集成二维凝胶电泳的制作方法

专利名称：集成二维凝胶电泳的制作方法
技术领域：
本发明涉及使用二维凝胶电泳分离复杂蛋白质样品的电泳组件或一次性装置，和使用二维凝胶电泳分离复杂蛋白质样品的方法。
本发明涉及改进的一次性装置和加工所述装置的方法；提供在基于二维凝胶电泳的蛋白质组分析中，用于分离复杂蛋白样品的普遍接受的人工执行步骤的简便和有效的集成方法，从而补充和拓展之前的EP申请1712903的范围，该申请中也介绍了一种新方法。
背景技术：
二维平板凝胶电泳仍是蛋白质组学的最常用方法，尽管替代的层析法正越来越流行，如果经过多年的改进，解决了现在存在的其它限制，这种情况可能仍会持续多年。具体来说，它仍然是耗时且工作繁重的过程，需要训练有素的人员，结果质量主要取决于这些人员之手。正是因为涉及许多人工工作，确实很难做到再现性，然而另一方面凝胶绝大多数都是用来比较的。虽然运行情况可以完全再现，因为通过正确地启动和电源这些是可以控制的，并且新缓冲系统增强了凝胶稳定性和性能，但是由保持在控制下的各种参数的变化产生精确性和一致性的问题。某些问题是例如，就样品量而言的样品加载和再水化，就匀质性、灌制和反应速度、尤其是粒度而言的胶条损失和匀质性、具有损坏和污染风险的胶条处理、胶条与凝胶的不精确或缓慢偶联、凝胶灌制和聚合、空气敏感度、运行开始前完成的时间、随后还导致场不连续的胶条气泡风险、运行期间温度升高、pH和粘度变化、缓冲容量的损失。
详细描述整个方法超出了本发明范围，因为可从文献中检索到许多综述。然而为了帮助理解，在下文中将给出简单回顾。
通常第一维分离由等电聚焦(IEF)组成，其中在长而窄的具有条形并以此命名的支撑凝胶中，蛋白质根据它们的等电点在pH梯度中分离，通常是固定的。市售的胶条通常是以半干燥状态提供的，在分析之前它们必须用样品溶液再水化。该操作需要几个小时到填充的过夜，通常在矿物油下进行以防止样品溶液中存在的尿素的干燥和结晶。基于相同的原因，IEF也在矿物油下在相同或不同的盘中进行，胶条与两侧的两个电极接触，在这两个电极之间施加高电压。IEF之后，必须平衡胶条，这意味着聚焦到胶条中的蛋白质必须先被烷基化，然后与正十二烷基硫酸钠(SDS)化合，以随后转移到第二维凝胶中并根据大小分离。还原/烷基化可以由各种试剂实现，可以选择在再水化之前的样品制备期间执行这个步骤，虽然这有可能导致等电点的移动。然而SDS平衡只能在IEF之后进行，因此胶条在包含SDS的平衡溶液中精确清洗几分钟。然后将其放置在顶部，与预聚合SDS聚丙烯酰胺凝胶接触，通过在胶条上灌注热琼脂糖溶液实现连接。这通常在两个相互夹紧的玻璃板之间完成，然后放入装有缓冲液的盒中，在盒中跨凝胶施加电压。可形成具有孔隙率梯度的凝胶，以增强第二维中的分辨率。在这完成之后，取出凝胶、固定、染色，并且在与随后的步骤(如切出斑点、消化和质谱分析)最终处理之前除去背景染料。
在理想情况下，希望的是在装载样品之后不需要进一步人工干预，装载样品的方法类似于仪器色谱方法，色谱方法的主要强项是真正自动化和更好的再现性。基于凝胶的方法中的步骤自动化和集成是其它人已经面临的挑战。US6554991 B1中描述了集成的、完全自动化的系统逐步模拟人工的方法，也包括样品制备和条灌制。然而其背后的自动化机械、操作的复杂性和投资需要远远超出其实际和广泛应用，特别是在较小的研究实验室中。US2003/0127331公开了一种系统，其中一旦在两个平板形成的垂直模的底部灌制，胶条不需要在IEF之后移动。