,对温度没有特殊要求。

实例对比

1、肺脏组织的研磨处理,用探针法荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒(用快速DNA提取检测试剂盒提取DNA),相关数据如下表所示:

本实施例中所采用的本申请的方法需取200uL磷酸缓冲盐溶液置于瓶盖内,研磨次数为10次,时间为30秒。

2、淋巴结的研磨处理,用探针法荧光定量PCR方法检测猪伪狂犬病毒和猪瘟病毒(用TRNzol总RNA提取试剂提取RNA),相关数据如下表所示。

注:RNA溶液的A260/A280的比值是一种RNA纯度检测方法,比值范围一般为1.8-2.1。

本实施例中所采用的本申请的方法需取400uL裂解液置于瓶盖内,研磨次数为12次,时间为30秒。

从上述两个实例可以看出,本申请的方法能够快速的完成研磨过程,且耗材简单易寻,节省费用,精确度更高。

以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内,可轻易想到的变化或替换,都应该涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。

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