设备和耗材价格经济，且由于体系无固体支撑体避免了样品的不可能吸附和变性损失；所用溶剂体系利用甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇等极性醇与无机盐组成双水相，价格更低，更加环保，此外，多数亲水有机溶剂的沸点低于水，可通过蒸馏或精馏的方式将其有效回收，从而省去了传统双水相体系的反萃步骤，大幅度地降低萃取剂的损失和系统的操作成本。最重要的是该类体系与传统的有机/水两相体系相比，极性更强，黏度更低，分层时间显著缩短，可以有效避免乳化现象，增加在逆流色谱仪中的固定相保留，有利于极性化合物的分离。优选的洗脱方式使溶剂体系在高速逆流色谱仪分离柱中有更高的固定相保留，可有效增加样品间的分离度。本方法适用于各类中药粗体物、化工产物中强极性化合物的分离制备。
【附图说明】
[0020]图1正丁醇-乙醇-饱和硫酸铵-水(0.6:0.4:1:1)体系分离咖啡酰奎尼酸同分异构体的逆流色谱图。
[0021]图2正丁醇-乙醇-饱和硫酸铵-水(0.6:0.4:1:1)体系二次进样分离咖啡酰奎尼酸同分异构体的逆流色谱图。
[0022]图3正丁醇-水(I:1)体系分离咖啡酰奎尼酸同分异构体的逆流色谱图的对照图。
【具体实施方式】
[0023]实施例1
[0024]采用J-型高速逆流色谱仪配套三个串联的螺旋管柱，选取正丁醇-乙醇-硫酸铵-水体系，以上相为流动相由尾端向首端洗脱分离咖啡酰奎尼酸(图1)。
[0025]首先用去离子水配制硫酸铵饱和溶液，之后以0.6:0.4:1:1体系比将正丁醇、乙醇、饱和硫酸铵溶液和水配制于分液漏斗中，摇匀后静止分层。待平衡2小时后，将上相和下相分开，取上相作为流动相，下相作为固定相。
[0026]称取1-咖啡酰奎尼酸、3-咖啡酰奎尼酸、5-咖啡酰奎尼酸、I, 3- 二咖啡酰奎尼酸各2mg溶于5mL流动相中。
[0027]采用J-型半制备型高速逆流色谱仪，并配有泵、20mL进样阀、紫外检测器及色谱工作站。其三个串联的多层螺旋管柱容量为210mL。
[0028]先用固定相(下相)充满整个管柱，调整主机转速为850rpm，柱温40°C，以1.0mL/min的流速将流动相(上相)由尾端到首端泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样；然后根据检测器紫外谱图接收目标化合物。
[0029]实施例2
[0030]采用J-型高速逆流色谱仪配套三个串联的螺旋管柱，选取正丁醇-乙醇-硫酸铵-水体系，二次进样洗脱分离咖啡酰奎尼酸(图2)。
[0031]首先用去离子水配制硫酸铵饱和溶液，之后以0.6:0.4:1:1体系比将正丁醇、乙醇、饱和硫酸铵溶液和水配制于分液漏斗中，摇匀后静止分层。待平衡2小时后，将上相和下相分开，取上相作为流动相，下相作为固定相。
[0032]称取1-咖啡酰奎尼酸、3-咖啡酰奎尼酸、5-咖啡酰奎尼酸、I, 3- 二咖啡酰奎尼酸各4mg溶于1mL流动相中，分成两等份。
[0033]采用J-型半制备型高速逆流色谱仪，并配有泵、20mL进样阀、紫外检测器及色谱工作站。其三个串联的多层螺旋管柱容量为210mL。
[0034]先用固定相(下相)充满整个管柱，调整主机转速为850rpm，柱温40°C，以1.0mL/min的流速将流动相(上相)由尾端到首端泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样；然后根据检测器紫外谱图接收目标化合物；体系运行220min时，由进样阀二次进样，根据检测器接收目标化合物。
[0035]实施例3