应该了解，胶条可以用平衡溶液处理，显然仅从一侧，随后通过将凝胶溶液灌注到模具中直接与胶条接触或在琼脂糖层的顶部，与第二维凝胶相连。然而在SDS从一侧扩散到胶条内部所需的效率和/或平衡时间，以及能否保留第一维中获得的分辨率方面仍存在疑问。因为没有提到聚合方法，传统方法需要的长时间进一步增强了对分辨率损耗的关注。而且形成胶条和添加样品的方式可重复性差，模具底部的密封标签必须在结束时除去的事实是不现实的。在EP 0366897中提出首先通过非导电相变材料的方式将胶条与预聚合凝胶分离，所述材料通过升高温度在IEF之后熔化，将其除去并用其它凝胶介质代替。然而关于平衡步骤没有提及，并且温度对蛋白质和凝胶的作用仍然是此时开启和闭合模具顶部有关的问题。其它胶条和凝胶之间的阻隔方法在WO02/084273A1中提出。其中报道的第一个实施例利用滑动固体屏障当然不是最有利的，因为形成的凝胶可能被这个动作破坏。更为有趣的解决方法是使用由软的可膨胀材料形成的充气辅助阀门，其将胶条与优选预灌制的凝胶分离。阀门占据的空间后来由琼脂糖填充用于连接。在第三个实施例中，胶条侧的半壁用作衬垫，可对其按压也用作凝胶支撑的箔，这样通过改变相对于对面刚性表面的位置来开启和封闭胶条室。在这种情况下，优选在第一维完成时开启胶条室之后引入和聚合凝胶溶液，或者凝胶可以预灌制，很难想象箔需要移动。虽然要求了有可能在某个步骤中用凝胶溶液浸泡胶条，再次优选使用琼脂糖。平衡溶液可以通过装置的刚性部分达到胶条。在不久的将来，纳克斯特基因科学(Nextgen Sciences)会最终将基于这个原理的自动化系统商业化。然而在这个系统中依然存在弱点，第一个表现为与实施例无关的样品固定体积。实际上，在完全再水化胶条之上需要额外的空间，从而允许第一维之后平衡溶液的流动，因此在再水化胶条时，需要过量的样品填充该缝隙。同样的，IEF期间过量液体留在胶条上的事实可导致聚焦干扰和水平冲击，如果除去会导致胶条的干燥。而且，IEF之后灌制凝胶时，可预期由于长时间等待凝胶聚合而造成的分辨率损失和由于丙烯酰胺单体渗入胶条而造成的有害效应，因为除了指定的传统方法之外，没有要求或甚至提及聚合凝胶溶液的方法。这必定是在任何情况下都优选使用琼脂糖的原因。然而琼脂糖会带来新的困扰，例如在熔化之前需要煮沸，以及一旦开始凝胶，将它从所有管和装置中除去的困难。并且还要关注保持平坦的非形变箔形状的效率，这对保证均匀的凝胶厚度很重要。
本发明的一个目的是提出基于二维电泳用于样品分离的电泳组件或一次性装置，一旦样品被加载到装置，其仅要求最少的或优选不要人工干预。
本发明的另一个目的是提出运行所述装置的自动化操作步骤。所提出的是根据权利要求1中的语句，使用二维电泳进行样品分离的电泳组件或一次性装置。
本发明将证实即使按照上述传统方法并仍然在凝胶电泳的一次性装置中使用阀门，可以实现现有技术的进一步改进，提供更廉价、更简单、更快捷、同等集成的解决方法，其分别以一次性装置和处理系统的形式，如下文中所述和所附权利要求中所要求的。

发明内容
参考以下的附图，在下文中给出了本发明系统和方法的实例的简单描述，重点指出可要求保护的与现有技术的不同以及优点。
系统二维电泳系统包括通过软件控制仪器进行一系列自动化操作步骤的一次性核心部分，软件控制仪器的组件也是本发明的一部分，其与方法、一次性形式及其功能结合。根据术语仪器，理解用于操作一次性装置的组件包括缓冲液储器、冷却模块、电极、装管、UV灯泡等。包括至少一个阀门的电泳装置主体是例如应用二元模制技术注射模制的，这表示在两个部件之间不需要组装，从而减少了制造费用。因此这意味着它可以是一次性的，并且从现在开始将它称之为一次性的。主体材料优选选自PMMA、PC、PE、PET、PP或COC，注意材料是UV透明的，其特殊的意图在于将从一个或多个集成在仪器中的灯泡的适当波长照射光直接通过它们，允许凝胶溶液的UV起始快速聚合。阀门软部件的材料优选选自与之前选择的主体材料兼容的TPE(热塑性人造橡胶)，如PTS-Thermoflex(Plastic TechnologyService Ltd，Salisburg SP5 4BZ，UK)或Santoprena(Advanced ElestomerSystems，LP，Akron，Ohio，USA)。这也是UV透明的，模铸成传统平片状，直接与一次性装置的内表面连接。通过在紧邻下方放置的胶条区域留下两个通过一次性主体的裂缝，弹性软部件可通过由仪器进行的外部刚性动作拉伸，从而通过按压胶条/凝胶载体(如凝胶附着的箔或玻璃板)使胶条陷入封闭的密封环境。类似地如果需要，可将裂缝设计在其它位置，以将凝胶室分割成间隔，或者简单封闭任何最终的开放边缘。
另一个软部件集成在一次性装置中作为凝胶区域周围的衬垫杆或环，位于主体内表面和载体箔之间以夹层排列。这可以同时、按照相同的流程、最后使用与上述相同的材料模铸，发现另一个重要功能，允许两个相对表面在施加外部压力时的距离变化。这个距离优选对应于再水化和IEF时的约0.7mm，在平衡、凝胶灌制、聚合和第二维分离时的约1.0mm。
在聚合期间交联到凝胶的载体箔也例如层压到一次性装置上，可在本发明程序之后由用户撕下。
另外，一次性装置的外部尺寸优选按照ANSI SBS(美国国家标准局，生物分子筛选学会127.76±0.25mm×85.48±0.25mm)标准设计，从而有利于自动化操作。
还有一个选择是集成由例如石墨组成的廉价一次性电极，用于第一维分离。或者，电极棒(例如铂制成)穿过一次性装置主体中的孔在末端处与胶条相连，可为仪器的一部分而不是一次性的。优选集成到仪器中的是第二维的电极，在适当的时间插入一次性装置的缓冲液储器中。另一个选择是具有至少一个集成到一次性装置中的廉价电极，例如在阴极，那里氧化还原反应和电极消耗较不重要。
在另一个实施方案中，为了使一次性装置更简单和更紧凑，第二维的缓冲液储器也可为仪器的一部分，在需要时使用衬垫和外部压力的简单方法夹紧到一次性装置上。为了防止小储器和小缓冲体积相关的缓冲能力损失，缓冲液可从上游较大的储器中新鲜循环。许多方法可以避免整个电路保持在施加的电压下，例如使用“停止和开始”间断方法间隔地断开电路，置换缓冲液，或者限制大储器和小储器之间的沟通管道，最终还有通过液体通道分配作为绝缘体的气泡。或者，缓冲液容量的限制可以通过再循环阴极缓冲液和阳极缓冲液来克服，反之亦然。通过这种方法，缓冲液储器可保持很小，并且在运行期间不需要其它的缓冲液。
为了保持载体箔的平整和平坦，尤其重要的是保证凝胶的均匀性和有效的冷却(这两者对于再重复性都是基本的)，一次性装置几何与其在几何方面相配的仪器冷却模块可由多孔陶瓷、金属或其它导热合金制造，通过它们可施加真空吸力。同时这代表将一次性装置稳定固定到仪器中的有利方法，从而可在凝胶灌制时通过冷却模块的机械旋转可以将其旋转90°。
一次性装置一般不包含IEF胶条，因此为操作员留下插入具有所需pH范围的胶条的自由，避免在冷却温度运载和存储带有胶条的整个一次性装置的需要。因为提供了指导细节，所以不会发生例如关闭阀门的错误放置，而电极也可用于保持胶条在所需位置上。然而有可能，特别是如果一次性装置如上面所建议的做得更简单、更紧凑时，胶条已经集成到一次性装置，使得可以订购包含不同胶条的各种一次性装置。另一种可能是将胶条附着在箔上，箔与一次性装置主体分开单独运输。在这种情况下，用户需要在例如定位孔的帮助下将这两部分组装在一起。又一个选择是引导胶条穿过覆盖箔中的开口，该开口在之后用带状装置封闭。