[0036]采用J-型高速逆流色谱仪配套三个串联的螺旋管柱，选取正丁醇-乙醇-硫酸铵-水体系，以上相为流动相由尾端向首端洗脱分离咖啡酰奎尼酸(图3)。
[0037]首先用去离子水配制硫酸铵饱和溶液，之后以1:0:0:1体系比将正丁醇、乙醇、饱和硫酸铵溶液和水配制于分液漏斗中，摇匀后静止分层。待平衡2小时后，将上相和下相分开，取上相作为流动相，下相作为固定相。
[0038]称取1-咖啡酰奎尼酸、3-咖啡酰奎尼酸、5-咖啡酰奎尼酸、I, 3- 二咖啡酰奎尼酸各2mg溶于5mL流动相中。
[0039]采用J-型半制备型高速逆流色谱仪，并配有泵、20mL进样阀、紫外检测器及色谱工作站。其三个串联的多层螺旋管柱容量为210mL。
[0040]先用固定相(上相)充满整个管柱，调整主机转速为850rpm，柱温40°C，以1.0mL/min的流速将流动相(下相)由首端到尾端泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样；然后根据检测器紫外谱图接收目标化合物。
【主权项】
1.一种新型双水相高速逆流色谱，是将醇水双相新型双水相溶剂体系的一相作为固定相，另一相作为流动相应用于高速逆流色谱，其特征在于:所述的新型双水相溶剂体系由中等极性有机溶剂、亲水性醇或酮、无机盐和水组成。
2.根据权利要求1所述的新型双水相高速逆流色谱，其特征在于:所述的高速逆流色谱仪为J-型半制备高速逆流色谱仪，配备三个串联的螺旋管柱，柱体积210mL，螺旋管自转半径和公转半径之比(β值)0.5-0.8。
3.根据权利要求1所述的新型双水相高速逆流色谱，其特征在于:所述新型双水相溶剂体系中的中等极性有机溶剂为正丁醇，亲水性醇或酮为乙醇，无机盐为饱和硫酸铵和水组成，它们的体积比在(0-10):(1-10):10:10 (V:V)的范围内配制。
4.根据权利要求3所述的新型双水相高速逆流色谱，其特征在于:所述新型双水相体系配置温度和分配系数测定温度一致，为30-40°C。
5.根据权利要求2或3中所述的新型双水相高速逆流色谱，其特征在于:所述的J-型螺旋管高速逆流色谱仪和所述的两组新型双水相溶剂体系优选洗脱方式，采用下相为流动相由首端向尾端洗脱或上相为流动相由尾端向首端洗脱方式。
6.根据权利要求5所述的新型双水相高速逆流色谱，其特征在于:所述的的洗脱方式中，高速逆流色谱仪的运行参数为:温度在30-40°C，开启高速逆流色谱仪，主机正转或反转，主机转速为700-900rpm，并以0.6-1.5mL/min的流速将流动相泵入分离柱内，整个体系建立动态平衡，可通过进样阀注入样品。
【专利摘要】本发明涉及一种使用新型双水相溶剂体系的高速逆流色谱新方法，用于强极性天然产物和化工产品的分离制备。包括：（1）新型双水相溶剂体系由亲水性醇、无机盐和水组成双相系统，两相溶液中均含一定量水，醇水上相极性远大于有机/水两相体系中有机上相；（2）与传统双水相体系相比，该体系黏度低，固定相保留高，可实现多次进样稳定运行；（3）所用设备和耗材成本低廉，馏分后续处理过程简单；（4）可与其它色谱方法偶合联用。该方法将醇水双相溶剂体系应用于J-型高速逆流色谱仪，是对现有高速逆流色谱溶剂体系的重要补充，在强极性天然产物和化工产品的分离方面，尤其是对强极性中药药效成分，不稳定成分的分离制备，具有明显优势。
【IPC分类】B01D15-08
【公开号】CN104707358
【申请号】CN201310690915
【发明人】肖红斌, 刘丹, 邹晓伟, 高明哲
【申请人】中国科学院大连化学物理研究所
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2013年12月13日