另一个可以应用到带阀门实施方案中的组件是在凝胶/缓冲液界面使用膜或叶片。要求保护的是疏水、最终支撑膜的使用，该膜具有材料、厚度、孔尺寸的正确组合，由PET、PE、PP或PES制成，其功能是在平坦垂直灌制时作为液体凝胶溶液的屏障，但是允许聚合凝胶与含SDS缓冲液之间的液体和正常电接触。一个工作实施例是Schleicher&Schuell，Einbeck，DE，(Watman)的通常用于过滤和生物应用的UltranPES(聚醚砜)5KD膜，但是也可以使用其它的膜，或多或少有效地取决于凝胶是否包含SDS的事实。为了使得一次性装置尽可能的简单，可以想象凝胶/缓冲液界面的裂缝仅在凝胶聚合之后产生，为沿着模制一次性装置主体的较薄集成衬套的纵向切口形式，或通过集成到仪器中的叶片穿过硬部件中的裂缝切割软部件材料的方法。当以任何方式使用阀门封闭胶条时，较简单的方法可能是使用与一次性装置主体一起注射模制的软部件，使用与封闭胶条室相同的办法，在灌制和聚合时基于外部促动封闭凝胶室的开口端。另一个简单方法是使带跨过裂缝，带在完成与缓冲液的接触后立即除去。所有解决方法中最简单的是胶条在底部的情况下灌制凝胶，仅剩下胶条侧的外部阀门封闭。


下面参考以下附图给出本发明的系统和流程实例的简单说明，重点是要求保护的与现有技术的区别以及权益。
在图中图1a和图1b概要和非比例的显示了具有封闭阀门和两个可变厚度的二元一次性装置核心部分，厚度分别是一个厚度在再水化和IEF期间，第二个厚度在平衡期间，图2a和2b概要和非比例的显示了第二维凝胶灌制期间的二元一次性装置核心部分的两个可能的实施方案，
图3指出使用合适膜或带密封的凝胶/缓冲液界面处的裂缝，图4指出仅在凝胶灌制和聚合之后，在凝胶/缓冲界面通过集成到仪器的叶片功能产生裂缝的可能方法，图5概要的显示了一个可能的实施方案，其中第二维的缓冲液储器不集成到一次性装置中，而是在需要时被仪器夹紧，缓冲液从上游较大的储器中新鲜循环，以防止与小储器和小存储体积相关的缓冲能力损失。
具体实施例方式
方法的步骤是自动化执行的，通过参照

如下1.除非胶条已经集成在封闭的一次性装置1中，否则将第一凝胶条7插入或将带有胶条7的箔5组装到一次性装置1中。一个可能的替代方案是在设置在两端的两个阀门9和10是关闭的情况下，原位灌制IEF胶条7。阀门通过插入物12和14促动，它们作为仪器一部分(未显示)用于操作一次性装置。
2.在再水化溶液中装载样品，胶条7两侧的两个阀门9和10是关闭的，箔5和覆盖一次性装置主体3内表面的软部件阀门材料11之间的距离为例如0.7mm，直到填满如此产生的胶条室。
3.将冷却模块的温度设为例如30-35℃，等待再水化至少一个小时。
4.运行IEF，在集成的或此时由处理仪器插入的两个电极(未显示)之间施加斜坡高电压，此处控制温度设置在例如20℃。
5.通过释放装置施加到仪器上的压力，将箔5和内表面11之间的图1a所示的距离a(0.7mm)增加到图1b所示的距离b(1.0mm)，同时在外部插入物12和14的协助下进一步伸长软部件阀门9和10，保持胶条7的室的关闭。从图1a的距离a增加到图1b的距离b可由集成衬垫17扩展还原为其原始形状来实现，其由弹性软部件材料制成。在图1a所示的组件中，通过施加外部压力将一次性装置主体3向下压向箔5，这个压力在图1b的组件中被移去。
6.将烷基化/SDS平衡溶液倒入在胶条7顶部生成的例如0.3mm深的通道23，在最后倾空。
7.将整个一次性装置1旋转90°，使它处在图2a和图2b所示的垂直位置。这个移动可通过旋转冷却模块(未显示)实现，通过如上提议的几何配件和通过多孔材料的真空将一次性装置稳定的固定在冷却模块上。
图2a显示在垂直位置的图1b所示的一次性装置的设计，胶条7一侧的阀门10处于关闭状态，而阀门9开启。
8.除非凝胶缓冲界面的裂缝13和15还没有形成或者如果它们由软部件层11或图3所示的附加膜21和22封闭，在底部具有胶条7的图2a实施方案的阀门10必须保持封闭，直到凝胶溶液被灌制和聚合。作为图2b的替代方案，在顶部具有凝胶条7的附加外部阀门27放在一次性装置1的对侧(将箔5和覆盖盘3之间隔开至例如1mm，其为图1b的距离)。
9.通过一次性装置主体3中的孔(未显示)，灌制凝胶溶液以形成第二维分离的凝胶，从而同时获得与胶条7的连接，并通过快速UV引发反应的聚合在例如少于5分钟内完成，由于UV透明一次性装置主体3和层11这是可能的。如果需要，也可灌制梯度凝胶。
10.打开图2a组件中的阀门10或者由图2b组件中的插入物26激活的阀门27，使得运行缓冲液可与凝胶接触进行第二维分离，或者作为替代产生裂缝13和/或15(如果这些仍未由图4所示的叶片功能32产生)。另一种可能是如果裂缝13和15被额外的膜21和22封闭，如图3所示，则立即进行下一个步骤。
11.如果使用开口缓冲液储器，最后将组件旋转回水平位置，其它情况下旋转回原位置不是绝对必须的。如果储器是仪器的一部分，这表示没有集成到一次性装置中，它们现在可以参考图5所示连接在一起，表示为参考号41和42。
12.引入运行的缓冲液，最终循环运行缓冲液，通过在两个储器之间施加电压，在受控温度(例如20℃)下开始第二维运行，电极集成到一次性装置或仪器中。
13.在第二维运行完成之后将一次性装置1从仪器中移去，打开以通过撕掉凝胶附着的箔5除出凝胶。
参考附图的上述方法当然是适合描述本发明的实例，而完全不是限制本发明。用于生产一次性装置(包括阀门的软部件、箔、压缩部分等)的材料类型可以以适当的方式改变。优选在一次性装置中使用UV或光透明材料，使得UV或第二凝胶的光引发聚合是可能的，但是这不应是本发明的限定性因素。另外，可能使用两个、三个或更多个阀门。本发明的一个重要特点当然是一次性装置主体内表面和第一凝胶条附着的箔之间的距离是可变的，这表示第一维分离之后，距离可以由于设置的弹性衬垫而扩大。
围绕胶条的阀门以及覆盖箔和一次性装置内表面之间的距离(例如第一维和第二维分别是0.7mm和1.0mm)的组合使阀门的允许位置数目从两个增加到三个，与现有技术相比提供了重要的有利之处。首先，因为由阀门产生的胶条室体积对应再水化胶条的体积，因此不需要或需要最少的过量样品来再水化胶条。这样，IEF也运行在最佳条件下而没有液体超过胶条的顶部。仅在IEF之后在胶条顶部形成空间，引入流动的平衡溶液，从而也提供了最佳的平衡条件。最后因为需要在胶条之上具有小空间的较厚凝胶，以达到正确的连接，在场均匀性、2D分辨率和可重复性方面进行良好第二维分析，因此在随后的步骤中也提供最佳条件。
不像现有技术，UV引发快速聚合也适用于二维凝胶电泳的领域，选择暴露于光源之前在丙烯酰胺凝胶溶液中稳定的引发剂，该光源的波长范围包含引发剂的吸收光谱。阀门仅用于在密封环境中封闭胶条，而不是作为凝胶和胶条之间的屏障，因为第一维之后凝胶可快速聚合，不需要预灌制。因此，化学物质、存储时间和条件以及IEF聚合后或聚合前的等待时间不再是一个问题。如在先的EP申请1 712 903中公开的，正是因为聚合快速进行，也可以取消使用连接凝胶如琼脂糖等。凝胶溶液现在可以完全填满模具，接触、覆盖和封闭胶条，而这用传统方法，使用过硫酸铵(APS)和N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(TEMED)分别作为自由基聚合的引发剂和催化剂是不可能的。实际上这些试剂必须在最后时刻加入并混合，因为它们在灌制期间立即开始聚合，从而已导致制备问题，而且因为反应缓慢进行，一般需要超过一小时才能完成，第一维期间获得的分辨率损失和丙烯酰胺单体扩散到胶条中，造成与蛋白质的可能交联，成为其它重要的问题。基于同样的原因，灌制梯度凝胶时，快速UV聚合显得特别方便。
参考文献[1]Herbert et al.Electrophoresis 2001，22，2046-205权利要求
1.一种使用二维凝胶电泳分离复杂蛋白质样品的电泳组件或一次性装置，包含载体，例如膜或箔或玻璃板(5)，其具有用于第一维凝胶条(7)的区域和用于第二维凝胶的区域(16)，所述两个区域彼此直接接触，二元主体，由与载体(5)的距离可变的硬部件(3)和薄的弹性软部件层(11)组成，进一步包含至少一个裂缝或开口，用于至少一个阀门的外部促动，其中在通过所述裂缝外部促动所述软部件时，所述阀门表现为沿与所述裂缝一致的载体方向上的可逆性伸展。
2.如权利要求1所述的组件或一次性装置，其特征在于一次性装置主体至少是部分对UV透明的。
3.如权利要求1或2所述的组件或一次性装置，其特征在于通过与所述裂缝对应的所述硬部件(3)中的至少一个裂缝进行外部促动时，位于一次性装置主体内表面的软部件层(11)可朝凝胶载体(5)向下拉伸。
4.如权利要求1-3中任一项所述的组件或一次性装置，其特征在于硬部件(3)包含可用于软部件层的外部促动的至少两个裂缝或开口，作为第一维凝胶条(7)区域两侧的阀门(9，10)和/或在适当位置作为第二维凝胶的阀门。
5.如权利要求1-4中任一项所述的组件或一次性装置，其特征在于一次性装置主体与凝胶载体之间的距离变化可以通过至少一个弹性可压缩/可膨胀密封件或衬垫的方式来获得，所述密封件或衬垫在所述一次性装置主体与载体之间为夹层布置，优选沿着第二维凝胶区域的周界，并且是所述一次性装置的一部分。
6.如权利要求1-5中任一项所述的组件或一次性装置，其特征在于硬部件(3)进一步包含孔或连接配件，用于样品装载、平衡溶液的流动、凝胶溶液的灌制或通风。
7.如权利要求1-6中任一项所述的组件或一次性装置，其特征在于硬部件(3)优选选自PMMA、PC、PE、PET、PP或COC(环烯-共聚物)。
8.如权利要求1-7中任一项所述的组件或一次性装置，其特征在于软部件(11)优选选自与硬部件材料兼容的热塑性弹性体如PTS-Thermoflex或Santoprene，以便可进行二元注射模制，使得第二维凝胶不能粘附于其上。
9.如权利要求1-8中任一项所述的组件或一次性装置，其特征在于一次性装置(1)进一步包括第一维和/或第二维的电极和/或用于外部引入电极的结构。
10.如权利要求1-9中任一项所述的组件或一次性装置，其特征在于一次性装置主体进一步包含在第二维凝胶和运行缓冲液之间界面处的裂缝。
11.如权利要求10所述的组件或一次性装置，其特征在于第二维凝胶和运行缓冲液之间界面处的裂缝由附加膜(21，22)密封。
12.如权利要求11所述的组件或一次性装置，其特征在于附加膜(21，22)具有厚度、孔尺寸和材料的正确组合，其功能是在灌制期间作为液体凝胶溶液的屏障，但允许聚合凝胶和含SDS缓冲液之间的液体正常电接触。(例如PET、PE、PP或PES)
13.如权利要求11或12所述的组件或一次性装置，其特征在于膜是PES(聚醚砜)如Ultran5KD。
14.如权利要求10所述的组件或一次性装置，其特征在于第二维凝胶和运行缓冲液之间界面处的裂缝仅在凝胶聚合之后通过叶片功能的方式产生。
15.如权利要求1-14中任一项所述的组件或一次性装置，其特征在于所述一次性装置的外部尺寸优选根据ANSI SBS(AmericanNational Standards Institute，The Society of Biomolecular Screening127.76±0.25mm×85.48±0.25mm)标准设计，以有利于自动化操作。
16.如权利要求9-15中任一项所述的组件，包括至少一个大的外部缓冲液储器，用于第二维分离的运行缓冲液可从所述大的储器新鲜供应到较小缓冲液储器和/或从较小缓冲液储器再循环，所述较小储器与一次性装置集成或在一次性装置的外部，对应于权利要求9或10的孔、裂缝或开口。
17.如权利要求1-16中任一项所述的组件，其特征在于一次性装置在几何方面与冷却模块上的外部载体侧相配，并优选与其稳定固定，冷却模块由多孔材料如陶瓷、金属或其它导热合金制成，通过多孔材料可以施加真空吸力。
18.在如权利要求1-17中任一项所述的组件或一次性装置中使用二维凝胶电泳分离复杂蛋白质样品的方法，其特征在于样品在再水化溶液中装载到第一维凝胶条上，所述胶条设置在载体上，胶条两侧的阀门关闭，载体和一次性装置主体之间的距离大致对应于再水化胶条的厚度，并且再水化和第一维分离之后，载体和一次性装置主体之间的距离增大，同时进一步向下拉伸胶条两侧的阀门，从而保持胶条环境密封，因此产生胶条上面的自由空间或通道，以允许平衡溶液的流动。
19.如权利要求18所述的方法，其特征在于第二维分离凝胶的凝胶溶液在胶条至少一侧的一个阀门开启的情况下引入，并且载体和一欠性装置主体之间的距离增加，从而同时实现与胶条的连接，随后是UV引发的聚合。
20.如权利要求18或19所述的方法，其特征在于通过使一次性装置在大致垂直位置上来执行第二维凝胶的凝胶溶液的灌制。
21.如权利要求18-20中任一项所述的方法，其特征在于为了进行分离样品的连续分析，载体、优选具有凝胶附着性质的箔或膜与附着的凝胶一起从一次性装置上撕掉。
全文摘要
一种使用二维凝胶电泳分离复杂蛋白质样品的电泳组件或一次性装置，包含具有第一维凝胶条(7)的区域和第二维凝胶的区域(16)的载体，例如膜或箔或玻璃盘(5)，其中所述两个区域彼此直接接触。组件或一次性装置进一步包含二元主体，由硬部件(3)和薄的弹性软部件层(11)组成，其与载体之间的距离可变，载体进一步包含用于至少一个阀门(9，10)的外部制动的至少一个裂缝或开口，其中所述阀门由与所述至少一个裂缝(图1a)相一致的所述软部件材料表示。
文档编号G01N27/447GK101017150SQ200610063648
公开日2007年8月15日 申请日期2006年12月27日 优先权日2005年12月28日
发明者M·科普, R·桑多茨, M·库尔西奥, M·格劳瑟 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司